Analisando Synaptic Modulação da<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Fotorreceptores após exposição à luz prolongada

Atsushi Sugie; Christoph Möhl; Satoko Hakeda-Suzuki; Hideaki Matsui; Takashi Suzuki; Gaia Tavosanis

doi:10.3791/55176

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Artigo de método

Analisando Synaptic Modulação da

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DOI:

10.3791/55176

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10 de fevereiro de 2017

Atsushi Sugie¹^,²^,⁵ , Christoph Möhl³ , Satoko Hakeda-Suzuki⁴ , Hideaki Matsui¹^,² , Takashi Suzuki^*⁴ , Gaia Tavosanis^*⁵

¹Department of Neuroscience of Disease, Center for Transdisciplinary Research, Niigata University, ²Brain Research Institute, Niigata University, ³Image and Data Analysis Facility, German Center for Neurodegenerative Diseases (DZNE), ⁴Graduate School of Life Science and Technology, Tokyo Institute of Technology (Titech), ⁵Dendrite Differentiation, German Center for Neurodegenerative Diseases (DZNE)

^* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Aqui nós mostramos como quantificar o número ea distribuição espacial das zonas ativas sinápticas em fotorreceptores de Drosophila melanogaster, destacou com um marcador molecular geneticamente codificado, e sua modulação após a exposição prolongada à luz.

Resumo

O sistema nervoso tem a notável capacidade de se adaptar e responder a vários estímulos. Este ajuste neural é em grande parte alcançado através de plasticidade no nível sináptico. A zona activa (AZ) é a região na membrana pré-sináptica que medeia a libertação de neurotransmissores e é composto de uma colecção de proteínas densa de andaime. AZs de Drosophila melanogaster (Drosophila) fotorreceptores submetidos a remodelação molecular após a exposição prolongada à luz ambiente natural. Assim, o nível de atividade neuronal pode reorganizar a composição molecular do AZ e contribuem para a regulação da saída funcional.

A partir da exposição à luz preparação set-up para a imuno-histoquímica, os detalhes deste protocolo como quantificar o número, a distribuição espacial, eo nível de deslocalização de moléculas sinápticas em AZs em fotorreceptores de Drosophila. Usando análise de imagem software, foram identificados grupos de o componente AZ fundido-GFP Bruchpilot para cada fotorreceptor R8 (R8) axônio terminal. manchas Bruchpilot detectados foram atribuídos automaticamente a axônios R8 individuais. Para calcular a distribuição de frequência local ao longo do axônio, implementamos um plug-in de software personalizado. -Ponto de partida de cada axônio e ponto final foram definidas manualmente e a posição de cada ponto Bruchpilot foi projetada na linha de conexão entre início e ponto final. Além do número de aglomerados Bruchpilot, nós também quantificado o nível de deslocalização Bruchpilot-GFP dentro dos aglomerados. Estas medidas refletem em detalhe a dinâmica sinápticas espacialmente resolvidos em um único neurônio sob diferentes condições ambientais aos estímulos.

Introdução

A modulação da função sináptica contribui para a notável capacidade do sistema nervoso para responder ou se adaptar às mudanças estímulos ambientais com precisão. Ajustar a probabilidade de liberação de vesículas pré-sináptica é uma forma de controlar a força sináptica ^1. Libertação das vesículas sinápticas tem lugar na zona activa (AZ), uma região especializadas da membrana pré-sináptica ^2. O AZ caracteriza-se por uma cassete de proteínas específicas ^{^3,} ^4. A maioria das proteínas que contribuem para a montagem AZ são altamente conservadas em nematóides, i....