Efeitos da exposição de formol para um modelo do rato da dermatite atópica, induzido pela capsaicina Neonatal tratamento

Resumo

Descrevemos aqui métodos para tratamento neonatal capsaicina induzir a dermatite atópica em ratos e exposição de formaldeído vaporizado para investigar os efeitos da inalação do formol na dermatite atópica.

Resumo

Dermatite atópica é cronicamente Policondrite eczema pruriginosa e prevalece em todo o mundo, especialmente nos países desenvolvidos. Interações complexas entre fatores genéticos e ambientais são conhecidas por desempenhar um papel importante na fisiopatologia da dermatite atópica. No entanto, ainda falta um quadro detalhado da patogênese desta doença. Assim, é de importância para desenvolver modelos animais apropriados para elucidar a progressão da dermatite atópica. Além disso, investigar o efeito de fatores ambientais, tais como poluentes atmosféricos na dermatite atópica amplia a compreensão da doença. Aqui, descrevemos um método para indução de dermatite atópica em ratos com tratamento neonatal capsaicina e um protocolo para a exposição de uma constante concentração de formaldeído para ratos para revelar os efeitos sobre o desenvolvimento da dermatite atópica em infantil e adolescente períodos. Estes protocolos foram aplicados com sucesso a vários experimentos e podem ser usados para outras substâncias.

Introdução

Para interrogar os efeitos da inalação de formaldeído (FA) na progressão da dermatite atópica (AD), temos estabelecido um protocolo para indução de AD e desenvolveu uma câmara de circulação convencional para exposição crônica de FA.

AD é uma doença de pele inflamatória crônica atribuída para as interações complexas entre a predisposição genética e gatilhos ambientais^1,2. Um modelo animal adequado é necessário estudar a AD no estado pré-clínicos. Isso é mais importante quando a elucidação da patogenia da AD sob a influência de fatores ambientais. Além disso, para melhor investigar os efeitos dos gatilhos ambientais sobre a progressão de AD, é essencial para separar os fatores ambientais individuais e quantificar o grau de exposição.

Demonstrámos um modelo do rato de romance de AD induzida pelo tratamento neonatal capsaicina. Este modelo de AD³ tem alguns méritos sobre outros modelos de AD, como os modelos AD induzidos pela sensibilização epidérmica, os modelos AD geneticamente modificadas e os modelos de rato espontânea de AD⁴. Em primeiro lugar, este modelo desenvolve sintomas de AD na idade de 3 semanas, que corresponde ao Infante AD e é mais cedo do que outros modelos de rato espontânea de AD, tais como o rato NC/Nga. Em alguns casos, ao contrário dos modelos AD geneticamente modificadas, os sintomas dos modelos AD subside em recaída espontaneamente durante um período de 20 semanas. Além disso, o processo de indução de sintomas de AD no modelo é mais fácil do que o modelo de sensibilização epidérmica, que é mais parecido com a dermatite de contato alérgica, na perspectiva do processo de indução.

Nós introduzimos o romance protocolo para exposição de FA a um modelo animal por meio de uma câmara de vidro acrílico e um regulador de oxigênio médico convencional⁵ para estudar os efeitos da inalação de FA no desenvolvimento da AD em períodos infantis e adolescentes. O regulador nos permitiu expor os animais para uma concentração constante de gás, ajustando as taxas de fluxo e a concentração da solução. Estudos anteriores relataram várias maneiras de exposição de FA de modelos animais. Xu et al descreveram o método de exposição no qual FA solução foi diretamente aplicada a pele⁶. Outro estudo recente dirigida o protocolo de exposição de gás FA usando um gerador de solventes voláteis especializados, modelo 4912⁷. Em comparação com métodos de estudos anteriores, o novo método está equipado mais facilmente e pode ser aplicado para outras soluções além de FA.

Protocolo

todos os métodos descritos aqui foram aprovados pelo cuidado do Animal Internacional e Comité de uso (IACUC) de Coreia Universidade faculdade de medicina. 6 semanas após o nascimento, experimentadores podem induzir enthansasia e recolher vários exemplos como a pele e soro de ratos.

1. indução da AD por tratamento Neonatal de capsaicina

1. para preparar a 5 mg/mL solução de capsaicina, adicionar 50 mg de capsaicina a 1 mL de Tween 80 e 1 mL de etanol 100% em um tubo cônico de 15 mL.
2. Adicionar 8 mL de solução salina ao tubo cónico. Agite o tubo vigorosamente até sem camadas separadas são visíveis
3. injecte a solução de capsaicina (10 µ l/g) no tecido subcutâneo, na linha média e posterior do pescoço de um rato Sprague-Dawley neonatal.
   1. Entregar a capsaicina entre 12 h a 48 h após o nascimento (crítica).
      Nota: Se a injeção é adiada por mais de alguns dias, dermatite não irá desenvolver ou serão mantidas apenas por algumas semanas. Se a injeção é muito cedo, dificuldade respiratória pode ocorrer devido à dor severa.
   2. Para evitar ratos neonatais de parada respiratória devido a injeção de capsaicina, empurrar o peito dos neonatos para estimular a respiração ou manter os recém-nascidos em uma câmara de oxigênio, até que a respiração se torna normal... desde que a dor induzida por capsaicina pode desencorajar a respiração, adicionar anestesia geral possivelmente poderia agravar a dificuldade para respirar. Assim, os experimentadores devem não usar anestésico para aumentar a sobrevida de ratos.

2. Avaliação de prurido e dermatite em um modelo do rato de AD

1. medição do prurido contando espontâneo arranhando comportamento
   1. preparar plástico câmaras (20 x 30 cm x 20 cm) equipado com um espelho, para permitir a cobertura total para visualização e furos para permitir que os ratos respirar.
   2. Conjunto para cima e ajustar a câmera de vídeo digital corretamente para gravar o espelho vistas e vistas frontais dos ratos simultaneamente.
   3. Lugar ratos no plástico de câmara e cobrir o teto da câmara com um objeto pesado para impedir abertura.
   4. Gravar os comportamentos espontâneos de ratos por 1h, reproduza os clipes de vídeo e contar o número de comportamentos de risco.
2. Avaliação da lesão de pele usando um sistema de Pontuação
   1. colocar o rato na câmara de indução.
   2. Ativar o medidor de fluxo de oxigênio de 2 L/min vazão e ajustar o vaporizador de isoflurano para 3% para anestesia.
   3. Identificar a extensão e gravidade da Dermatite das orelhas e outras partes de um rato.
   4. Define o tamanho da unidade para a extensão das lesões de pele como 0,25 cm ² e a gravidade das lesões de pele pela seguinte tabela 1: índice de gravidade; grau de Pontuação de dermatite, multiplicando-se a extensão e gravidade (ver Pontuação de dermatite em < classe forte = "xfig" > figura 1B).

3. Exposição de FA gasoso para animais

1. preparação da câmara de inalação
   1. preparar uma caixa de vidro acrílico (55 cm x 40 cm x 35 cm) que tem duas saídas em lados opostos.
   2. Cuidado. Para circulação do gás FA, coloque a tomada mais elevada do que a entrada e fazer o tamanho da saída do maior que o de entrada de.
   3. Cuidado. Para a medição da concentração de gás interno, do outro lado das saídas, perfurar três pequenas passagens, que podem ser fechadas.
   4. Connect tubos para ambas as saídas. Colocar um tubo de saída para capa de circulação ou fora do prédio para a emissão do gás e conectar o outro tubo de saída de um regulador de oxigênio médico.
   5. Colocar uma gaiola do rato convencional dentro da caixa de vidro acrílico.
   6. Colocar ratos na gaiola de uma semana após o nascimento por 5 semanas (2 h/dia e 5 dias/semana).
   7. Fechar a caixa de vidro acrílico tão firmemente quanto possível para evitar o vazamento de gás.
      Nota: Para a vedação, a tampa da câmara deve conter de borracha. Aplicar a película aderente para embrulhar a câmara para vedação.
2. Geração de FA gasosa usando um regulador de oxigênio médico
   1. dissolver 5 g de FA em 1 L de água.
   2. Colocar a solução de FA de 0,5% na garrafa do umidificador de regulador de oxigênio médico.
   3. Depois de ligar o tubo de entrada para o regulador, gire o regulador e definir a taxa de fluxo de 5 L/min.
   4. Ajustar a concentração da solução e a taxa de fluxo para determinar a concentração do gás na câmara.

Resultados

A inflamação da pele AD-como o modelo de rato AD tratados com capsaicina em 7 semanas de idade é apresentada na figura 1A. Comportamentos arranhando robustos do modelo de ratos tratados com capsaicina AD é mostrado no vídeo 1. Tratamento neonatal capsaicina suscitou dermatite e agravada coçando comportamentos em ratos 3 semanas de idade, e AD-como os sintomas persistiram durante várias semanas (figura 1B,...

Discussão

O protocolo descrito aqui para a indução de sintomas de AD em ratos pode ser adaptado para estudar a fisiopatologia do AD e usado como uma ferramenta de triagem para teste de drogas. O instrumento para a exposição de FA gasoso de ratos tratados com capsaicina pode ser aplicado para avaliar os efeitos da exposição a diversos gases em diversos modelos animais.

O modelo de AD tratados com capsaicina neonatal depende de um procedimento mais simples do que outros modelos atópicas como o DNCB tratam...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Regulador de oxigênio médico	Yuyao Jiahua O fabricante médico		não afetará os resultados
O fabricante do tubo			não afetará os resultados
câmara de acrílico	Taejin Acryl		não afetará os resultados
Taejin Acryl		câmara de plástico	não afetará os resultados
Paraformaldeído, pó	O	do Sigma 158127	não afetará os resultados
O	do filme Wrap Uniwrap		não afetará os resultados
O fabricante da Capsaicina	Sigma	M2028	não afetará os resultados
O			fabricante
de vídeo digital	Sony	HDR-CX380y	não afetará os resultados afetar os resultados
	isoflurano	JW	não afetará os resultados