Técnica do mouse Microcirurgia de infusão para distribuição de substâncias alvejado no SNC via Artéria carótida interna

Resumo

O presente protocolo descreve uma técnica de infusão de microcirurgia de camundongo, que efetivamente fornece substâncias diretamente no cérebro através da artéria carótida interna.

Resumo

Modelos animais de doenças do sistema nervoso central (SNC) e, consequentemente, doenças de ruptura da barreira hematoencefálica, requerem a entrega de substâncias exógenas no cérebro. Essas substâncias exógenas podem induzir impacto prejudicial ou constituir estratégia terapêutica. Os métodos mais comuns de entrega de substâncias exógenas no cérebro são baseados em entregas sistêmicas, como vias subcutâneas ou intravenosas. Embora comumente usadas, essas abordagens têm várias limitações, incluindo baixa eficácia de entrega no cérebro. Em contraste, os métodos cirúrgicos que entregam localmente substâncias no SNC são mais específicos e impedem a absorção das substâncias exógenas por outros órgãos. Vários métodos cirúrgicos para entrega do SNC estão disponíveis; no entanto, eles tendem a ser muito traumáticos. Aqui, descrevemos uma técnica de microcirurgia de infusão de camundongo, que efetivamente fornece substâncias ao cérebro através da artéria carótida interna, com trauma mínimo e sem interferência na funcionalidade normal do SNC.

Introdução

Em modelos in vivo do sistema nervoso central (SNC) doenças requerem uma entrega eficaz de substâncias exógenas, tais como drogas, agentes patogénicos, ou exossomas, para o cérebro. Por isso, um método de entrega ideal deve causar o mínimo de trauma para o animal, preservar a integridade da rede neuronal, e alcançar concentrações elevadas de substâncias no cérebro ^1.

Vários métodos cirúrgicos de distribuição de substâncias locais foram descritos, incluindo intra-bainha, intracerebral, e as injeções intraventricular ou implantes ^{2, 3,<....}

Protocolo

Os procedimentos envolvidos no protocolo seguinte foram aprovados pela Universidade de Miami Animal Care Institucional e Comitê de Uso (IACUC). Além disso, todos os procedimentos estão sendo realizados em instalações aprovadas pela Associação de Avaliação e Acreditação do Laboratório de Animal Care International (AAALAC).

1. Preparação de Ratos para Cirurgia

1. Anestesiar rato com isoflurano misturado com o oxigênio, usando um sistema de anestesia laboratório. Use isoflurano na definição entre 4-5% e fluxo de oxigênio a 2 L / min na máquina comercial (Veja a Tabela de Materiais). Transferir o animal para a superfície da cirurgia, ....

Resultados

A técnica de microcirurgia infusão rato aqui descrito é muito versátil e tem sido usado para fornecer substâncias diferentes diretamente no cérebro, incluindo a entrega de células de tumor em um modelo representativo da formação de metástases cerebrais ^{1, 12.}

Esta técnica também é adequado para avaliar os aspectos patológicos de diferentes agentes patogénicos no SNC. N.......

Discussão

A microcirurgia infusão descrito aqui tem provado ser muito bem sucedida no fornecimento de substâncias exógenas de vários recursos biológicos para o SNC, impedindo a divulgação indesejada por todo o corpo ^{1, 12.} O rompimento da barreira sangue-cérebro é uma característica patológica de várias doenças relacionadas com o SNC; Por conseguinte, a avaliação da relação de substâncias exógenas com a barreira hemato-encefálica é de grande importância e interesse.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Instrumento de anestesia	Vetequip	901806
Tesoura cirúrgica	Fine Science Tool	14558-09
Pinça cirúrgica de ponta reta	Fine Science Tool	00108-11
Pinça cirúrgica de ponta angular	Fine Science Tool	00109-11
Tesoura de mola	Fine Science Tool	15000-08
Sutura de nylon	Braintree Scientific	SUT-S 104
Tubo capilar (Micro-Renathane 0.010" x 0.005" por pé)	Braintree Scientific	MRE01050
Sutura de fechamento	VWR	95057-036
Isoflurano	Piramal
2,3,5-Trifeniltetrazólio cloreto	FisherScientific	50-121-8005