Um dispositivo para executar a migração celular / cicatrização de feridas em uma placa de 96 poços

Resumo

Aqui, nós apresentamos um protocolo para realizar um ensaio de migração de células semi-elevado rendimento sobre uma placa de cultura celular de 96 poços. Este protocolo é um método rápido, simples e econômica para criar feridas scratch consistentes sobre a monocamada de células.

Resumo

A migração de células / ferindo ensaio é um método vulgarmente utilizado para estudar a migração celular e outros processos biológicos, tais como angiogénese e metástase do tumor. Neste ensaio, as células são cultivadas para formar uma monocamada confluente e um ferimento mecânico é criado por raspagem com um dispositivo. Em seguida, a taxa de migração das células em relação à área desnudada pode ser monitorizada por meio de imagens. O nosso wounder mecânica de 8 canais foi concebida para resolver a maior parte dos problemas associados com o ensaio de migração celular. Em primeiro lugar, o nosso wounder pode ser facilmente esterilizados por autoclave ou com desinfectantes comuns. Em segundo lugar, os pinos individuais ajustáveis ​​permitem mesmo contacte com a placa de cultura celular de modo a que as feridas afiadas e reprodutíveis pode ser criado. Em terceiro lugar, as barras de orientadores em ambos os lados da posição de ferimento wounder assegurar consistente em cada poço. O uso de descartáveis ​​de plástico dicas de pipeta para ferindo pode fornecer mais melhor manuseio do wounder, bem como para minimizar cross-de contaminantesíon. Em conclusão, a wounder célula pode proporcionar aos investigadores um dispositivo reprodutível e amigável do utilizador para realizar o ensaio de migração de células usando a placa de cultura de 96-poços padrão.

Introdução

A migração celular desempenha um papel importante nos processos celulares, tais como a embriogénese, neurogénese, a angiogénese, a cura de feridas, a reparação da mucosa,-epiteliais mesenquimais-transições em desenvolvimento normal e ^uma situação de doença. É um processo complicado que envolve a coordenação de numerosos eventos inter e intra-celulares, incluindo as interacções molécula de sinalização, célula de polarização, a reorganização do citoesqueleto, remodelação da matriz, protrusão membrana e célula-célula dinâmica de modulação da adesão ^2. Ao estudar a migração celular, pode ser determinada a descoberta e valid....

Protocolo

1. Introdução às Partes do wounder (Figura 1)

1. Prepare o suporte do pino, fixando os pinos ferindo pelo distâncias iguais. Segure as pontas de pipeta e ajustar a altura da ponta, movendo os pinos ferindo ajustáveis ​​para cima e para baixo.
2. Montar o guiamento-barra ajustável em diferentes tipos de placas de cultura de 96 poços e garantir que a área da ferida está numa posição fixa.
3. Fixe o pino de ferimento ajustável apertando o parafuso de hex. Fixar a barra-guia na posição apertando as tampas sextavados em ambas as extremidades.

2. Definir a largura da caixa Pin (Figura 2)

1. Solte as tampas se....

Resultados

Este wounder mecânica 8-canal é construído para arranhar uma monocamada de células, a fim de realizar o ensaio de migração celular. É um dispositivo fácil de usar que pode realizar ensaios coçando de células em placas de 96 poços em menos de um minuto, sem treinamento especial. Este wounder pode introduzir áreas feridas em monocamadas de células com uma largura uniforme de cerca de 600 mm e com bordas afiadas (Figuras 5 e 6). A largura das feridas depend.......

Discussão

Nossa wounder célula tem várias características únicas em resolver os problemas dos ensaios de migração celular tradicionais. A célula wounder mecânica 8-canal é feita de aço inoxidável de alto grau (Aço 304) com uma longa vida útil que pode ser esterilizado em autoclave. Quase todas as marcas comerciais de placas de 96 poços de cultura disponíveis no mercado podem ser usadas com esta wounder célula mecânica por causa da barra de orientação ajustável. O desenho da barra de orientação ajustável também assegura que a área.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Placa de cultura de células de 96 poços	Nunc	167008	Outras marcas de placas de cultura de células de 96 poços também podem ser usadas
Pontas de pipeta P10	Axygen	301-03-051	A ponta de pipeta P10 curta é mais fácil de criar uma ferida clara
Wounder	R& P Technology Limited
Medium 199	Sigma	M2520-1L	Para cultura de células endoteliais da veia umbilical humana. Use meio de cultura apropriado e condicione para outros tipos de células.
Soro fetal bovino	Gibco	26140079	Para cultura celular de células endoteliais da veia umbilical humana. Utilizar meio de cultura adequado e condicionar para outro tipo de células.
Penicilina/Estreptomicina	Gibco	15140122	Para cultura celular de células endoteliais da veia umbilical humana. Use meio de cultura apropriado e condicione para outros tipos de células.
Sal de heparina sódica da mucosa intestinal suína	Sigma	H3393	Para cultura celular de células endoteliais da veia umbilical humana. Use meio de cultura apropriado e condicione para outro tipo de células.
Gelatina de pele bovina	Sigma	G9391	Para cultura celular de células endoteliais da veia umbilical humana. Utilizar meio de cultura adequado e condicionar para outro tipo de células.