Este artigo descreve um ensaio comportamental que utiliza a unidade de acasalamento dos machos em Drosophila melanogaste r para estudar motivação. Usando este método, os pesquisadores podem utilizar técnicas neurogenéticos mosca avançada para descobrir os mecanismos genéticos, moleculares e celulares que fundamentam essa motivação.
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Artigo de método
Medir e alterando Acasalamento Drive em Male
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Apesar de décadas de investigação, as bases neuronais e moleculares de estados motivacionais permanecem misteriosas. Recentemente, desenvolvemos um romance, reducionista e sistema escalável para investigação aprofundada de motivação usando a unidade de acasalamento dos machos Drosophila melanogaster (Drosophila), os métodos para as quais detalhes aqui. O paradigma comportamental centra-se na constatação de que a unidade de acasalamento dos machos diminui ao lado de fertilidade ao longo de cópulas repetidas e recupera mais ~ 3 d. Neste sistema, as poderosas ferramentas neurogenéticos disponíveis na mosca convergir com a acessibilidade genética e esquema de ligação putativo disponíveis para o comportamento sexual. Esta convergência permite o isolamento rápido e interrogatório de pequenas populações neuronais com funções motivacionais específicos. Aqui nós detalhe a concepção e execução do ensaio saciedade que é usado para medir e alterar a motivação corte na mosca masculino. usando esteensaio, que também demonstram que a baixa unidade de acasalamento dos machos pode ser superado através da estimulação neurónios dopaminérgicos. O ensaio de saciedade é simples, acessível e robusto às influências de fundo genético. Esperamos que o ensaio de saciedade para gerar muitos novos insights sobre a neurobiologia de estados motivacionais.
Introdução
Trabalho em Drosophila tem proporcionado uma visão profunda e pioneira em muitos fenómenos biológicos, incluindo a natureza do gene 1, os princípios do desenvolvimento embrionário 2, ritmos circadianos 3, bem como o desenvolvimento e a fiação do sistema nervoso 4, 5, 6. A motivação permanece bastante menos conhecidas do que estes fenómenos, talvez por causa das limitações dos sistemas que foram estudados até agora. A motivação da mosca é estudado principalmente no contexto de fome, que apresenta....
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Protocolo
NOTA: Este protocolo descreve a preparação (Seções 1 - 3), execução (Seção 4), e análise (Seção 4) de ensaios de saciedade 2-D. Em seguida, utilizando estimulação dopaminérgica, como exemplo, a secção 5 mostra como combinar estimulação termogênico com ensaios de saciedade 2-D para induzir hipersexualidad. Secção 6 descreve 3 maneiras de verificar os resultados de ensaios de saciedade 2-D. Finalmente, a Seção 7 mostra como medir a recuperação da unidade de acasalamento em moscas macho.
1. Confecção de 8 e 32 câmaras Arenas Comportamentais
NOTA: cada arena comportamental consiste em diversas camadas de folhas de p....
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Resultados
Para caracterizar unidade de acoplamento de Drosophila, de 3 dias de idade, Canton WT-S machos foram testados num ensaio de saciedade 2-D. Durante o curso do ensaio (4,5 h), machos acasalam uma média de 4,8 ± 0,3 (média ± erro padrão da média, SEM) vezes. Acasalamentos iniciar principalmente nas primeiras 2 h (78%) (Figura 6A, 6B) e tornam-se menos frequentes como o ensaio avança (Figura 6A, 6B). Esta redução não é devido à falta de parceiros de.......
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Discussão
Estados motivacionais pode ser saciado, mantidos e recuperados 34. Nós apresentamos um ensaio de saciedade 2-D que rapidamente e de forma robusta mede todos esses aspectos do acasalamento unidade na mosca. Este ensaio abre-se a possibilidade de utilizar mosca avançada manipulações genéticas para estudar os componentes moleculares e um circuito de comportamento motivado.
O ensaio de saciedade confia na capacidade do homem para o tribunal com sucesso e copular, e para t.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Os autores agradecem a Mike Crickmore, Dragana Rogulja e Michelle Frank pelos comentários sobre o manuscrito. Pavel Gorelik forneceu suporte técnico para a fabricação das arenas comportamentais. Este trabalho foi conduzido no laboratório de Mike Crickmore e também é apoiado pela Fundação Whitehall (Investigadora Principal: Dragana Rogulja). S.X.Z. é Stuart H.Q. e Victoria Quan Fellow na Harvard Medical School.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Acrílico transparente de 1/16 polegada | McMaster-Carr | 8589K12 | Usado para fazer arenas; veja Material Suplementar 1 para designs. |
| Acrílico transparente de 1/8 de polegada | McMaster-Carr | 8589K42 | Usado para fazer arenas; veja Material Suplementar 1 para designs. |
| Acrílico transparente de 3/16 polegada | McMaster-Carr | 8560K219 | Usado para fazer arenas; veja Material Suplementar 1 para designs. |
| 1/32 polegada preto delrin | McMaster-Carr | 8575K132 | Usado para fazer arenas; veja Material Suplementar 1 para designs. |
| Parafusos hexagonais, 1 polegada de comprimento (50x) | McMaster-Carr | 92314A115 | Usado para fazer arenas. Pode ser substituído por parafusos de 3/4 de polegada (92314A113, McMaster-Carr) para arenas de 32 câmaras. |
| Porcas de polegar (25x) | McMaster-Carr | 92741A100 | Usado para fazer arenas. Pode ser substituído por porcas sextavadas regulares (90480A005, McMaster-Carr). |
| Filmadora | Canon | Vixia HF R700 | Pode ser substituída por qualquer câmera de consumo. |
Referências
- Sturtevant, A. H., Bridges, C. B., Morgan, T. H. The spatial relations of genes. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 5 (5), 168-173 (1919).
- Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. The Embryonic Development of Drosophila melanogaster. , Springer. Berlin Heidelberg: Berlin, Heidelberg. (1985).
- Hall, J. C.
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Reimpressões e permissões
