Injecção periférica de fibrilas-sinucleína alfa no peritoneu ou língua de Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) ratos, que expressam alfa-sinucleína humana com a mutação A53T familiar e a luciferase do pirilampo, pode induzir a neuropatologia, incluindo neuroinflamao , em seu sistema nervoso central.
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Artigo de método
Imagem de bioluminescência de Neuroinflammation em Ratinhos Transgénicos Após inoculação periférica de alfa-sinucleína fibrilas
Neste artigo
Resumo
Resumo
Para estudar o comportamento de prião de tipo de enrolamento incorrecto alfa-sinucleína, são necessários modelos de murganho que permite a transmissão rápida e simples de prionoids alfa-sinucleína, que causam neuropatologia no interior do sistema nervoso central (SNC). Aqui descrevemos que intraglossal ou injecção intraperitoneal de fibrilas-sinucleína em alfa bigenic Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) ratos, que sobre-expressam alfa-sinucleína humana com a mutação A53T a partir do promotor da proteína prião e a luciferase do pirilampo de o promotor para a proteína ácida fibrilar glial (GFAP), é suficiente para induzir doença neuropatológica. Em comparação com Tg homozigótica (M83 + / +) ratinhos que desenvolvem sintomas neurológicos graves começam com uma idade de 8 meses, heterozigótica Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) animais permanecem livres da doença espontânea até atingirem um idade de 22 meses. Interessantemente, a injeco de fibrilas-sinucleína alfa através da intraperitoneal rota induzida doença neurológica com paralisia em quatro de cinco Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) ratos com um tempo de incubação médio de 229 ± 17 dias. animais doentes mostrou depósitos graves de fosforilada alfa-sinucleína em seus cérebros e medulas espinhais. Acumulações de alfa-sinucleína foram sarcosil-insolúvel e co-localizada com ubiquitina e p62, e foram acompanhados por uma resposta inflamatória que resulta em gliose de astrócitos e microgliose. Surpreendentemente, a inoculação de fibrilas-sinucleína alfa para a língua era menos eficaz em causar doença com apenas um dos cinco animais injectados mostrando alfa-sinucleína patologia após 285 dias. Nossos resultados mostram que a inoculação por via intraglossal e mais ainda através da via intraperitoneal é adequado para induzir doença neurológica com características relevantes da sinucleinopatias em Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) camundongos. Isto fornece um novo modelo para estudar prion-como patogênese induzird por prionoids alfa-sinucleína em maior detalhe.
Introdução
Existe evidência crescente de que o alfa-sinucleína tem características que são semelhantes às da proteína prião, em particular na sua capacidade de se auto-propagam semente e enrolamento incorrecto entre as células e ao longo de caminhos neuronais. Esta propriedade de alfa-sinucleína é também referido como 'prião de tipo' ou 'prionoid', e é suportada por observações em experiências de transplantação, o que sugere a transmissibilidade do enrolamento incorrecto alfa-sinucleína a partir de neurónios doentes para recém-transplantados neurónios saudáveis 1, 2 , 3, 4. Também injecção directa de enrolamento incorrecto alfa-sinucleína no cérebro ou da periferia, por exemplo, o músculo do membro posterior ou parede intestinal, resulta numa disseminação da patologia alfa-sinucleína a partes distais do SNC 5, 6, 7, 8, 9, 10. Analisou-se a transmissão de prionoids alfa-sinucleína por vias periféricas em mais detalhe e dirigiu-se à questão de saber se misfolded alfa-sinucleína pode neuroinvade do SNC após uma única injecção intraperitoneal ou intraglossal, uma característica que tinha sido previamente demonstrado para priões, mas não para alfa- misfolded sinucleína. Após a injecção de priões para a língua, neuroinvasão do SNC é alcançada através de propagação ao longo do nervo hipoglosso da lingueta que conduz para o núcleo do nervo hipoglosso, que está localizado no tronco cerebral 11. Como um modelo de ratinho que escolheu Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) murganhos que sobre-expressam o mutante A53T de alfa-sinucleína humano a partir do promotor do prião, e luciferase de pirilampo sob o controlo de um promotor GFAP para monitorizar a activação de astrócitos pela bioluminescência, como mostrado anteriormente no cérebro deprião-infectados ratinhos 12. Em nossas mãos bigenic Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) ratos não desenvolveram a doença até 23 meses de idade, como tem sido demonstrado por outros 13. Uma única injecção de fibrilas-sinucleína alfa humanos através da rota ou intraglossal induzida doença neurológica intraperitoneal com patologia nos cérebros e medulas espinhais de Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) murganhos que suportam a hipótese de que prionoids alfa-sinucleína compartilham características importantes com priões 14.
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Protocolo
Todos os procedimentos, incluindo animais foram realizados com a aprovação da comissão de proteção animal de Rhine-Westphalia Agência Norte Estadual do Meio Ambiente (LANUV). Os animais foram alojados e tratados de acordo com condições padrão com um 12 h ciclo de luz / escuro e acesso livre a alimento e água.
1. Modelo Animal
- Intercross hemizigótica Tg (GFAP -Luc +/-) ratinhos com ratinhos hemizigótica Tg (M83 +/-) para gerar hemizigótica bigenic Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) ratos 15, 16.
- Genótipo a descendência com PCR em tempo real para a presença do transgene que codifica alfa-sinucleína humana e com a PCR padrão para a luciferase de pirilampo 12, 17.
- Inocular os animais em uma idade de seis a oito semanas.
2. Preparação do inóculo
- Prepare monomeric alfa-sinucleína recombinante humana com a mutação A53T em solução salina tamponada com Tris (TBS) contendo 150 mM de NaCl em Tris-HCl 20 (pH 7,2) como foi anteriormente descrito 14.
- Prepare fibrilar alfa-sinucleína para inoculações, por agitação de 3? G /? L de alfa-sinucleína monomérica humana recombinante num agitador orbital a 800 rpm e 37 ° C durante 5 dias.
- Dilui-se conjuntos de fibrilas em solução salina tamponada com fosfato (PBS) para atingir uma concentração final de 1 ug / mL para intraperitoneal ou 2 ug / mL para inoculações intraglossal.
- Fragmentar as fibrilas-sinucleína alfa com um sonicador de haste durante 1 min (40 impulsos de duração de 0,5 s com uma pausa de um segundo entre cada pulso e uma amplitude definida como 50%) em gelo. Para evitar a contaminação por cross-sementeira. Utilizar sondas de sonicação limpas para preparar inoculo diferente.
3. Injeções Intraglossal
- Anestesiar os animais com uma intraperitoneal injecção de 100 mg / kg de cetamina e 10 mg / kg de xilazina. Beliscar dedo do pé do animal e confirmar que ele não retirar a pata traseira para garantir anestesia adequada. Use vet pomada sobre os olhos do animal para evitar a secura sob anestesia.
- Fix animais narcotizados cuidadosamente com fita adesiva sobre uma placa de aquecimento numa posição de decúbito dorsal com as cabeças viradas para o investigador.
- Encher uma seringa hipodérmica descartável 27 G com 5 mL de fibrilas-sinucleína alfa sonicadas ou PBS.
- Use uma pinça polegar sem corte de nariz com pontas serrilhadas para manter a boca do animal aberta, e um par segunda menor de pinça para retirar cuidadosamente a língua para fazer a parte de baixo da língua acessível para injeção.
- Injectar a agulha da seringa no lado inferior direito ou esquerdo da língua em proximidade com o nervo hipoglosso. Lentamente injectar o inoculo após 5 s. Lentamente retrair a agulha depois de 5 segundos para assegurar que o inoculotenha penetrado no tecido e não é perdida durante a retracção da agulha.
- Solte o animal de suas fixações e deixá-lo na placa de aquecimento sob monitoramento constante até a recuperação completa.
4. injeção intraperitoneal
- Para injecções intraperitoneais, narcotizar os animais em breve numa câmara de anestesia por inalao com isoflurano / oxigénio utilizando um caudal de 2 L / min e o vaporizador ajustado para 2%. Beliscar dedo do pé do animal e confirmar que ele não retirar a pata traseira para garantir anestesia adequada.
- Encher uma seringa hipodérmica descartável 27 G com 50 uL de fibrilas-sinucleína alfa sonicadas ou PBS.
- Injectar directamente no peritoneu do rato e evitar a penetração do intestino delgado ou ceco localizado por trás da parede abdominal, mantendo o animal numa posição dorsal, com a cabeça virada para longe do investigador e para baixo a cerca de 45 °. Monitorar os animais até que tenham recuperadoda anestesia.
5. A bioluminescência imagem
- Imagem Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) ratos cada 2-4 semanas, utilizando um sistema de imagem de bioluminescência.
- Antes da imagiologia, pouco anestesiar os ratos numa câmara de isoflurano / oxigénio com uma taxa de fluxo de 2 L / min e o vaporizador ajustado para 2%. Beliscar dedo do pé do animal e confirmar que ele não retirar a pata traseira para garantir anestesia adequada.
- Raspar e depilar as cabeças dos ratinhos com um creme depilatório. Colorir as orelhas em preto com um marcador não irritante para bloquear a bioluminescência inespecífica.
- Dilui-se o sal de potássio de D-luciferina, o substrato da luciferase, em PBS a uma solução estoque de 30 mg / mL. Conserva-se a em aliquotas de 1 ml a -20 ° C. Proteger o D-luciferina dissolvido da exposição à luz.
- Pesar os animais antes da injecção. Calcular o volume exacto de D-luciferina para injecção de 150 mg / kg de peso corporal. Intraperitonealmente injectar D-luciferin e retornar o animal à câmara de anestesia.
- Inicie o software de imagem. Depois que o sistema de imagem atingiu sua temperatura de funcionamento inicializar o sistema, clicando no botão 'Inicializar' no painel de controle.
- Selecione os botões 'luminescentes' e 'Photograph'. Defina o tempo de exposição a 60 s, o binning de 'Medium', o F / Stop para '1', e o ganho EM para 'Off'.
- Confirme se o filtro de excitação é definido como 'bloco' eo filtro de emissão para 'Open' e definir a altura sujeita a 1,50 cm.
- Dez minutos após a injecção com D-luciferina, colocar os animais sobre a placa de aquecimento na câmara de imagiologia e assegurar que os focinhos estão correctamente colocados na saída de anestesia. Fechar o fluxo de isoflurano / oxigénio a partir da câmara de inalação e abrir o fluxo para a câmara de imagem com um caudal de 0,25 L / min e uma evaporação de 2%. Feche a porta do pr câmara de imagemoperly.
- Clique no botão 'Adquirir' para medir a bioluminescência, que leva 60 s. Parar o fluxo de isoflurano e monitorar os animais até que tenham recuperado completamente depois devolvê-los de volta às suas gaiolas.
- Use o software de imagem para quantificar a bioluminescência. Dentro do 'Tool Palette' selecionar 'Ferramentas de ROI'. Em 'Tipo' dentro 'Ferramentas de ROI' selecionar 'Medição ROI'.
- Dentro das ferramentas de ROI 'clique na ferramenta "círculo" e selecione o número de ROIs para desenhar a partir do menu suspenso - idealmente '3' por três ratos.
- Na imagem, clique com o botão direito em cada ROI e sob 'Propriedades' ajustar a largura e altura para 1,25 cm. Posicionar cada ROI sobre a área do cérebro que é quantificado.
- No canto superior esquerdo da imagem, definir o painel de unidades de 'radiância (fotões)'.
- Dentro do 'Tool Palette', selecione 'Ajuste de Imagem' e ajustar o mínimo ea máxima do 'escala de cores', por exemplo, a partir 0.20e6 para 1.00E6.
- Em 'File' salvar os dados com 'Save'.
6. A análise bioquímica
- Isolar os cérebros e medulas espinhais de acordo com protocolos estabelecidos 18, 19.
- Homogeneizar o cérebro inteiro e amostras da medula espinal inteiros separadamente em PBS na presença de inibidores de protease e fosfatase (diluídos até 1x em PBS) em dois ciclos de 30 s com a 6000 rpm num homogeneizador de tecidos. Assegure-se que o cérebro e na medula espinhal amostras são homogeneizados a uma concentração final de 20% (peso / vol).
- Sonicar as amostras duas vezes, mantendo-os em gelo com um impulso constante de 10 s e uma amplitude definida como 50%.
- Ajustar os homogenatos a 10% em PBS e NaCl 750 mM, por diluição com 1: 1 com NaCl 1,5 M em PBS.
- Para separar os detritos celulares, centrifugar os homogenatos a 1000 xg durante 5 min a4 ° C. Mantenha os sobrenadantes para os próximos passos e descartar os pellets.
- Medir a concentração da proteína nos homogeneizados usando o ensaio de ácido bicinconínico (BCA) de acordo com as instruções do fabricante. Incubar 1,0 mg de proteína total a partir de homogenatos de cérebro ou de 0,8 mg a partir de homogenatos de medula espinhal de N-laurylsarcosyl a uma concentração final de 10% (p / vol) durante 15 min em gelo.
- Sobrepor os homogeneizados numa almofada de sacarose a 3 mL de 10% (p / vol) em água destilada e ultracentrífuga-los em 465.000 xg durante 1 h a 4 ° C.
- Ressuspender as pastilhas numa solução tampão contendo 4% de dodecil sulfato de sódio (SDS), 2% β-mercaptoetanol, glicina 192 mM, Tris 25 mM, e 5% (p / v) de sacarose.
- Ferver as amostras a 100 ° C durante 5 min e carregá-los no géis de SDS-poliacrilamida para electroforese em um sistema tampão de ácido morpholineethanesulfonic (MES).
- Transferir as proteínas separadas para difluoreto de polivinilideno (PVDF) em membranas de uma SEMiDry sistema de mata-borrão.
- Incubar as membranas em 0,4% (vol / vol) de solução de formalina em PBS durante 30 min à temperatura ambiente em um rotor com 35 rpm para reticular as proteínas com a membrana.
- Bloquear as membranas em tampão TBS contendo 0,05% (vol / vol) de Tween 20 e 5% (p / v) de leite durante 1 h à temperatura ambiente.
- Incubar as manchas com o anticorpo primário em tampão de bloqueio durante a noite a 4 ° C.
- Lavam-se as membranas três vezes em tampão de TBS e incube-as com anticorpos secundários peroxidase ou fluoróforos em TBS durante 1 h à temperatura ambiente.
- Visualizar os anticorpos secundários ligados por quimioluminesccia ou fluorescência de acordo com protocolos estabelecidos 20.
Análise 7. Imunofluorescência
- Desidratar os cérebros dissecados e medulas espinhais de uma estação de processamento de tecidos e incorporá-los em parafina usando um banho de parafina.
- Cortar o tis embebidos em parafinasues com um micrótomo em 8 mm cortes coronais de espessura e montar as secções sobre lâminas de vidro.
- Desparafinar as secções de tecido, incubando-as em dois banhos separados xilol durante 5 a 10 minutos e re-hidratar-los através de uma série de banhos de etanol graduadas (100%, 90%, 70%, 50%) e finalmente com H 2 O.
- Incubar as secções em 0,01 M de tampão de citrato (pH 6,0) durante 5 min à temperatura ambiente e, adicionalmente, ferve-las durante 10 min num forno de microondas.
- Deixe as secções de arrefecer até à temperatura ambiente e incube-as com uma solução de peróxido de hidrogénio a 3% durante 30 minutos para inibir as peroxidases endógenas.
- Bloquear as secções de tecido, por incubação com 20% (vol / vol) de soro de cabra normal a 1% (vol / vol) de albumina de soro bovino (BSA) e 0,5% de Triton X-100 em PBS durante 1 h à temperatura ambiente.
- Incubar as secções com o anticorpo primário diluído em 1% (vol / vol) de soro de cabra normal a 1% (vol / vol) de BSA, e 0,25% de Triton X-100 em PBS durante a noite a 4 ° C.
- Lavar as secções duas vezes com 0,25% (vol / vol) Triton X-100 em PBS e uma vez com PBS.
- Corar as secções com anticorpos secundários conjugados com fluoróforo correspondentes e o corante nuclear DAPI diluída em 1% (vol / vol) de soro de cabra normal a 1% (vol / vol) de BSA e PBS durante 1 h à temperatura ambiente.
- Depois de lavar duas vezes com 0,25% (vol / vol) Triton X-100 em PBS e uma vez com PBS, as lâminas com lamela meios de embebimento e visualizar a coloração com um microscópio confocal de varrimento laser.
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Resultados
Injecção periférica de prionoids alfa-sinucleína através da língua ou no peritoneu induzida neuropatologia no CNS de Tg bigenic (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) murganhos (Tabela 1 e Figura 1). Após uma única injecção intraperitoneal com fibrilas-sinucleína alfa, quatro de cinco ratinhos desenvolveram uma doença neurológica com um tempo de incubação médio de 229 ± 17 dias. Surpreendentemente, apenas um de cinco ratinhos desenvolver...
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Discussão
Injecção periférica de fibrilas-sinucleína alfa no peritoneu de Tg (M83 +/-: GFAP -Luc +/-) ratinhos representa um método fácil para induzir a doença neurológica acompanhada por neuroinflamao recapitular características importantes de sinucleinopatias. Da mesma forma, a injecção língua representa uma outra via para neuroinvasão por prionoids alfa-sinucleína em ratinhos transgénicos, mas é menos eficiente. Escolhemos para terminar nossas experiências em 420 dias após a injecção e não podemo...
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Os autores agradecem Olga Sharma, Theresa Hundt, e os funcionários das microscopia e animais instalações DZNE para suporte técnico.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| anticorpo anti-actina | Merck Millipore | MAB1501 | |
| anti-alfa-sinucleína, anticorpo fosfo-S129 [pSyn#64] | Wako | 015-25191 | |
| anti-alfa-sinucleína, anticorpo fosfo-S129 [EP1536Y] | Abcam | ab51253 | |
| anticorpo anti-GFAP | Dako | Z0334 01 | |
| anticorpo anti-IBA-1 | Wako | 019-19741 | |
| anticorpo anti-Sequestossomo-1 (p62) Anticorpo | Proteintech | 18420-1-AP | |
| [Ubi-1] | Merck Millipore | MAB1510 | |
| Solução salina tamponada com fosfato (PBS) | Invitrogen | 14190169 | |
| Cetamina | Ratiopharm | 100 mg/kg | |
| Xilazina | Seringa Ratiopharm | 10 mg/kg | |
| 27 G | VWR | 613-4900 | |
| Isoflurano | Piramal Healthcare | PZN 4831850 | |
| Creme Depilatório | Veet | ||
| Secureline marcador de laboratório | Neolab | 25040 | |
| D-luciferina sal de potássio | Acris | LK10000 | 30 mg/mL solução estoque |
| Thermomixer | Eppendorf | 5776671 | |
| Sonopuls Mini20 sonicator | Bandelin | 3648 | |
| Sistema de imagem IVIS Lumina II | PerkinElmer | ||
| Living Image 3.0 Software | PerkinElmer | ||
| Camundongos Tg(M83+/-) ou B6; Camundongos C3-Tg(Prnp-SNCA*A53T)83Vle/J | The Jackson Laboratory | 004479 | |
| Pinça de padrão padrão | Ferramentas de Fine Science | 11000-16 | |
| Pinça de padrão estreito | Ferramentas de Ciência Fina | 11002-12 | |
| N-laurylasarcosyl | Sigma | L5125-100G | |
| Optima Max-XP ultracentrífuga | Rotor Beckman Coulter | TLA-110 | |
| Tubos de policarbonato de parede espessa | Beckman Coulter | 362305 | |
| NuPAG Novex 4-12% Bis-Tris Midi Protein Gels | Thermo Fisher Scientific | WG1401BOX | |
| anticorpo conjugado HRP Cayman | Cay10004301-1 | ||
| IR Dye 680 anticorpo | LI-COR Biosciences | 926-68070 | |
| SuperSignal West Dura Substrato de Duração Estendida | Thermo Fisher Scientific | 34075 | |
| Stella 3200 sistema de imagem | Raytest | ||
| Odyssey sistema de imagem infravermelha | LI-COR Biosciences | ||
| Tween 20 | MP Biomedicals | TWEEN201 | |
| Triton X-100 | Sigma | SA/T8787 | |
| Immobilon-FL Membrana PVDF | Merck Millipore | IPFL00010 | |
| Xylol | Sigma | Roth | |
| Peróxido de hidrogênio | Sigma | SA/00216763/000500 | solução de trabalho 3% |
| Albumina de soro bovino (BSA) | Thermo Fisher Scientific | A3294-100G | |
| Soro de cabra | Thermo Fisher Scientific | PCN5000 | |
| 4,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) | Thermo Fisher Scientific | D1306 | diluição de trabalho 1:50,000 |
| Mídia de montagem fluorada | Microscópio | Omnilab SA/F4680/000025 | |
| LSM700 | Carl Zeiss | ||
| HALT | Thermo Fisher Scientific | ||
| Precellys 24-Dual homogeneizador | Peqlab | 91-PCS24D | |
| Alexa Fluor 488 anticorpo conjugado | Thermo Fisher Scientific | A31619 | |
| Alexa Fluor 594 anticorpo conjugado | Thermo Fisher Scientific | A11005 | |
| Pierce BCA Proteína Ensaio Kit | Thermo Fisher Scientific | 10741395 | |
| Microtomo RM2255 | Leica | ||
| LSM700 microscópio confocal de varredura a laser | Carl Zeiss |
Referências
- Aguzzi, A. Cell biology: Beyond the prion principle. Nature. 459 (7249), 924-925 (2009).
- Kordower, J. H., Chu, Y., Hauser, R. A., Freeman, T. B. Lewy body-like pathology in long-term embryonic nigral transplants in Parkinson's disease. Nat Med. Olanow, C. W. 14 (5), 504-506 (2008).
- Li, J. Y., et al. Lewy bodies in grafted neurons in subjects with Parkinson's disease suggest host-to-graft disease propagation. Nat Med. 14 (5), 501-503 (2008).
- Hansen, C., et al. alpha-Synuclein propagates from mouse brain to grafted dopaminergic neurons and seeds aggregation in cultured human cells. J Clin Invest. 121 (2), 715-725 (2011).
- Masuda-Suzukake, M., et al. Prion-like spreading of pathological alpha-synuclein in brain. Brain. 136 (4), 1128-1138 (2013).
- Holmqvist, S., et al. Direct evidence of Parkinson pathology spread from the gastrointestinal tract to the brain in rats. Acta Neuropathol. 128 (6), 805-820 (2014).
- Luk, K. C., et al. Pathological alpha-synuclein transmission initiates Parkinson-like neurodegeneration in nontransgenic mice. Science. 338 (6109), 949-953 (2012).
- Sacino, A. N., et al. Induction of CNS alpha-synuclein pathology by fibrillar and non-amyloidogenic recombinant alpha-synuclein. Acta Neuropathol Commun. 1, 38(2013).
- Sacino, A. N., et al. Intramuscular injection of alpha-synuclein induces CNS alpha-synuclein pathology and a rapid-onset motor phenotype in transgenic mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (29), 10732-10737 (2014).
- Mougenot, A. L., et al. Prion-like acceleration of a synucleinopathy in a transgenic mouse model. Neurobiol Aging. 33 (9), 2225-2228 (2012).
- Bartz, J. C., Kincaid, A. E., Bessen, R. A. Rapid prion neuroinvasion following tongue infection. J Virol. 77 (1), 583-591 (2003).
- Tamgüney, G., et al. Measuring prions by bioluminescence imaging. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (35), 15002-15006 (2009).
- Watts, J. C., et al. Transmission of multiple system atrophy prions to transgenic mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (48), 19555-19560 (2013).
- Breid, S., et al. Neuroinvasion of alpha-Synuclein Prionoids after Intraperitoneal and Intraglossal Inoculation. J Virol. 90 (20), 9182-9193 (2016).
- Giasson, B. I., et al. Neuronal alpha-synucleinopathy with severe movement disorder in mice expressing A53T human alpha-synuclein. Neuron. 34 (4), 521-533 (2002).
- Zhu, L., et al. Non-invasive imaging of GFAP expression after neuronal damage in mice. Neurosci Lett. 367 (2), 210-212 (2004).
- Bernis, M. E., et al. Prion-like propagation of human brain-derived alpha-synuclein in transgenic mice expressing human wild-type alpha-synuclein. Acta Neuropathol Commun. 3 (1), 75(2015).
- Gunther, R., et al. Clinical testing and spinal cord removal in a mouse model for amyotrophic lateral sclerosis (ALS). J Vis Exp. (61), (2012).
- Jackson-Lewis, V., Przedborski, S. Protocol for the MPTP mouse model of Parkinson's disease. Nat Protoc. 2 (1), 141-151 (2007).
- Mathews, S. T., Plaisance, E. P., Kim, T. Imaging systems for westerns: chemiluminescence vs. infrared detection. Methods Mol Biol. 536, 499-513 (2009).
- Kim, C., et al. Exposure to bacterial endotoxin generates a distinct strain of alpha-synuclein fibril. Sci Rep. 6, 30891(2016).
- Keller, A. F., Gravel, M., Kriz, J. Live imaging of amyotrophic lateral sclerosis pathogenesis: disease onset is characterized by marked induction of GFAP in Schwann cells. Glia. 57 (10), 1130-1142 (2009).
- Stöhr, J., et al. Distinct synthetic Abeta prion strains producing different amyloid deposits in bigenic mice. Proc Natl Acad Sci U S A. , (2014).
- Luk, K. C., et al. Intracerebral inoculation of pathological alpha-synuclein initiates a rapidly progressive neurodegenerative alpha-synucleinopathy in mice. J Exp Med. 209 (5), 975-986 (2012).
- Recasens, A., et al. Lewy body extracts from Parkinson disease brains trigger alpha-synuclein pathology and neurodegeneration in mice and monkeys. Ann Neurol. 75 (3), 351-362 (2014).
- Sacino, A. N., et al. Induction of CNS alpha-synuclein pathology by fibrillar and non-amyloidogenic recombinant alpha-synuclein. Acta Neuropathol Commun. 1 (1), 38(2013).
- Peelaerts, W., et al. alpha-Synuclein strains cause distinct synucleinopathies after local and systemic administration. Nature. 522 (7556), 340-344 (2015).
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Reimpressões e permissões
