Vasodilatação de isolado navios e o isolamento da matriz extracelular do Mice Tight-pele

Dorothee Weihrauch; John G. Krolikowski; Deron W. Jones; Tahniyath Zaman; Omoshalewa Bamkole; Janine Struve; Paul S. Pagel; Nicole L. Lohr; Kirkwood A. Pritchard, Jr.

doi:10.3791/55036

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Artigo de método

Vasodilatação de isolado navios e o isolamento da matriz extracelular do Mice Tight-pele

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DOI:

10.3791/55036

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24 de março de 2017

Dorothee Weihrauch¹ , John G. Krolikowski¹^,² , Deron W. Jones³ , Tahniyath Zaman³ , Omoshalewa Bamkole¹ , Janine Struve⁴ , Paul S. Pagel⁵ , Nicole L. Lohr⁶ , Kirkwood A. Pritchard, Jr.³

¹Department of Anesthesiology, Medical College of Wisconsin, ²Clement J. Zablocki Veterans Affairs Medical Center, ³Department of Surgery, Division of Pediatric Surgery, Children's Research Institute, ⁴Department of Orthopedic Surgery, Medical College of Wisconsin, ⁵Deptarment of Anesthesiology, Clement J Zblocki Veteran Affairs Medical Center, ⁶Department of Medicine, Division of Cardiology, Medical College of Wisconsin

Neste artigo

Resumo

Descrevemos o isolamento da matriz extracelular cardíaca de camundongos controle C57Bl/6J, camundongos de pele apertada e camundongos de pele apertada tratados com o peptídeo inibitório IRF5. Também descrevemos os estudos de vasodilatação nos vasos isolados de C57Bl / 6J, camundongos de pele firme e camundongos de pele apertada tratados com o peptídeo inibitório IRF5.

Resumo

O fator regulador do interferon 5 (IRF5) é crucial para as células determinarem se respondem de forma pró-inflamatória ou anti-inflamatória. A capacidade do IRF5 de mudar as células de um caminho para outro é altamente atraente como alvo terapêutico. Projetamos um peptídeo chamariz IRF5D com um software de modelagem molecular para projetar pequenas moléculas e peptídeos.

IRF5D inibiu IRF5, reduziu alterações na matriz extracelular e melhorou a vasodilatação endotelial no camundongo de pele apertada (Tsk/+). O K_d de IRF5D para IRF5 recombinante é 3,72 ± 0,74 x ^10-6M, conforme determinado por experimentos de ligação usando experimentos de interferometria de biocamada. A proliferação e apoptose de células endoteliais (CE) permaneceram inalteradas usando concentrações crescentes de IRF5D (0 a 100 μg / mL, 24 h). Camundongos Tsk/+ foram tratados com IRF5D (1 mg/kg/d por via subcutânea, 21 d). As expressões de IRF5 e ICAM diminuíram após o tratamento com IRF5D. A função endotelial foi melhorada conforme avaliado pela vasodilatação das artérias faciais de camundongos Tsk / + tratados com IRF5D em comparação com camundongos Tsk / + sem tratamento com IRF5D. Como fator de transcrição, o IRF5 trafega do citosol para o núcleo. A translocação foi avaliada por imuno-histoquímica em miócitos cardíacos cultivados nas diferentes matrizes extracelulares cardíacas. O tratamento com IRF5D do camundongo Tsk/+ resultou em um número reduzido de núcleos positivos para IRF5 em comparação com os animais sem tratamento com IRF5D (50 μg/mL, 24 h). Essas descobertas demonstram o importante papel que o IRF5 desempenha na inflamação e fibrose em camundongos Tsk / +.

Introdução

Regulação do crescimento celular e as respostas imunitárias de morte celular é central para o papel da famia do factor de transcrição de factores de regulação de interferão. IRF5 é destacada como sendo crucial para a regulação de respostas imunes entre o tipo 1, uma resposta promover inflamatória e tipo 2, uma reparação tecidual resposta imune alvo. IRF5 é chave no cancro ^1, autoimunidade e ^{^2,} ^{^3,} ^{^4,} ^5.

O mouse apertado-pele (Tsk / +) é um modelo para a fibrose do tecido e escleroder....