Este protocolo descreve inoculações intratraqueal de Fischer 344 ratos com Francisella tularensis. Este procedimento imita pulmonar exposição dos seres humanos a este potencial agente de ameaça biológica e pode ser usado para testar a vacina e a eficácia terapêutica contra tularemia pulmonar.
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Artigo de método
Intratraqueal inoculação de Fischer 344 ratos com Francisella tularensis
Neste artigo
Resumo
Resumo
Infecção pulmonar com a bactéria Francisella tularensis pode levar à doença grave e potencialmente fatal, tularemia, em seres humanos. Devido à atual falta de uma vacina de tularemia aprovado para os seres humanos, pesquisa está focada no desenvolvimento de vacinas utilizando modelos animais apropriados. O rato Fischer 344 tem emergido como um modelo que reflete a susceptibilidade humana à F. tularensis infecção e, portanto, é um modelo atraente para desenvolvimento de vacinas de tularemia. Intratraqueal de inoculação do rato Fischer 344 com F. tularensis imita exposição pulmonar em humanos. A entrega bem sucedida para a traqueia de rato é crítica para entrega pulmonar. Um laringoscópio com iluminação é usado corretamente entubar o tracheae de ratos anestesiados; o correto posicionamento dentro da traqueia é determinado por um dispositivo simples para detectar a respiração. Após a intubação, a cultura de F. tularensis é entregue em uma dose medida via seringa. Esta técnica padroniza entrega pulmonar de F. tularensis dentro da traqueia de rato para avaliar a eficácia da vacina.
Introdução
F. tularensis (Ft) faz com que a doença humana, tularemia. Quando as bactérias são adquiridas através da rota pulmonar, isto leva a tularemia pneumônica, que tem alta taxa de morbidade e mortalidade1. F. tularensis é considerada um agente de ameaça biológica devido ao perigo associado com formas de aerossol e não há atualmente nenhuma vacina aprovada para uso humano nos EUA Um esforço intenso está em andamento desenvolver vacinas e medidas terapêuticas contra tularemia pneumônica, para proteger a população humana contra o uso ilícito desta ameaça biológica bacteriana.
Muita da pesquisa de tularemia ....
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Protocolo
este trabalho foi realizado em estrita conformidade com as recomendações do guia para o cuidado e o uso de animais de laboratório do institutos nacionais da saúde. Animais protocolos envolvendo roedores foram aprovados pela Universidade do Texas em San Antonio institucional Animal Care e Comissão de utilização (IACUC) sob o protocolo MU009(RA).
1. preparar o cateter, indicador de traqueia e inóculo de F. tularensis
- Preparar o cateter (20 x 2 polegadas)
- corta a 20 x 2 na agulha e moer a ponta da agulha para um blunt e suave terminar com um ferramenta rotativa.
Nota: O comprimento da agulh....
- corta a 20 x 2 na agulha e moer a ponta da agulha para um blunt e suave terminar com um ferramenta rotativa.
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Resultados
A resposta humoral a inoculação intratraqueal de F. tularensis em ratos pode ser determinada por ensaio imunoenzimático (ELISA) contra bactérias inactivados UV, conforme descrito anteriormente,11. Total imunoglobulina G (IgG) resposta de Fischer 344 ratos bactérias inactivados celular foi avaliada post-intratraqueal inoculação com uma cepa atenuada de Fn (107 de inóculo CFU) no dia 14 e dia 28 (Figura 1). Simulação-.......
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Discussão
O rato Fischer 344 está se tornando um importante modelo para tularemia vacina desenvolvimento3. Exposição a F. tularensis através da rota pulmonar é fundamental para demonstrar a eficácia contra formas como arma de F. tularensis, porque estas são entregues como aerossóis. Intratraqueal de inoculação do rato facilita a exposição dos pulmões rato a F. tularensis sem a necessidade de aerossol grande, caro e complicado, gerando o equipamento. Todos os experimentos utilizand.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar
Agradecimentos
Este estudo foi suportado pela Agência de defesa ameaça redução (DTRA) sob contrato HDTRA1-14-C-0116 e o centro de excelência em Genômica de infecção (DOD #W911NF-11-1-0136).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Tamanho da lâmina de fibra óptica GreenLine 0 | Carefusion | 5-5231-00 | Macintosh Perfil americano |
| Alça de laringoscópio do sistema GreenLight | Carefusion | 4559GSP | |
| Exel International Safelet I.V. Cateter | EXEL INTERNATIONAL | 26743 | |
| Seringas Estéreis de Ponta Deslizante 1mL | BD | 309659 | |
| Pinça de Polegar de Curativo de Ponta Larga | Thermo Scientific | 76-302 | |
| 200 μ Ponta de barreira L | GeneseeScientific | 24-142 | |
| 1.000 μ Ponta de pipeta em L | Olympus Plastics | 24-173 | |
| Dremel 3000-2/28 Kit de ferramentas rotativas | Dremel | 3000228 | |
| Suporte para intubação de roedores | Braintree Scientific | RIS 200 | |
| Isoflurano | Butler Schein | NDC 11695-6776-2 | |
| Máquina de anestesia para roedores | Surgivet | VTC302 Classic T3 | |
| Câmara de anestesia para roedores | Braintree Scientific | AB 1 |
Referências
- Ellis, J., Oyston, P. C. F., Green, M., Titball, R. Tularemia. Clin Microbiol Rev. 15 (4), 631-646 (2002).
- Lyons, C. R., Wu, T. H. Animal models of Francisella tularensis infection. Ann N Y Acad Sci. 1105, (2007).
- Hutt, J. A., Lovchik, J. A., Dekonenko, A., Hahn, A. C., Wu, T. H.
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Reimpressões e permissões
