Estudos de vírus da influenza A em um modelo do rato da infecção

Resumo

Vírus da influenza A (IAVs) são importantes patógenos respiratórios humanos. Para entender a patogenicidade de IAVs e realizar testes pré-clínicos de vacina romance abordagens, modelos animais, imitando a fisiologia humana são necessários. Aqui, descrevemos técnicas para avaliar a patogênese do IAV, respostas humorais e eficácia de vacina usando um modelo do rato da infecção.

Resumo

Vírus da gripe causam mais de 500.000 mortes em todo o mundo¹ e estão associados a um custo anual de US $ 12 bilhões nos Estados Unidos sozinho, considerando médica direta e as despesas de hospitalização e de absentismo de trabalho². Modelos animais são cruciais em estudos de Influenza A virus (IAV) para avaliar a patogênese viral, as interações patógeno-hospedeiro, respostas imunes, e a eficácia da vacina atual e/ou nova abordagens bem como antivirais. Ratos são um modelo animal pequeno vantajoso porque seu sistema imunológico é evolutivamente semelhante ao encontrado em seres humanos, eles estão disponíveis de fornecedores comerciais como indivíduos geneticamente idênticos, há múltiplas variedades que podem ser exploradas para avaliar a base genética das infecções, e são relativamente baratos e fáceis de manipular. Para recapitular infecção IAV nos seres humanos através das vias aéreas, os ratos são primeiro anestesiados antes da inoculação intranasal com infecciosas IAVs sob contenção adequada de biossegurança. Após a infecção, a patogênese da IAVs é determinada pelo monitoramento diário da morbidade (perda de peso de corpo) e a taxa de mortalidade (sobrevivência). Além disso, a patogênese viral também pode ser avaliada por avaliar a replicação do vírus no superior (mucosa nasal) ou inferior (pulmões) do trato respiratório de ratos infectados. Respostas humorais após infecção IAV podem ser rapidamente avaliadas por sangramento não-invasiva e detecção do anticorpo secundário ensaios destinados a detectar a presença de total ou anticorpos neutralizantes. Aqui, descrevemos os métodos comuns usados para infectar camundongos practicar (i.n) com IAV e avaliar a eficácia de proteção, humorais respostas imunes e patogênese.

Introdução

IAVs são vírus envelopadas classificados na família Orthomyxoviridae ³. Eles contêm oito moléculas de RNA único-encalhado com polaridade negativa³. Em humanos, IAVs causam epidemias sazonais e ocasionais pandemias de consequência importante quando novos vírus são introduzidas na população humana⁴. Além disso, IAVs sazonais são altamente e rapidamente transmitidos entre os seres humanos, produzindo uma elevada perda econômica em todo o mundo a cada ano^2,5. IAV os sintomas incluem tosse, congestão nasal, febre, mal-estar, dor de cab....

Protocolo

todos os protocolos animais descritos aqui foram aprovados pelo cuidado Animal institucional e Comissão de utilização (IACUC) e a Comissão de biossegurança institucional (IBC) na Universidade de Rochester faculdade de medicina e odontologia e cumprir com as recomendações do guia para o cuidado e o uso de animais de laboratório do nacional pesquisa Conselho 22. As instalações e programas do viveiro e divisão de laboratório de medicina Animal da faculdade de medicina e odontologia são acreditados pela AAALAC International e cumprirem com a lei estadual, a lei federal e a política National Institutes of Health (NIH). Semelhantes requisitos devem ser aplicados em cada in....

Resultados

Caracterização de patogênese viral em camundongos

A patogênese da IAV está relacionada a morbidade e a mortalidade causada por sua infecção. Esses dois parâmetros podem ser avaliados em camundongos facilmente: morbidade IAV está associada a perda de peso corporal em camundongos infectados e a porcentagem de sobrevivência irá indicar a taxa de mortalidade (Figura 1). O peso corporal e sobrevivência em c.......

Discussão

O modelo do rato do IAV é amplamente utilizado na vivo estudos de eficácia de proteção, a imunogenicidade e a patogênese do IAV. O pequeno tamanho dos ratos torna fácil de manipular e armazenar em comparação com outros modelos animais, como furões ou cobaias. Além disso, a facilidade em termos de custo de animal, habitação e reprodução permitem sua utilização em testes pré-clínicos vacinação em que um grande número de animais é necessários. Notavelmente, desde que os ratos têm sido usados em pesquisa de múltipla.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Células epiteliais do Rim Canino Madin-Darby (MDCK)	ATCC	CCL-34
Camundongos C57BL/6 fêmeas de seis a oito semanas de idade	Instituto Nacional do Câncer (NCI)	01XBE
Células vermelhas de peru	Biolink Inc		Loja em 4 ° C
Dulbecco' s Águia modificada' s médio (DMEM)	Corning Cellgro	15-013-CV	Loja em 4 ° C
Fetal Soro Bovino (FBS)	Seradigm	1500-050	Armazenar a -20 ° C
Penicilina/Estreptomicina/L-Glutamina (PSG) 100x	Corning	30-009-CI	Loja a -20 ° C
Penicilina/Estreptomicina (PS) 100x	Corning	30-00-CI	Armazenar a -20 &graus; C
Bovin Solução de albumina (BA)	Sigma-Aldrich	A7409	Loja em 4 ° C
Bovin Albumina Sérica (BSA)	Sigma-Aldrich	A9647	Loja em 4 ° C
Tripsina tratada com tosilsulfonil fenilalanil clorometilcetona (TPCK)	Sigma-Aldrich	T8802	Armazenar a -20 ° C
Formalina tamponada neutra 10%	EMD	65346-85	Loja na RT
Triton X-100	J.T.Baker	X198-07	Loja na RT
Anticorpo monoclonal anti-NP Influenza A Virus HB-65	ATTC	H16-L10-4R5	Loja em -20 ° C
Imunoglobulinas anti-camundongo de coelho policlonal / FITC	Dako	F0261	Armazenar em 4 ° C
ECL Anti-mouse IgG, anticorpo inteiro ligado à peroxidase de rábano	GE Healthcare	LNA931V/AG	Armazenar a 4 ° C
Conjunto de substrato TMB	BioLegend	421101	Armazenar a 4 ° C
Vmax Leitor de placa cinética	Molecular Devices
Dounce Tissue Grinders	Thomas Scientific	7722-7
Enzima destruidora de receptores, RDE (II)	Denka Seiken Co.	370013	Armazenar a -20 &graus; C
Cristal	Violeta Fisher Scienctific	C581-100	Armazene na RT
Placa de Cultura de Células de 96 poços	Greiner Bio-one	655-180
Placas de Cultura de Células 100 mm	Greiner Bio-one	664-160
Nunc MicroWell MicroWell Microplacas de 96 Poços	Thermo Fisher Scienctific	269620
Nunc 96-Well Placas de MicroWell de Fundo Cônico de Poliestireno	Thermo Fisher Scienctific	249570
Puralub Vet Pomada	Dechra	9N-76855
Microscópio fluorescente	Olympus	Olympus IX81