Artigo de método

Espectroscopia de RMN como uma ferramenta robusta para a avaliação rápida do perfil lipídico do óleo de peixes suplementa

DOI:

10.3791/55547

⸱

1 de maio de 2017

 , 
1Department of Food Science and Technology, The Ohio State University, 2Foods for Health Discovery Theme, The Ohio State University

Neste artigo

Resumo

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Aqui, de alta resolução de 1 H e 13 C de Ressonância Magnética Nuclear (RMN) foi usada como uma ferramenta rápido e fiável para a análise quantitativa e qualitativa dos suplementos de óleo de peixe encapsulado.

Resumo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

A dieta ocidental é deficiente em n-3 ácidos gordos, por conseguinte, o consumo de suplementos de óleo de peixe é recomendado para aumentar a ingestão desses nutrientes essenciais. O objectivo deste trabalho é mostrar a análise qualitativa e quantitativa de suplementos de óleo de peixe encapsulados usando de alta resolução de 1 H e 13 C RMN utilizando espectroscopia de RMN dois instrumentos diferentes; um a 500 MHz e num instrumento de 850 MHz. Ambos protão (1 H) e de carbono (13 C) os espectros de RMN pode ser usado para a determinação quantitativa dos principais constituintes de suplementos de óleo de peixe. Quantificação dos lidos nos suplementos de óleo de peixe é conseguida através da integração dos sinais de RMN apropriados nos espectros de 1D relevante. Os resultados obtidos por 1 H e 13 C RMN estão em boa concordância com o outro, não obstante a diferença de resolução e sensibilidade entre os dois núcleos e os dois instrumentos. 1 H RMN ofertasa análise mais rápida em comparação com 13 C RMN, como o espectro pode ser gravado em menos de 1 min, em contraste com 13 C Análise de RMN, que tem a duração de 10 minutos a uma hora. O espectro de RMN de 13 C, no entanto, é muito mais informativa. Ele pode fornecer dados quantitativos para um maior número de ácidos gordos individuais e pode ser utilizado para determinar a distribuição posicionai de ácidos gordos no esqueleto de glicerol. Ambos os núcleos podem proporcionar informação quantitativa em apenas uma experiência sem a necessidade de purificação ou de separação de passos. A força do campo magnético afecta principalmente a espectros de RMN de 1 H, devido à sua baixa resolução em relação à RMN de 13 C, no entanto, os instrumentos de RMN ainda mais baixo custo pode ser eficazmente aplicado como um método padrão pelos laboratórios da indústria alimentar e de controlo de qualidade.

Introdução

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O consumo de n -3 ácidos gordos na dieta tem provado ser benéfico contra várias condições, tais como doenças do coração, 1, 2, 3, 4 doenças inflamatórias e diabetes 5. A dieta ocidental é considerada pobre em n -3 ácidos gordos e, portanto, o consumo de suplementos de óleo de peixe é recomendado para melhorar o n -6 / N -3 equilíbrio na alimentação 1 do consumidor. Apesar do recente aumento nos peixes consumo de suplemento de óleo, questões permanecem sobre a segurança, autenticidade e qualidade de alguns destes produtos. A análise de composição rápida e precisa de suplementos de óleo de peixe é essencial para avaliar adequadamente a qualidade destes produtos comerciais e garantir a segurança do consumidor.

As metodologias mais comuns para a avaliação do suplemento de óleo de peixes são a cromatografia gasosa (GC) e espectroscopia de infravermelho (IR). Enquanto estes métodos são altamente sensíveis, eles sofrem de várias desvantagens 6. A análise por CG é demorado (4-8 h), porque a separação e derivatização de compostos individuais é necessária 7 e oxidação lipídica pode ocorrer durante a análise 8, 9. Enquanto a espectroscopia de IR pode ser quantitativa, é requerido um modelo de previsão a ser construído usando regressão de mínimos quadrados parciais (PLSR), apesar de haver excepções em que bandas de IR podem ser atribuídas a um único composto 10. PLSR requer a análise de um grande número de amostras, o que aumenta o tempo de análise 11. Por esta razão, existe um interesse crescente no desenvolvimento de novas metodologias analíticas que permitem a análise rápida e precisa de um grande número de amostras de óleo de peixe. Organizações, tais como o Office de suplementos dietéticos (ODS) dos Institutos Nacionais de Saúde (NIH) e da Food and Drug Administration (FDA) têm colaborado com a Associação de Químicos Analíticos Oficiais (AOAC) para desenvolver estes novos métodos 12, 13.

Um dos métodos analíticos mais promissores para o rastreio e avaliação de matrizes multi-componentes, tais como suplementos dietéticos, é de Ressonância Magnética (RMN) nuclear 14, 15. espectroscopia de RMN tem várias vantagens: é uma técnica não-destrutiva e quantitativa, isto requer o mínimo de preparação da amostra, e caracteriza-se por uma excelente precisão e reprodutibilidade. Além disso, a espectroscopia de RMN é uma metodologia ambientalmente amigável porque utiliza apenas pequenas quantidades de solventes. O principal inconveniente da espectroscopia de RMN é a sua sensibilidade relativamente baixa em comparação com outros analytimétodos de cal, no entanto, avanços tecnológicos recentes em instrumentação, tais como campos magnéticos mais fortes, sondas criogénicos de vários diâmetros, processamento de dados avançados, e sequências de pulso versáteis e técnicas têm aumentado a sensibilidade até à gama de nM. Enquanto NMR instrumentação é de alto custo, a longa-vida de espectrómetros de RMN e as muitas aplicações da RMN reduzir o custo da análise a longo prazo. Este protocolo de vídeo detalhada destina-se a ajudar os novos profissionais no campo evitar perigos associados com um H e 13 C RMN análise espectroscópica de suplementos de óleo de peixe.

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Protocolo

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1. Preparação da Amostra RMN

Nota: Cuidado, consulte todas as folhas de dados de segurança pertinentes (MSDS) antes do uso. Clorofórmio deuterado (CDCl3) utilizados na preparação de amostras é tóxico. Utilize todas as práticas de segurança adequadas ao executar a preparação da amostra, incluindo o uso de um exaustor e equipamentos de proteção individual (óculos de segurança, luvas, jaleco, calça de corpo inteiro, fechou-toe sapatos).

  1. Preparação de 1 H e 13 C As amostras
    1. Extrair 120 ul (~ 110 mg) de óleo de peixe a partir de uma cápsula dietético usando uma seringa e colocá-lo em um frasco de vidro de 4 ml. Registar o peso do óleo de peixe.
    2. dissolução das amostras
      1. Dissolve-se cerca de 120 uL de óleo de peixe em 500 mL de CDCI3 contendo 0,01% de tetrametilsilano (TMS) que é usado como uma referência para o 1 H e 13 C deslocamentos químicos.
        NOTA: TMS é o usod apenas para a calibração de desvio químico (ver números de passos e 2.2.1.2.7 2.2.2.2.7), não para quantificação (ver números passo 2.2.1.3 e 2.2.2.3) fins.
      2. Prepara-se uma 2,6-di-terc-butil-4-metilfenol (BHT), solução estoque, se quantificação expressa em mg / g é desejado, por dissolução de cerca de 220 mg de BHT e 15 mg de crómio (III), acetilacetonato (Cr ( acac) 3) em 20 mL de CDCI3 contendo 0,01% de TMS. Use 500 uL da solução stock a dissolver-se 100 mg (± 10 mg) de óleo de peixe.
    3. Depois de dissolver o óleo (este leva alguns segundos), transferir toda a solução directamente para um tubo de RMN de alta qualidade de 5 mm e anexar uma tampa. Analisar as amostras dentro de 24 h após a preparação das amostras.

preparação 2. RMN Instrumento

Nota: Cuidado, cuidado para que a presença de fortes campos magnéticos produzidos pelos instrumentos de RMN pode afectar a dispositivos médicos e implformigas, como marca-passos e próteses cirúrgicas, bem como itens eletrônicos, como cartões de crédito, relógios, etc. é necessária precaução adicional quando a análise é realizada usando não-blindagem ímãs. Dois instrumentos de RMN foram utilizados para a aquisição de 1 H e 13 C RMN espectros; um espectrómetro operando a 850,23 MHz e 213,81 MHz para 1 H e 13 núcleos C, respectivamente, equipadas com um inversa de ressonância tripla arrefecida em hélio (TCI) sonda de 5 mm e um espectrómetro operando a 500,20 MHz e 125,77 MHz para o 1 H e 13 C núcleos, respectivamente, equipados com uma banda larga observada (BBO) de azoto arrefeceu-se-sonda de 5 mm. Todas as experiências foram realizadas a 25 ± 0,1 ºC e os espectros foram processados ​​por um pacote de dados de RMN de aquisição e análise de software de processamento padrão (ver Lista de Materiais).

  1. Preparação para a aquisição do espectros de RMN
    Nota: 1 H e 13 C RMN espectrospode ser adquirido, consequentemente, sem retirar a amostra do instrumento.
    1. Inserir o tubo de RMN em uma turbina rotativa (ver Lista de Materiais).
    2. Colocar o elemento rotativo e do tubo na parte superior de um medidor de profundidade graduada e suavemente empurrar o topo do tubo até a sua parte inferior toca no fundo do calibre.
    3. Colocar a amostra de RMN em um local aberto do SampleCase. Nota o número do slot a amostra é colocada em.
    4. Para carregar a amostra no RMN, volte para o computador de controle e digite 'sx #', onde # é o slot no SampleCase segurando sua amostra.
    5. Aguarde até que o sinal de deutério de CDCl3 para aparecer na tela da janela de bloqueio. Se ele não aparecer automaticamente, digite "lockdisp". Assim que o sinal de deutério é visível, tipo "bloquear" na linha de comando e seleccionar "CDCl3" da lista do solvente, a fim de bloquear a amostra usando a ressonância deutério CDCl3.
      NOTA: O deutério signal não pode aparecer se o utilizador anterior utilizado um solvente diferente. O usuário deve esperar para o indicador de que a amostra é baixo, em seguida, bloquear.
    6. Tipo "bsmsdisp" na linha de comando para garantir a fiação não está ativo. Se o botão "SPIN" é verde, clique nele para desativar spinning.
    7. Digite o "novo" comando para criar um novo conjunto de dados. Digite um nome para o conjunto de dados na guia "NAME" eo número de experiência no separador "EXPNO". Usar número "1" no separador "PROCNO". Na aba "Experiment", clique em "Select" e escolha a opção "PROTON" arquivo de parâmetro. Escreva o título do experimento na guia "TITLE". Clique em "OK".
    8. Tipo "getprosol" na linha de comando para obter os parâmetros padrão para a sonda de RMN corrente e solvente.
    9. Repetir o passo 2.1.7 em 13 C, da selecção da sequência de impulsos "C13IG" no separador "Experiment" para a 1D 13 C inversa gated dissociado experimento.
    10. Tipo "getprosol" na linha de comando para obter os parâmetros padrão para a sonda de RMN corrente e solvente.
    11. Digite o "Atma" comando para executar a sintonização automática e correspondência da sonda para ambos os núcleos de carbono e prótons.
    12. Executar gradiente unidimensional calços para conseguir um campo magnético altamente homogénea, e forma de linha, portanto óptimo para os sinais de RMN.
      1. Use o procedimento automático padrão para 1D calços, simplesmente executando sequencialmente os comandos "qu topshim 1dfast ss", "qu topshim tuneb ss" e "qu topshim relatório" na linha de comando.
  2. otimização de parâmetros
    1. calibração 90 ° pulso
      1. Criar um novo conjunto de dados para um H (ver passos 2.1.7 e 2.1.8).
      2. Digite o "paropt" comando na linha de comando para iniciar o programa de automação para calibrar o pul 90 °se. Escolha duração do pulso, p1, como o parâmetro a ser modificado.
      3. Comece com "2" mS como o valor inicial de p1, digite "2" uS incrementos e realizar experimentos "16".
      4. Criar um novo conjunto de dados de 13 C (ver o passo 2.1.9) e repetir o processo para 13 núcleos C (ver passos 2.2.1.2 e 2.2.1.3).
    2. T uma medição medido pelo método nula 16 para 1H
      NOTA: O método nulo utiliza a sequência de impulsos de recuperação de inversão, que consiste de uma sequência de pulso de 180 ° por um atraso (tau), para permitir o relaxamento ao longo do eixo z e um final de 90 ° pulso que cria a magnetização transversal observável.
      1. Criar um novo conjunto de dados para um H (ver passos 2.1.7 e 2.1.8).
      2. Tipo "t1ir1d pulprog" para alterar a sequcia de pulso para a expericia de inversão-recuperação.
      3. Digite os seguintes comandos no commanA linha d para configurar a largura espectral em ppm, o centro do transmissor RF, o número de varrimentos o número de varrimentos do manequim e o número de pontos de dados "sw 8", "o1p 3,8", "ns 2" ", ds 2" e "64K td".
      4. "P1 (valor)" Tipo e entram os valores de duração de pulso de 90 °, tal como determinado pela calibragem do pulso (ver o passo 2.2.1) e tipo "p2 (valor)" para o pulso de 180 ° (o valor de duração para os 180 ° pulso é a duração de 90 ° pulso multiplicado por dois).
      5. Definir o atraso de reciclagem para um valor muito grande, como 10 s, digitando "d1 10".
      6. Definir tau a uma curta valor, como 10 ms, digitando "10ms D7" na linha de comando.
      7. Defina o ganho do receptor (RG) para um valor apropriado utilizando os "RGA" comando para cálculo automático de RG.
      8. Execute um espectro digitando o comando "zg".
      9. Executar Fourier-transformação, escrevendo "PQE"na linha de comando.
      10. Realizar correção de fase automática, digitando o comando "apk" na linha de comando. Se forem necessários ajustes de fase adicionais para melhorar ainda mais o espectro, clique na guia "Processos" e clique no ícone "Ajuste Fase" para entrar no modo de correção de fase.
        1. Utilizar a de ordem zero (0) e ícones de primeira ordem de correcção de fase (1), arrastando o rato até que todos os sinais estão no modo de absorção negativo. Aplicar e salvar os valores de correção de fase, clicando no botão "Return e Salvar" para sair do modo de correção de fase.
      11. Aumentar a tau até que todos os picos são positivos ou anulado por repetição dos passos 2.2.2.6-2.2.2.9. Para determinar o valor de t 1, basta dividir o valor de Tau em que o pico é anulado com ln2.
    3. T uma medição medido pelo método nula 16 para 13 C
      1. Criar um novo conjunto de dados de 13 C (veja o passo 2.1.9)
      2. Tipo "pulprog t1irpg" para alterar a sequcia de pulso para a expericia de inversão-recuperação para núcleos de carbono.
      3. Digitar os seguintes comandos na linha de comando para configurar a largura espectral em ppm, o centro do transmissor RF, o número de varrimentos, o número de varrimentos do manequim e o número de pontos de dados: "sw 200", "o1p 98" , "ns 8", "ds 2" e "64K td".
      4. "P1 (valor)" Tipo e entram os valores de duração de pulso de 90 °, tal como determinado pela calibragem do pulso (ver o passo 2.2.1) e "P2 (valor) de" tipo para o pulso de 180 ° (o valor de duração é os 90 ° duração do pulso multiplicado por dois).
      5. Definir o atraso de reciclagem para um valor muito grande, como 100 s, digitando "d1 100".
      6. Set tau a uma curta valor, como 100 ms, digitando "100ms D7" na linha de comando.
      7. Defina o receivganho er (RG) para um valor apropriado utilizando os "RGA" comando para cálculo automático de RG.
      8. Execute um espectro digitando o comando "zg".
      9. Executar Fourier-transformação, digitando "EFP" na linha de comando.
      10. Realizar correção de fase automática, digitando o comando "apk" na linha de comando. Se forem necessários ajustes de fase adicionais para melhorar ainda mais o espectro, clique no ícone "Ajuste Phase" e os ícones de correcção de fase para ordem zero (0) e fase (1) correção de primeira ordem.
        1. Enquanto clica nos ícones de correção de ordem zero e de fase de primeira ordem, arraste o mouse até que todos os sinais estão em modo de absorção negativa. Aplicar e salvar os valores de correção de fase, clicando no botão "Return e Salvar" para sair do modo de correção de fase.
      11. Aumentar a tau até que todos os picos são positivos ou anulado por repetição dos passos 2.2.3.6-2.2.3.9. Para determinaro valor de t 1, basta dividir o valor de Tau em que o pico é anulado com ln2.
  3. Unidimensional (1D) os espectros de RMN
    1. 1 H-RMN Os espectros
      1. Aquisição dos dados de RMN
        1. Ir para o conjunto de dados de 1 H criado no passo 2.1.7 e utilizar o "pulse-adquirem" sequência de impulsos padrão, "ZG", digitando "pulprog zg" na linha de comando.
        2. Digitar os seguintes comandos na linha de comando para configurar a largura espectral em ppm, o centro do transmissor RF, o número de varrimentos, o número de varrimentos do manequim, o número de pontos de dados e a duração do pulso para um ângulo de 90 ° pulso : "sw 8", "o1p 3,8", "ns 2", "ds 2", "td 64K" e "P1 (conforme determinado pela calibragem pulso)" (ver o passo 2.2.1).
          NOTA: pontos de dados 32K pode ser usado para o instrumento 500 MHz.
        3. Definir um atraso de relaxamento de 7 s para o instrumento de 500 MHz ou 9 s para o instrumento de 850 MHz, escrevendo "7s D1" ou "9s d1", respectivamente, na linha de comando.
        4. Defina o ganho do receptor (RG) para um valor apropriado utilizando os "RGA" comando para cálculo automático de RG.
        5. Digite "baseopt digmod" para adquirir um espectro com uma melhor linha de base.
        6. Comece a aquisição, digitando o comando "zg" pulso adquirir na linha de comando.
      2. Processamento dos dados de RMN
        1. Digite "64K si" na linha de comando para aplicar zero enchimento e definir o tamanho do espectro real para 64K.
        2. Definir a linha de alargamento parâmetro para 0,3 Hz, escrevendo "lb 0,3" na linha de comando para aplicar uma função de ponderação (decaimento exponencial) com uma linha de factor de ampliação de 0,3 Hz antes da transformação de Fourier.
        3. Executar Fourier-transformação, digitando "EFP" no comandolinha.
        4. Realizar correção de fase automática, digitando o comando "apk" na linha de comando. Se forem necessários ajustes de fase adicionais para melhorar ainda mais o espectro, clique na guia "Processos" e clique no ícone "Ajuste Phase" e os ícones de correcção de fase para ordem zero (0) e correção de fase de primeira ordem (1) .
          1. Enquanto clica nos ícones de correção de ordem zero e de fase de primeira ordem, arraste o mouse até que todos os sinais estão em modo de absorção positiva. Aplicar e salvar os valores de correção de fase, clicando no botão "Return e Salvar" para sair do modo de correção de fase.
        5. Aplicar uma função polinomial de quarta ordem para correção de linha de base na integração, digitando o comando "abs n".
          NOTA: Este garante uma linha de base plana espectral com uma intensidade mínima.
        6. Deslocamentos químicos em ppm relatório de TMS (δ = 0). Clique na calibração ( "Calib. Axé "ícone), e coloque o cursor com a linha vermelha no topo do sinal de TMS RMN (pico mais próximo a 0). Clique esquerdo e digite '0'.
      3. Análise dos dados de RMN
        1. Integrar a região espectral de δ 1,1 a ô 0,6, bem como dos picos a δ 4,98, δ 5,05 e δ 5,81 utilizando o ícone "integrar" (sob a guia "Processo") e o destaque ícone ( "definir novos Region"). Esquerda clique e arraste pelas integrais.
          NOTA: Se não há necessidade de se concentrar em uma região, clique no ícone de destaque para desativar e clique esquerdo e arraste o mouse para fazer zoom sobre a região. Para ajustar a intensidade do limiar, use o botão do meio do mouse, se necessário. Clique no ícone destaque novamente para fazer a função de integração activa, em seguida, passar para o próximo pico.
          1. Normalizar a soma das integrais acima de 100 com o botão direito sobre o valor integral que aparecems sob o sinal e selecione "Normalizar soma de integrais". Introduza o valor "100" na caixa e clique no botão "Retorno e Save" para sair do modo de integração.
        2. Quando se utiliza o BHT como um padrão interno, integrar o pico a δ 6,98 e definir a igual parte integrante das milimoles de BHT por 0,5 mL da solução de estoque.
        3. Integrar os picos de interesse (ver passo 2.3.1.3.1) que se estende de 10 Hz a partir de cada lado do pico, quando possível.
        4. Avance para executar 13 C-RMN aquisição e processamento de espectro de uma forma semelhante.
    2. 13 C-RMN Os espectros
      1. Aquisição dos dados de RMN
        1. Ir para o conjunto de dados de 13 C e usar o inverso fechado sequência de impulsos dissociado, "zgig" digitando "pulprog zgig" na linha de comando.
          NOTA: Para executar um experimento de carbono com o decou banda larga padrãosequência de impulsos PLED, tipo "pulprog zgpg" na linha de comando.
        2. Digitar os seguintes comandos na linha de comando para configurar a largura espectral em ppm, o centro do transmissor RF, o número de varrimentos, o número de varrimentos do manequim, o número de pontos de dados e a duração do pulso para um ângulo de 90 ° pulso : "sw 200", "o1p 95", "16 ns" "ds 2", "td 64K" e "P1 (conforme determinado pela calibragem pulso)" (ver passo 2.2.1.4).
        3. Definir um atraso de relaxamento de 35 s para o instrumento de 500 MHz ou 45 s para o instrumento de 850 MHz, escrevendo "35s D1" ou "45s d1", respectivamente, na linha de comando. Quando se utiliza o BHT, o atraso de relaxamento deve ser de 50 s no instrumento de 500 MHz e 60 s no instrumento de 850 MHz.
        4. Defina o ganho do receptor (RG) para um valor apropriado utilizando os "RGA" comando para cálculo automático de RG.
        5. Digite "baseopt digmod" na linha de comando para adquirir um espectro wom base melhorada.
        6. Comece a aquisição, digitando o comando "zg" pulso adquirir na linha de comando.
      2. Processamento dos dados de RMN
        1. Digite "64K si" na linha de comando para aplicar zero enchimento e definir o tamanho do espectro real para 64K.
        2. Definir a linha de alargamento parâmetro para 1,0 Hz, escrevendo "lb 1,0" na linha de comando para aplicar uma função de ponderação (decaimento exponencial) com uma linha de factor de ampliação de 1,0 Hz antes da transformação de Fourier.
        3. Executar Fourier-transformação, digitando "EFP" na linha de comando.
        4. Realizar correção de fase automática, digitando o comando "apk" na linha de comando. Se forem necessários ajustes de fase adicionais para melhorar ainda mais o espectro, clique na guia "Processos" e clique no ícone "Ajuste Phase" e os ícones de correcção de fase para ordem zero (0) e (1) correção de fase de primeira ordem .
          1. enquanto clica nos ícones de ordem zero e correção de fase de primeira ordem, arraste o mouse até que todos os sinais estão em modo de absorção positiva. Aplicar e salvar os valores de correção de fase, clicando no botão "Return e Salvar" para sair do modo de correção de fase.
            NOTA: Para os espectros de carbono registrados na freqüência de Larmor de 214 MHz (o instrumento de 850 MHz) a correção dos erros dependentes de frequência (de primeira ordem) pode ser desafiador e demorado para os usuários menos experientes por causa dos grandes efeitos off-ressonância do 90 ° pulso.
        5. Aplicar uma função polinomial de quarta ordem para correção de linha de base na integração, digitando o comando "abs n" na linha de comando.
        6. Deslocamentos químicos em ppm relatório de TMS (δ = 0). Clique no ícone de calibração ( "Calib. Axis"), e coloque o cursor com a linha vermelha no topo do sinal de NMR a ser referenciado. clique esquerdo e digite "0".
      3. Análise dos dados de RMN
        1. Integrar a região espectral de δ 175 a ô 171 usando o ícone "integrar" (na guia "Processo") eo destaque ícone ( "Definir nova Região"). Esquerda clique e arraste pelas integrais.
          NOTA: Se não há necessidade de se concentrar em uma região, clique no ícone de destaque para desativar e clique esquerdo e arraste o mouse para fazer zoom sobre a região. Clique no ícone destaque novamente para fazer a função de integração activa, em seguida, passar para o próximo pico.
          1. Defina a integral a 100, fazendo um clique direito sobre o valor integral que aparece sob o sinal e selecione "Calibrar Corrente Integral". Introduza o valor "100" na caixa e clique no "Return e salvar" para sair do modo de integração.
        2. Quando se utiliza o BHT como um padrão interno, integrar o pico a 151,45 δ e definir a igual parte integranteas milimoles de BHT por 0,5 mL da solução de estoque.
        3. Integrar os picos de interesse que se estende de 5 Hz a partir de cada lado do pico (ver passo 2.3.2.3.1).

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Resultados

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1 H e 13 C espectros de RMN foram recolhidos para suplementos de óleo de peixe, disponíveis comercialmente, utilizando dois instrumentos de RMN; um 850 MHz e um espectrómetro de 500 MHz. Estes espectros podem ser usadas para a determinação quantitativa de componentes de óleo de peixe, tais como o ácido docosahexaenóico (DHA) e ácido eicosapentaenóico (EPA), bem como outros compostos, tais como n -1 cadeias acilo e índice importante nutricionalmente, tais co...

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Discussão

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Modificações e Estratégias para a resolução de problemas

Qualidade espectral. A largura de linha do sinal de NMR e, assim, a resolução do espectro de RMN é altamente dependente de calço, o qual é um processo para a optimização da homogeneidade do campo magnético. Para análises de rotina, 1D calçamento está adequada e uma shimming 3D não é necessária, uma vez que é realizada por pessoal de RMN em uma base regular. Se este não for o caso, um calço 3D deve ser realizada antes da a...

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Divulgações

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este trabalho foi apoiado pelos Alimentos para Health Discovery tema no The Ohio State University e do Departamento de Ciência e Tecnologia de Alimentos no The Ohio State University. Os autores gostariam de agradecer a facilidade NMR no The Ohio State University ea facilidade NMR da Penn State University.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Avance III 850 Instrumento de RMNBruker
Avance III 500 Instrumento de RMNBruker
TCI Sonda de 5 mmBrukerPonta de prova de RMN inversa refrigerada a hélio (detetada por protões) com três canais independentes (1H, 13C, 15N)
BBO prodígio sonda de 5 mmBrukerSonda de observação resfriada por nitrogênio (núcleos X detectados), com dois canais; um para detecção de 1H e 19F e outro para núcleos X (cobrindo de 15N a 31P)
Spinner turbinda Brukersão feitos de materiais poliméricos e têm um anel de vedação de borracha para manter o tubo de RMN firmemente no lugar
Topspin 3.5Bruker
clorofórmio deuteradoSigma-Aldrich  865-49-699,8 átomos % D, contém 0,03 TMS
2,6-Di-terc-butil-4-metilfenolSigma-Aldrich  128-37-0pureza >99%
amostras de óleo
NMRNew EraNE-RG5-75mm OD rotina " R” Sistema de gestão de sistemas do tubo de amostra
BSMSBruker; dispositivo de sistema de controlo
Os spinners de RMN de peixe tubos Bruker da série NMR

Referências

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