A cirurgia de derivação, coração direito Cateterismo e Vascular morfometria em um modelo de rato para induzida Fluxo de Hipertensão Arterial Pulmonar

Resumo

Este protocolo descreve um procedimento cirúrgico para criar um modelo de hipertensão arterial pulmonar (HAP) induzida por fluxo em ratos e os procedimentos para analisar os principais desfechos hemodinâmicos e histológicos neste modelo.

Resumo

Neste protocolo, a HAP é induzida pela combinação de uma injeção de monocrotalina (MCT) de 60 mg/kg com aumento do fluxo sanguíneo pulmonar através de um shunt aorto-caval (MCT+Flow). O shunt é criado inserindo uma agulha 18-G da aorta abdominal na veia cava adjacente. O aumento do fluxo pulmonar tem sido demonstrado como um gatilho essencial para uma forma grave de HAP com fases distintas de progressão da doença, caracterizada por hipertrofia medial precoce seguida de lesões neointimais e oclusão progressiva dos pequenos vasos pulmonares. Para medir a hemodinâmica cardíaca direita e pulmonar neste modelo, o cateterismo cardíaco direito é realizado inserindo uma cânula rígida contendo um cateter flexível de ponta esférica através da veia jugular direita no ventrículo direito. O cateter é então avançado para as artérias pulmonares principal e mais distais. A histopatologia da vasculatura pulmonar é avaliada qualitativamente, por meio da pontuação dos vasos pré e intra-acinares quanto ao grau de musculatura e presença de neoíntima, e quantitativamente, pela mensuração da espessura da parede, da relação parede-lúmen e do escore de oclusão.

Introdução

O objetivo desse método é criar um modelo reproduzível para a hipertensão arterial pulmonar grave, induzida por fluxo em ratos e medir o seu princípio hemodinâmica e pontos finais histopatológicos.

A hipertensão arterial pulmonar (HAP) é uma síndrome clínica que engloba um aumento progressivo na resistência vascular pulmonar, levando à falência ventricular direita e morte. Dentro do espectro da doença subordinador de doenças de hipertensão pulmonar (PH), HAP é a forma mais grave e uma que permanece sem cura ^1. A arteriopatia subjacente na HAP é caracterizada por uma forma típica de remodelação vascular que provoca ....

Protocolo

Procedimentos envolvendo indivíduos animais foram aprovados pelo Comité Central Holandês para Experimentação Animal e do Comité de Cuidados com Animais da Universidade Medical Center Groningen (NL). foram usados ​​tanto em ratos Wistar e Lewis com pesos entre 180 e 300 g.

1. Habitação e aclimatação

1. Depois da chegada ao biotério central, ratos de casas em grupos de 5 por gaiola. Durante um período de aclimatação de 7 dias, acostumar os ratos a manipulação humana, mas não realizar quaisquer procedimentos experimentais.

2. Preparação e Injecção de estéril Monocrotalin

1. Para 1 mL de 60 m....

Resultados

Os resultados representativos são apresentados na Figura 4. Os resultados apresentados mostram características do MCT + FLUXO em ratos Lewis nos seguintes grupos: Controle (n = 3), MF8 (n = 5), MF14 (n = 5), MF28 (n = 5) e MF-RVF ( n = 10). As análises estatísticas foram realizadas utilizando o one-way ANOVA com correção de Bonferroni.

60 mg / kg MCT e aumentou a vantagem fluxo sanguíneo pulmonar a um aumento .......

Discussão

Este método descreve o procedimento cirúrgico de shunt aorto-cava em ratos pré-tratados com MCT para criar HAP induzida pelo fluxo e as técnicas para avaliar o princípio hemodinâmica e pontos finais histopatológicos que caracterizam HAP e este modelo.

Passos críticos dentro do Protocolo e solução de problemas

Cirurgia e pós-cirurgia. Durante a cirurgia de derivação aorto-cava, a etapa mais crítica é a dissecção da aorta e veia cava. As membranas que envolvem a aorta.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Shunt Surgery
Luvas
Duratears Pomada para os olhos	Alcon	10380
Cloreto-Hexidina
Cotonetes
Cola de tecido histoacrílico	B. Braun Medical	1050052
Silkam 5-0 suturas pretas não reabsorvíveis	B. Braun Medical	F1134027
Safil 4-0 suturas violeta reabsorvíveis	B. Braun Medical
18 G agulha	Luer	NN1838R ponta BD	dobrada em orifício de 45 graus para o exterior
Gazes 10 x 10 cm	Paul Hartmann	407825
Temgesic Buprenorfina	RB Pharmaceuticals	5429	subcutânea injeção
Cloreto de Sódio 0.9%
Máscara de ventilação Lâmina
	AgnTho	64-562
Tapete
Kocher Clamp
Máquina de
Microscópio	Leica
Cateterismo cardíaco direito
Luvas			cirúrgicas estéreis
Pomada para os olhos	Duratears
Chloride-Hexidine
Cotonetes Gazes
10 x 10 cm	Paul Hartmann	407825
Silkam 5-0 suturas pretas não reabsorvíveis	B. Braun Medical	F1134027
Agulha 20 G	Luer		ligeiramente dobrada para dentro
Cânula 20 G	Luer		para introduzir cateter, ponta pré-formada em 20 graus
Cateter Silastic 15 cm de comprimento			0,5 mm bola 2 mm da ponta
Transdutor de pressão	Ailtech
Monitor de cabeceira Cardiocap/5	Datex-Ohmeda
Máquina
Seringa
Cloreto de sódio 0,9%			para lavagem
Morfologia Vascular
50 mL Seringa
4% Formaldeído
18 G cânula com tubo
Kit de coloração Verhoef	Sigma-Aldrich	HT254	http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht254?lang=en®ion=US
Scanner de slides digital	Hamamatsu	C9600
ImageJ
Elastic (Mancha de Tecido Conjuntivo)	Abcam	ab150667	http://www.abcam.com/elastic-connective-tissue-stain-ab150667.html http://www.abcam.com/ps/products/150/ab150667/documents/ab150667-Elastic%20Stain%20Kit%20(site).pdf

cirúrgicas estéreisde algodão de bisturi de rato Braçadeira Biemer 18 mm, abertura de 5 mm de calorbarbear Ponta de barbear de 10 mL