Method Article

Semiautomated Longitudinal baseados em Microcomputed tomografia computadorizada quantitativa análise estrutural de um modelo de fratura Vertebral relacionadas com osteoporose rato Nude

DOI:

10.3791/55928

⸱

September 28th, 2017

 ,  ,  ,  ,  , 
1Skeletal Biotech Laboratory, Hebrew University-Hadassah Faculty of Dental Medicine, 2Department of Surgery, Cedars-Sinai Medical Center, 3Board of Governors Regenerative Medicine Institute, Cedars-Sinai Medical Center, 4Biomedical Imaging Research Institute, Cedars-Sinai Medical Center, 5Department of Orthopedics, Cedars-Sinai Medical Center

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

O objetivo do presente protocolo é gerar um modelo de fratura de compressão vertebral osteoporose-relacionados do rato nude que pode ser avaliada no sentido longitudinal na vivo usando uma microcomputed semiautomated baseado em tomografia computadorizada quantitativa análise estrutural.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fraturas por compressão vertebral relacionadas com osteoporose (OVCFs) são uma necessidade comum e clinicamente não satisfeita com o aumento da prevalência, como a população do mundo envelhece. Modelos animais de OVCF são essenciais ao desenvolvimento de estratégias de engenharia de tecido translacional pré-clínicos. Enquanto um número de modelos existe atualmente, este protocolo descreve um método otimizado para induzir defeitos vertebrais altamente reprodutíveis múltiplos em um único rato nude. Uma tomografia computadorizada romance longitudinal semiautomated microcomputed (µCT)-com base quantitativa análise estrutural dos defeitos vertebrais também é detalhado. Brevemente, ratos foram fotografados em vários pontos de tempo no pós-operatório. O exame de dia 1 foi reorientado para uma posição padrão, e um volume padrão de interesse foi definido. Exames subsequentes µCT de cada rato foram registrados automaticamente para a digitalização de dia 1 para que o mesmo volume de interesse foi então analisado para avaliar para formação de osso novo. Esta abordagem versátil pode ser adaptada a uma variedade de outros modelos em análise baseada em imagem longitudinal poderia beneficiar de alinhamento preciso de semiautomated 3D. Tomados em conjunto, este protocolo descreve um sistema facilmente quantificável e facilmente reproduzível para pesquisa de osteoporose e osso. O protocolo sugerido demora 4 meses para induzir a osteoporose em ratos ovariectomizados nus e entre 2,7 e 4 h para gerar, de imagem e analisar dois defeitos vertebrais, dependendo do tamanho do tecido e equipamento.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mais de 200 milhões de pessoas no mundo sofrem de osteoporose1. O patológico subjacente à diminuição de densidade mineral óssea (DMO) e microarquitetura óssea alterada aumentar a fragilidade óssea e, consequentemente, o risco relativo de fratura2. A osteoporose é tão prevalente e prejudiciais à saúde que a OMS definiu uma preocupação de saúde pública. Além disso, como a população do mundo é esperada para a idade, osteoporose deverá tornar-se ainda mais comum.

Fraturas osteoporóticas vertebrais de compressão são as fraturas de fragilidade mais comuns, estimadas em mais de 750.000 por ano nos Estados Unidos. Eles são associados com morbidade significativa e tanto como uma mortalidade de nove vezes maior taxa3. Em ensaios clínicos, actualmente disponíveis intervenções cirúrgicas, tais como Vertebroplastia e kyphoplasty, foram encontradas para ser sem mais eficaz do que uma farsa tratamento4,5, deixando apenas dor de gestão disponível para estes pacientes. Desde tratamentos OVCF atuais são limitados, é imperativo desenvolver um modelo animal que pode se replicar o transtorno6,7,8. Tais modelos animais poderiam facilitar tanto a investigação de métodos de tratamento atual e o desenvolvimento de novas terapias que irá traduzir na prática clínica. Osteoporose tem sido induzida e sustentada em animais modelo através da administração de uma dieta de baixa-cálcio (LCD) em conjunto com o grupo osteopênico1,9,10,11, 12 , 13 , 14 , 15. para modelar ainda mais a perda óssea associada com OVCFs, defeitos ósseos vertebrais foram estabelecidos em ratos imunocompetentes osteoporóticas 16,17,18,19, 20,21,22,23,24. Neste trabalho, é apresentado um modelo de defeito vertebral de ratos imunodeprimidos com osteoporose modelado. Este novo modelo pode ser usado para avaliar terapias baseadas em células envolvendo células-tronco derivadas de várias fontes e espécies para a reparação das fraturas desafiadoras, tais como OVCFs.

Imagem de osso é uma parte crucial da avaliação das fraturas e doenças ósseas. Métodos de imagem avançados foram desenvolvidos para a avaliação precisa das alterações estruturais do osso e de estratégias de regeneração25. Entre eles, a imagem de µCT tem emergido como um método não-invasivo, fácil de usar e barato que fornece imagens 3D de alta resolução. Imagem de µCT tem várias vantagens sobre outras modalidades na avaliação de pacientes de osteoporose, pois oferece 3D de alta resolução de osso microarquitetura26 que podem então ser analisados quantitativamente. Este último então pode ser usado para comparar os efeitos terapêuticos dos tratamentos propostos. Com efeito, na vivo imagem µCT é um padrão-ouro para a regeneração do defeito vertebral monitoramento de16,1,27. No entanto, poucas publicações28,29,30,31 têm empregado ferramentas de registo automatizado para minimizar o erro de precisão de µCT, viés de interpolação e usuário-dependência análise baseada em imagem. Recentemente, fomos os primeiros a usar um processo de registo para melhorar a análise da regeneração óssea em um osso padronizada vazio, conforme explicado no presente protocolo32 .

O método descrito aqui pode ser usado para estudar o efeito das terapias celulares romance OVCFs, desimpedido pelo host respostas de células T que podem rejeitar xenogénicas ou alogênico de células. Osteoporose é induzida em ratos jovens através de ovariectomia (OVX) e 4 meses de um LCD. A tenra idade dos ratos OVX, combinado com o LCD, nos permitiu alcançar uma massa óssea de pico baixo, imitando a osteoporose pós-menopausa por levando a perda óssea irreversível. Isto pode ser explicado em parte pelo fato de que, durante o LCD e a cerca de 3 meses de idade, a transição de ratos de modelagem para remodelar o osso fase nas vértebras lombares33, aumentando assim a probabilidade de manutenção a osteoporose está na hora. Usar animais jovens torna este modelo mais custo-eficaz, como custam menos. No entanto, é limitada pela inerentemente não contabilizar as alterações biológicas do animal de envelhecimento.

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Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

todas as experiências em animais foram realizadas sob um protocolo aprovado pelo Comitê de uso (IACUC) do Cedars-Sinai Medical Center (protocolo # 3609) e institucional Cuidado Animal. A anestesia foi administrada para todos os procedimentos cirúrgicos e de imagem. Todos os animais estavam alojados em conformidade com protocolos aprovados IACUC.

Nota: O desenho experimental do presente protocolo é mostrado na Figura 1. Comprar ratos de seis semanas de idade com seus ovários cirurgicamente removido e alimentá-los um LCD consistindo de fosfato de cálcio e 0,77% de 0,01%. Após um período de 4 meses de um LCD, perfure um defeito vertebral de tamanho crítico na quarto e quinto lombares corpos vertebrais (L4-L5). Após a cirurgia, os ratos da imagem no dia 1 e semanas 2, 4, 8 e 12 após o estabelecimento do defeito. Localizar o defeito margens sobre o exame de dia 1, reorientar-se para uma posição padrão e definir um volume cilíndrico de interesse (VOI). Registre automaticamente os exames subsequentes µCT (i.e., semanas 2, 4, 8 e 12) de cada rato para a posição padrão definido para a pesquisa correspondente do dia 1. Aplicam-se no dia 1 predefinidos VOI para os exames cadastrados. Avaliar a densidade dos ossos volume e densidade aparente das VOIs.

1. indução da osteoporose

  1. colocar ratos de seis semanas de idade modelo ovariectomia em 4 meses de um LCD consistindo de fosfato de cálcio e 0,77% 0.01%.
  2. Interruptor de volta a uma dieta normal.
    Nota: Estes ratos serão referidos como " ratos osteoporóticos " daqui por diante.

2. Modelo de defeito vertebral

Nota: O momento é de 40-50 min por animal.

  1. Autoclave tudo cirúrgico antes da cirurgia de ferramentas.
  2. No caso de múltiplas cirurgias, esterilizar todos os instrumentos cirúrgicos.
    1. Lavar as ferramentas e colocá-los em um banho do sonicador para 5 min. Coloque-os em um conjunto de esterilizador de grânulo quente a 250 ° C, para 20 s. permitir as ferramentas para esfriar por 5 min.
  3. Induzir anestesia.
    1. Lugar o rato osteoporótica na câmara de indução anexado a uma máquina de anestesia, com um sistema central de eliminação. Induzir anestesia usando 5% de isoflurano em 100% de oxigênio e manter através do cone de nariz em 2-3% de isoflurano. Use o vet pomada sobre os olhos para evitar ressecamento enquanto sob anestesia.
    2. Aplicar um estímulo de dedo-pinch para garantir um plano adequado de anestesia. Se nenhuma resposta é observada, dar início ao procedimento.
  4. Coloque o rato anestesiado em prostração dorsal em uma almofada de aquecimento (37 ° C) e esticar os membros usando um sistema de retração do fixador magnético ( Figura 2A).
    Nota: A temperatura do aquecimento pad é importante para a prevenção da hipotermia, desde um rato anestesiado é incapaz de regular sua temperatura de corpo.
  5. Raspar a região abdominal usando um barbeador elétrico. Amostra com gluconato de anti-séptico e clorexidina à base de iodo 0,5%, seguido por etanol a 70%.
  6. Injetar o rato com o carprofeno (5 mg/kg de peso corporal (BW), subcutânea (SQ)) antes de iniciar o procedimento cirúrgico.
  7. Usar um bisturi estéril para cortar a pele. Começar a incisão de 1 cm abaixo do processo xifoide e corte através da linha mediana (~ 5-8 cm) ( Figura 2B).
  8. Use tesoura cirúrgica para fazer uma incisão da aponeurose através da linea alba para acessar a cavidade abdominal ( Figura 2).
  9. Expor a cavidade abdominal utilizando retractores ( Figura 2D).
  10. Desviar os intestinos para o direito do rato para expor a aorta abdominal e o rim esquerdo ( Figura 2E). Palpe a coluna lombar antes de prosseguir para expô-la. Para evitar a desidratação, use gazes estéreis com solução salina estéril para envolver os órgãos internos.
  11. Thermocautery de uso para expor em camadas na face anterior dos corpos vertebrais lombares L4-5 e isolá-los do tecido conjuntivo circundante e os músculos ( Figura 2F -G).
    Nota: Thermocautery deve ser usado para controlar o sangramento durante a dissecção.
  12. Usar um cotonete estéril saturado com solução salina estéril para remover tecido sangue e residual da vértebra L4. Use uma broca de broca trefina estéril (~ 2 mm de diâmetro) para perfurar um defeito de 5 milímetros de profundidade de osso no centro do aspecto anterior do corpo vertebral exposto (Figura 2 H-eu).
    Nota: Aplique pressão mínima para perfurar apenas o córtex ventral e osso trabecular subjacente; Evite perfurar através do córtex dorsal. Note que as vértebras osteoporóticas ratos são muito frágeis. Use um cotonete para limpar o defeito e aplique pressão para parar o sangramento, se presente.
  13. Repita o passo 2.11 na vértebra L5 para criar um total de 2 defeitos por rato ( Figura 2J).
  14. Retorno do intestino para a cavidade abdominal.
  15. Usar uma sutura vicryl sintética absorvível cirúrgica (3-0 vicryl undyed 27 " SH conicidade) em um padrão contínuo de suturar a aponeurose ( Figura 2 K).
  16. Fechar a pele usando uma sutura não absorvível de nylon 4-0 monofilamento em um padrão simples interrompido ( Figura 2 L).
  17. Aplicam-se 100 µ l de adesivo de pele tópica sobre as suturas de pele e entre eles para garantir o encerramento total da pele.
  18. Injetar o rato alimentado a soro morno (37 ° C) ' s solução (1CC/100g BW, SQ) para prevenir a hipotermia e desidratação.
  19. Injetar o rato com buprenorfina (0,5 mg/kg BW, SQ) antes da cirurgia e a cada 8-12 h para alívio da dor pós-operatória, conforme necessário.
  20. Não abandone o animal até que ele recuperou a consciência suficiente para manter a prostração esternal. Além disso, não retornam um animal que foi submetido a cirurgia para a companhia de outros animais até que ele se recuperou totalmente.
  21. Depois que o animal se recuperou na rampa de aquecimento, devolvê-lo à sua jaula.
    Nota: Os ratos da casa individualmente (ou seja, em gaiolas separadas) para evitar a mutilação do rato-de-rato das suturas e ferir.
  22. Coloque chow embebido em água em um prato de Petri no piso da gaiola para alguns dias depois da operação ajudar os ratos a chegar a comida.
  23. Administrar carprofeno (5 mg/kg BW, SQ) 24 h depois da cirurgia para alívio da dor cada 24 h, conforme necessário.
  24. Remover as suturas de pele, enquanto o animal está abaixo dos 2% isoflurano anestesia 10-14 dias pós operação.

3. Digitalização MicroCT

Nota: O momento é de 30-40 min por animal.

  1. No dia seguinte ao procedimento cirúrgico, colocar o rato osteoporótica na câmara de indução, ligada a uma máquina de anestesia, com um sistema central de eliminação. Induzir a anestesia usando 5% de isoflurano em 100% de oxigênio e manter através do cone de nariz em 2-3% de isoflurano.
  2. Digitalização usando um scanner na vivo µCT o rato. Repita a verificação para a análise longitudinal da regeneração óssea.
    Nota: Certifique-se de que todos os animais são digitalizados usando as mesmas configurações (ou seja, energia de raios-x, digitalização, meio, intensidade, tamanho de voxel e resolução da imagem) e em uma similaorientação de r. Por exemplo: energia de raios-x, 55 kVP; corrente, 145 µA; tamanho de VOXEL, 35 µm; incrementos, 115 µm; e o tempo de integração, 200 ms; com as amostras em PBS. Referir-Bouxtein et al. 34 para mais explicações e considerações envolvidas em roedores µCT digitalização para uma avaliação da microestrutura do osso. Idealmente, a mais alta resolução de varredura disponível seria usada para todos os exames; no entanto, exames de alta resolução exigem tempos de aquisição mais, geram grandes conjuntos de dados e expõem os animais a mais radiações ionizantes. Este último pode apresentar efeitos indesejados, incluindo a consolidação da fratura diminuiu. Portanto, a compensação entre dados adicionais e o tempo de verificação deverão ser cuidadosamente considerada.

4. Separação vertebral

Nota: O momento é de 20-30 min por exemplo.

  1. Contorno da vértebra de interesse, como demonstrado na Figura 3A-I. Certifique-se de incluir todas as peças da vértebra excluindo partes que pertencem a vértebras adjacentes.
    1. Clique em " programa de avaliação de µCT " e selecionar a amostra no menu.
    2. Contorno cada fatia usando o mouse.
    3. Uso o " Z " bar para ir para a próxima fatia.
  2. Salve a vértebra contorneada como um arquivo separado ( Figura 3J -K) clicando no " arquivo " → " GOBJ salvar " cada duas fatias.

5. Definição da VOI para avaliação quantitativa Longitudinal

Nota: as etapas a seguir dependem se o exame é de 1 dia após a cirurgia (vértebra de referência) ou do tempo subsequentes pontos ( alvo de vértebras).

  1. Vértebra referência.
    Nota: O momento é de 20-30 min por amostra.
    1. Z-rotação, medir o ângulo das margens usando uma XY-fatia do centro do defeito ( Figura 4A -B).
      1. No Z-plano, vá para a área da vértebra onde o defeito é mais clara e tela captura vértebra.
      2. Em um software de apresentação, preparar um objeto em forma de retângulo que caiba o defeito.
      3. Girar a imagem da vértebra de tal forma que o defeito virada para cima e as margens do defeito são paralelas aos lados do retângulo.
      4. Medir o ângulo de rotação (botão direito do mouse sobre a imagem → " formato imagens " → " tamanho ").
      5. Usar o ângulo medido para girar a vértebra ( Figura 4).
        1. Abrir uma nova janela de DECterm (" Gerenciador de sessão " → " aplicações " → " DECterm ").
        2. Executar " ipl ":
        3. Ipl > turn3d
        4. -entrada [em] >
        5. -saída [out] >
        6. -turnaxis_angles [0.000 90,000 90.000] > 90 90 0
        7. -turnangle [0.000] > ângulo medido
        8. -img_interpol_option [1] >
    2. Para X-rotação, medir o ângulo das margens usando uma YZ-fatia do centro do defeito ( Figura 4 -E). Use o ângulo medido para girar a vértebra ( Figura 4F).
      1. Clique em " YZ " em " programa de avaliação da uCT " e repita etapas 5.1.1.1-5.1.1.5.2.
      2. Ipl > isq
      3. -aim_name [em] >
      4. -isq_filename [default_file_name] > inserir o diretório de arquivo do CEI (por exemplo, " DK0: [MICROCT. DADOS. GAZIT. MAXIM.80.DAY1]Z2102970. CEI ")
      5. -pos [0 0 0] >
      6. -dim [-1-1 -1] >
    3. Flip girada vértebra, alterando o plano XY para o ZX-avião.
      1. Abrir uma nova janela de DECterm (" Gerenciador de sessão " → " aplicações " → " DECterm ").
      2. Executar " ipl ":
      3. Ipl > virar
      4. -entrada [em] > fora
      5. -entrada [saída] > out2
      6. -new_xydir [yz] > zx
    4. Define o VOI.
      1. Desenhar uma circular contorno do defeito usando um pedaço do centro do defeito, selecionando o ícone de contorno circular em " programa de avaliação da uCT " ( figura 6A). Cópia que contorno e colá-lo em todas as fatias do defeito ( Figura 6B).
        Nota: Uma vez que todos os defeitos foram criados usando o mesmo procedimento, analisar o mesmo número de fatias e, posteriormente, o volume total (TV) para todas as amostras.
  2. Vértebra alvo.
    Nota: O momento é de 10-20 min por amostra.
    1. Carga a DICOM arquivos de destino e as vértebras de referência para a janela principal do software de análise de imagem.
      Nota: Para evitar alterações de valor de tons de cinza, definir o mesmo tipo de saída dados como os originais arquivos DICOM no menu carga.
    2. Registrar a referência de vértebra.
      1. Lançamento o " 3D Voxel registo " módulo e entrada da vértebra de referência como o " Base Volume " e a vértebra alvo como o " combinam Volume. " clique " registrar " para registrar as vértebras ( Figura 5).
    3. Salvar o arquivo registrado usando os mesmos dados digite e importação-lo para um ambiente de µCT.
    4. Aplicar o VOI.
      1. Aplicar a VOI definidos para a vértebra de referência para a vértebra alvo registrado clicando " programa de avaliação da uCT " → " arquivo " → " GOBJ de carga " e selecionando o GOBJ criado anteriormente. Verifique o VOI e defeito são concêntricos.

6. Análise de MicroCT

Nota: O momento é de 10-20 min por exemplo.

  1. Enviar o VOI para avaliação utilizando um programa de avaliação de µCT ( Figura 6).
    Nota: Certifique-se de usar os mesmos parâmetros quando analisando todos VOIs. Certifique-se que o limite é definido alto o suficiente para omitir o ruído de fundo com mínima perda de osso. Se for usado um biomaterial radiopaco, um número de estratégias pode ser usado para analisar a formação óssea. Se houver uma diferença de densidade entre o biomaterial e osso tecido, o biomaterial poderia ser segmentado por 35 , 36. Caso contrário, os investigadores qualitativamente poderiam avaliar as diferenças na formação de osso entre grupos experimentais.

7. Eutanásia

  1. lugar o rato osteoporótica na câmara de indução ligado a uma máquina de anestesia. Induzir anestesia usando 5% de isoflurano em oxigênio a 100%.
  2. Manter a anestesia através do cone de nariz e realizar eutanásia por incisão no tórax para produzir um pneumotórax bilateral 37.

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Usando este protocolo, pode-se imagem e quantificar a regeneração de n = 8 modelados osteoporóticos vertebrais defeitos através de pontos de tempo diferentes. O jogo anatômico obtido pelo processo de registo permite a análise do mesmo VOI em todos os pontos de tempo. Isso resulta em uma análise histomorfométrica 3D longitudinal altamente precisos, mesmo quando as margens do defeito original já não são reconhecíveis. Usamos cinco pontos de tempo (dia 1, semana 2, semana 4, semana 8 e seman...

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Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

A osteoporose é a causa mais prevalente de fraturas de compressão vertebral, causada por um aumento da carga sobre a coluna vertebral e que resultam no colapso do corpo vertebral. No entanto, é praticamente impossível gerar uma lesão em um roedor que autenticamente replica um colapso vertebral semelhante. Em vez disso, os pesquisadores criar um cilíndrico vazio no centro do corpo vertebral para imitar OVCFs16,17,18,

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Esta pesquisa foi apoiada por uma concessão do Instituto da Califórnia para medicina regenerativa (CIRM) (TR2-01780).

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

A pesquisa foi apoiada por uma concessão do Instituto da Califórnia para medicina regenerativa (CIRM) (TR2-01780).

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
IsofluranoMWI Saúde Animal, Pasadena, CA501017
BetadineSolutionMWI Saúde Animal, Pasadena, CA4677
Gluconato de clorexidina 2% esfolianteMWI Saúde Animal, Pasadena, CA510083
Álcool isopropílico 70% -quart MWISaúde Animal, Pasadena, CA501044
CarprofenoMWI Saúde Animal, Pasadena, CA26357
Buprenorfina 0,3 mg / mLMWI Saúde Animal, Pasadena, CA56163
Ratos nus atímicos ovariectomizadosHarlan Laboratories, Indianápolis, INHsd: RH-Foxn1 rnu
Alimentos com baixo teor de cálcioNewco Distributors, Inc., CA1814948 (5AV8 AIN-93M com baixo teor de cálcio)
Tamponamento fosfato SalinoLife Technologies Corporation
Dermabond JE J ETHICONDHVM12
Máquina de anestesiaPatterson ScientificTEC 3EX
Câmaras de indução com tampo deslizantePatterson Scientific78917833
ProStation Estação de trabalho aquecidaPatterson Scientific78914731
Campo cirúrgicoHALYARD HEALTH INC89101
Sistema de retração do fixador magnéticoFine Science Tools, Inc., CA18200-50
Tesoura de dissecação, 10 cm, curva, SSWorld Precision Instruments, FL14394
Tesoura de íris, 11,5 cm, 45 ° Ângulo, serrilhado, afiado / afiadoWorld Precision Instruments, FL503225
Forceps, no. 5World Precision Instruments, FL555048FT
Micro Mosquito Hemostatic ForcepsWorld Precision Instruments, FL503360
Gaze de algodão estérilMedtronic, MINNEAPOLIS, MN9024
Lanças de Absorção - Montadas / EstéreisFine Science Ferramentas, CA18105-01
Seringa, 1 mLTERUMO TERUMO MEDSS-01T
Agulha, calibre 25BD MED SYS INJECTION SYS
Capa de fluxo laminarBakerSterilGARD e3-Classe II Tipo A2 Unidade
Cauterização TérmicaWorld Precision Instruments, FL501292
Micro-Broca OmniDrill115/230VWorld Precision Instruments, FL503598
Trefinas para Micro Broca, Ferramentasde Ciência Fina18004-20
3-0 Vicryl não tingido 27" SH coneJ E J ETHICON1663G
4-0 Ethilon preto 18" PC3 corte convencionalJ E J ETHICON1954G
Conebeam in vivo microCT (vivaCT 40)Scanco MedicalvivaCT 40
SCANCO Medical microCT systems suiteScanco MedicalvivaCT 40
Software de análiseBiomedical Imaging, Mayo Clinic, Rochester, MNAnalisar 12Software de análise de imagem
Pomadapara os olhos veterinário
14190250 305127 de de Gabinete de Biossegurança de 2 mm de diâmetro, CA

References

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