Enxertia de tumor em um modelo do rato de enxerto heterólogo de linfoma de células do manto humano

Resumo

Linfoma de células do manto (MCL) é um difícil de tratar a doença associada a células B e é igualmente difícil estabelecer um modelo de rato de enxerto heterólogo do MCL primário para estudar e desenvolver a terapêutica. Aqui, descrevemos a criação bem sucedida de xenografts MCL em camundongos para ajudar a compreender a sua biologia subjacente.

Resumo

Linfócitos B são jogadores-chave na circulação de células imunes e eles principalmente para casa e residam em órgãos linfoides. Enquanto as células B normais só proliferam quando estimulados por linfócitos T, oncogênicas células B sobrevivem e expandir-se autonomamente em nichos de órgão indefinido. Linfoma de células do manto (MCL) é uma tal distúrbio de células B, onde a taxa de sobrevida mediana dos pacientes é de 4-5 anos. Isso exige a necessidade de mecanismos eficazes, pelos quais o homing e enxertia dessas células são bloqueados a fim de aumentar a sobrevivência e longevidade dos pacientes. Portanto, o esforço para desenvolver um modelo do rato de enxerto para estudar a eficácia da terapêutica MCL, bloqueando o localizador mecanismo na vivo é de extrema importância. Desenvolvimento de animais destinatários para xenotransplante de células humanas para testar drogas cedo do palco há muito ter sido exercida, como modelos de rato pré-clínicos relevantes são cruciais para novos agentes terapêuticos de tela. Este modelo animal é desenvolvido para evitar a rejeição do enxerto humano e estabelecer um modelo para doenças humanas, e pode ser uma ferramenta extremamente útil para estudar a progressão da doença de tipos diferentes de linfoma e executar testes pré-clínicos de drogas de candidato para malignidades hematológicas, como MCL. Estabelecemos um modelo do rato de enxerto heterólogo que irá servir como um excelente recurso para estudar e desenvolver novas abordagens terapêuticas para MCL.

Introdução

Linfócitos por natureza desempenham um papel importante na vigilância imune, e tráfico de linfócitos é um passo fundamental na montagem do antígeno imunidade específica^1,2. Este processo inclui a migração de ingênuo T linfócitos do timo para o fluxo de sangue e de lá para os órgãos linfoides secundários, incluindo os gânglios linfáticos, de Peyer ou baço, onde se encontram os antígenos cognatos. Os linfócitos B diferenciam na medula óssea e migram como ingênuo células em folículos de órgãos linfoides secundários³. Algumas dessas células B vincular o antígeno com o receptor e são ativada....

Protocolo

As amostras de sangue humano foram utilizadas de acordo com procedimentos aprovados pelo local de ética e comissões de experimentação humana do Hospital da Universidade de Genebra.

Animais procedimentos foram realizados em conformidade com o institucional ética Comissão de cuidado Animal em Genebra, na Suíça e o veterinário cantonais (número de autorização: GE/26/15).

1. preparação de células mononucleares do sangue periférico primário (PBMC) pela separação de gradiente de densidade

Nota: obteve-se 3-5 mL de sangue periférico de pacientes que apresentam com MCL numa fase leucêmicas. O di....

Resultados

O manuscrito descreve um protocolo otimizado para o desenvolvimento bem sucedido de um modelo de mouse de enxerto para enxertia das células MCL. Preparação de uma população celular puro (en este caso MCL células), é muito crítico para desenvolver bem sucedidas xenografts MCL. A Figura 1 representa as etapas preparativa para isolamento de células mononucleares do sangue do paciente MCL pela separação de gradiente de densidade. As células mononucleares são tran.......

Discussão

Ensaios clínicos são possíveis para drogas que estão em um estágio avançado de desenvolvimento, mas não podem ser usadas para a descoberta de medicamentos. Os esforços para desenvolver animais destinatários para xenotransplante de células humanas para testar drogas cedo do palco há muito tem sido exercidos. Aqui nós apresentamos um modelo animal que evita a rejeição do enxerto humano e pode estabelecer um modelo para doenças humanas, tais como MCL. Este é actualmente um modelo de transplante do estado da arte para estuda.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Meios Ficoll-paque	GE Healthcare	17-1440-02	para separação de células mononucleares
Meio RPMI 1640	Tecnologias Gibco-Life	61870-010	para diluição de amostra de sangue
Solução salina tamponada com fosfato (PBS)	Sigma-Aldrich	D8537	lavagem de células
Albumina de soro bovino (BSA)	Sigma-Aldrich	A8412	para preparação de PBS com 1% BSA usado na lavagem de células durante o isolamento
CD19-APC700	Beckman Coulter	B49212	marcador de célula pan-B humana
CD20-APC	Beckman Coulter	A21693	marcador de célula pan-B humana
CD20-ECD	Beckman Coulter	IM3607	marcador de célula pan-B humana
CD5-PC 5.5	Beckman Coulter	PN A70203	marcador
CD23-PE	Pharmingen	555711	Proteína de superfície celular tipicamente ausente no MCL
CD45 KO	Beckman Coulter	B36294	Marcador de pan-leucócitos
CD200-PE	Pharmingen	552475	Proteína de superfície celular tipicamente ausente em
camundongos MCL NOD scid gama (NSG)	Charles River Laboratories	5557	usado para desenvolver xenoenxertos MCL neste estudo
Kit de enriquecimento de células B humanas de fácil separação	Tecnologias de células-tronco	19054	usadas para enriquecer células B para obter células puras para injeção em camundongos
FACS	Beckman Coulter	Navios	usado para caracterizar a amostra MCL e estudar os órgãos para enxerto MCL
1X tampão de potássio cloreto de amônio tampão			lise de sangue vermelho (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1.001 mg/l; EDTA. Na2· 2H2O 3,722 mg/l )

de célula T humana de