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todos os métodos descritos aqui foram aprovados por um Comitê de ética de pesquisa clínica local em Hong Kong.
Nota: para manter a simplicidade, o equipamento listado na Tabela de materiais é usado para ilustrar os procedimentos de imagem da retina e posterior análise. Medição de parâmetros vasculares da retina é ilustrada usando a Singapura I navio avaliação programa (Shiva) 17 (versão 4.0, Nacional Universidade de Singapura, Singapura). No entanto, deve notar-se que um conjunto diferente de equipamentos pode ser adoptado como os princípios subjacentes permanecem similares.
1. preparar os sujeitos para Retinal Imaging
- dilatar os assuntos ’ alunos usando um agente midriático. Aguarde pelo menos 15 minutos para estabelecer a dilatação suficiente.
2. Medir parâmetros vasculares de retina do Fundus fotografias usando um programa de análise assistida por computador
Figura 1: Diagrama esquemático mostrando os procedimentos de medição de parâmetros vasculares da retina. (A) obter fotografias de óptica-disco-centrada do fundo usando uma câmera de fundus. figura 1A e 2A figura são duas fotografias do fundo com ótima qualidade. (B) enviar as fotografias do fundo para o servidor baseado em nuvem e digite as informações relevantes do estudo, incluindo o fator de conversão de imagem (ICF). Outros programas de análise assistida por computador podem usar métodos não baseados em nuvem para organizar e armazenar as imagens. (C) abrir a foto de fundo no programa de análise assistida por computador. Mark (D) a localização do centro do disco óptico e (E) solicitar o software automaticamente detectar a borda do disco óptico e coloque uma grade de medição. (F) construção traçados de navio baseiam os caminhos de navio e colocar o vaso cobre para estimar o diâmetro dos vasos. (G) ajustar os traçados incorreta do navio e embarcação abrange manualmente. (H) medida um espectro de parâmetros vasculares da retina, incluindo calibres de navio, tortuosidade, dimensão fractal e bifurcação. (D) de passo a passo (F) e passo (H) pode ser executado automaticamente por alguns programas de análise assistida por computador. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
- Capturar fotografias de fundo usando uma câmera de fundus.
Programa de
- vez na câmera de fundus e lançamento da captura de imagem no computador. Descanse o queixo do assunto corretamente sobre o chinrest com a testa contra a cinta de cabeça. Mova a alavanca de controle para alinhar o feixe de luz corretamente ao assunto ’ aluno de s.
- Alinhar os pontos de iluminação, até que ambos aparecem menores em ambos os lados no visor. Mova o alvo de fixação externa para guiar o assunto ’ s olhos até o disco óptico está no centro do visor e as regiões de interesse (ROI) são bem dentro dos limites. Ajuste o botão de focalização para focar na retina.
- Com o assunto firmemente, olhar para o alvo de fixação externa e garantir o assunto ’ s olhos não estão cheios de lágrimas.
- Aperte o botão de disparo do obturador para capturar uma imagem ( figura 1A).
- Verificar a qualidade da fotografia do fundo capturada, usando a Figura 2A como um padrão. Descartar a imagem e repita o processo de aquisição de imagem (ou seja, passo 2.1.1 a 2.1.4) se o aluno está mal dilatada ( Figura 2B), o disco óptico não é no centro da imagem ( Figura 2), ou o imagem está fora de foco ( Figura 2D).
- Salvar a imagem em formato TIFF com resolução graduáveis (ou seja, aproximadamente pixels de 3.000 pixels de x 2,000, em mais de 150 dpi).
Nota: O protocolo pode ser pausado aqui.
- Passos repetidos 2.1.1 a 2.1.6 para adquirir fotografias do fundo para outras disciplinas.
- Selecione uma amostra de 10% de imagens aleatoriamente e medir a altura dos discos ópticos nestas imagens ( Figura 3). Calcular o fator de conversão de imagem (ICF) usando a fórmula:
ICF = 1.800 µm / (média altura de pixel de discos ópticos das imagens incluídas na amostra).
- Carregar as fotografias capturadas do fundo para o servidor baseado em nuvem e digite as informações relevantes do estudo, incluindo o fator de conversão de imagem (ICF) ( figura 1B).
Nota: O protocolo pode ser pausado aqui. Outros programas de análise computadorizada podem utilizar outros métodos não baseados em nuvem para organizar as imagens e gravar o ICF.
Figura 2: fotografias de fundo com qualidade óptima e suboptimal. A qualidade da imagem de uma fotografia do fundo deve ser verificada imediatamente após a aquisição de imagens, como a qualidade de imagem afeta diretamente a subsequente medição de parâmetros vasculares da retina. A imagem deve ser descartada se um desses artefatos é observado. Estas imagens foram capturadas usando uma câmera de fundus de 50°. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3: cálculo do factor de conversão de imagem (ICF). Para calcular o ICF, selecione aleatoriamente uma amostra de 10% das imagens do estudo (etapa 1). Em seguida, meça a altura de discos ópticos (em pixels) das imagens incluídas na amostra (etapa 2). Calcular o ICF usando a fórmula: ICF = 1800 µm / (média altura de pixel de discos ópticos das imagens incluídas na amostra), onde 1800 µm é aproximadamente a altura de um disco óptico normal (etapa 3). Como resolução de imagem e efeito de ampliação diferentes de câmera para câmera, é preciso calcular um ICF preciso para cada câmera usada. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
- abre a fotografia do fundo em um programa de análise assistida por computador. Construir traçados de vaso e colocar as tampas de navio para a vasculatura da retina.
Nota: Nesta seção, o programa de Shiva é usado para ilustrar os procedimentos. No entanto, o programa de Shiva pode ser substituído por outros programas de análise assistida por computador disponível. Além disso, passos 2.2.2 para 2.2.3 são executados automaticamente por alguma análise assistida por computador programas quando uma fotografia do fundo é aberto (ou seja, passo 2.2.1).
- Abrir a fotografia do fundo com o programa de análise computadorizada ( Figura 1).
- Marca o local do centro do disco óptico ( Figura 1).
- Clique o “ OD centro ” botão no painel esquerdo função; o cursor do mouse será substituído por um círculo verde.
- Mover o círculo verde para o centro do disco óptico (OD) e clique esquerdo para corrigir o círculo.
- Solicitar o software automaticamente colocar uma grade de medição, construir la e traçados de navioy vaso de cobre ( Figura 1E e 1F).
Nota: Tampas de vaso são linhas de medição que estimam a largura aproximada dos lúmens internas dos vasos.
- Clique o “ encontrar OD ” botão para solicitar o software para detectar a borda do OD e coloque quatro círculos concêntricos como uma grade de medição, com base na posição do centro de OD.
- Clique a “ processo de ” o botão para iniciar o processo de rastreamento automático navio.
- Traçados de navio incorreta de ajustar manualmente. Começar a inspeção de 12 o ’ relógio posição de forma no sentido horário para garantir que todos os traçados de navio são verificados.
- Verifique se o disco óptico é detectado com precisão e a grade de medição está correctamente colocada. Ajuste da grade de medição manualmente seguindo passos 2.2.2 para 2.2.3, se o círculo mais interno com precisão não prevê a borda do disco óptico ( Figura 4A).
- à esquerda, clique para selecionar tracing(s) navio rotulados com o tipo de embarcação incorreto (arteríolas e vênulas) e clicar a “ tipo de embarcação (T) ” botão para alterar o tipo de embarcação.
Nota: Arteríolas são marcadas em vermelho e vênulas são marcadas em azul. Arteríolas podem ser distinguidas vênulas com base em suas diferenças fisiológicas. Por exemplo, vênulas são geralmente de cor mais escura e mais larga que as arteríolas. Navios com o mesmo tipo de embarcação normalmente não se cruzam.
- Traçados de navio incompleta estender as seguintes etapas 2.3.3.1 para 2.3.3.2 ( Figura 4B).
- Use o cursor para clicar na extremidade distal do que o rastreamento de navio incompleta. Clique com o botão esquerdo em pontos ao longo do trajeto de navio para estender o rastreamento de embarcação.
- Parar o processo de rastreamento quando a extremidade distal do navio é atingida. Parar o rastreamento no círculo branco ultraperiférica se a parte distal do vaso cair fora da grade de medição (ver Figura 4B).
- Ajustar traçados do navio se os caminhos do navio não são rastreados corretamente no local do cruzamento ( Figura 4).
- Clique o “ selecione ” botão e, em seguida, clique no ponto incorreto do que o rastreamento de navio. Clique no “ Brea(k) Seg ” botão para desconectar o rastreamento de navio no ponto selecionado. Selecione o segmento desconectado e clique o “ (Del) Seg ” botão para apagá-la
- Re-construir um novo rastreamento de navio usando etapas 2.3.3.1 e 2.3.3.2.
Figura 4: erros comuns do que o autorastreamento. O rastreamento automático de navio não é completamente preciso e ajustes manuais são necessários para assegurar a precisão da medição. Esta figura mostra erros comuns do que o autorastreamento e demonstra resultados óptimos após ajustes manuais. (A), o centro do disco óptico é marcado incorretamente e estes levam a desvio da grade de medição, que pode afetar as medições posteriores. Idealmente, o círculo mais interno da grade de medição deve delinear a borda do disco óptico. Rastreamento de navio incompleta (B) poderia levar à medição incorreta de dimensão fractal, tortuosidade, etc, que o caminho do navio deve ser rastreado até o final do navio. Se a parte distal do vaso cair fora da grade de medição, o rastreamento pode ser interrompido no círculo mais externo branco. (C) vaso traçados dos locais de cruzamento estão sujeitos a uma maior tendência de erro e, portanto, requerem uma atenção especial. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
- colocar tampas de navio em todos os segmentos de navio e desactivar as tampas incorretas manualmente.
- Clique o “ encontrar cobre ” botão pôr capas de navio em todos os segmentos de navio automaticamente.
- Verificar se todas as coberturas do navio estão colocadas correctamente. Botão esquerdo do mouse e arraste o cursor para desactivar o navio cobre se as tampas não são colocadas perpendicular às paredes do vaso ( Figura 5A), o caminho do navio é obscurecido por um outro navio ( Figura 5B), ou o tampas de superestimar ou subestimar a largura do lúmen do vaso ( Figura 5).
Figura 5: navio incorreto cobre. Esta figura mostra exemplos de capas de vaso incorreta que devem ser desativados e excluídos da medição subsequente. Tampas de vaso devem ser desactivadas, se não forem perpendiculares a navios (A). Além disso, as tampas de vaso também devem ser desativadas se o navio sendo rastreado é obscurecido sob outro navio (B), ou as tampas do vaso não podem representar a largura aproximada do navio (C). clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
- medir parâmetros vasculares da retina de traçados o vaso e as tampas de vaso
Nota: etapa 2.5 é realizado automaticamente por um programa de análise assistida por computador.
Diâmetros de - rótulo do disco área 0.5-1.0 longe da margem do disco óptico como zona B, a área de 0.5-2.0 disco diâmetros e longe da margem do disco óptico como zona C 18 ( figura 6A), de acordo com o protocolo modificado de risco de aterosclerose em comunidades (ARIC) estudar 19.
- Calibre vascular da retina de medida da zona B e zona C, usando um método amplamente adotada que é modificado a partir da ARIC estuda 19 , 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25 , 26 ( Figura 6B).
- Medir os comprimentos das tampas de vaso em seis maiores arteríolas e as vênulas maiores seis para estimar calibres de vasos da retina.
- Resumir o retinal arteriolar e venular calibres como artéria da retina central equivalente (CRAE) e retina central veia equivalente (CRVE) respectivamente 17, usando a revista Knudtson – fórmula Parr-Hubbard 18 , 19.
- identificar todos os navios na zona C, com uma largura > 40 µm. calcular a tortuosidade arteriolar e venular da retina de integral da curvatura total ao quadrado ao longo de traçados navio e normalizar o valor com o comprimento de arco total, curvando-se e pontos de inflexão 27 , 28.
- Calcular o total, arteriolar, e venular fractal dimensões da zona C, usando o estabelecido “ método de contagem de caixa ” 29 , 30 , 31.
- Dividir a imagem em uma série de quadrados de igual tamanhos.
- Contar o número de caixas que contém uma seção de traçados navio.
- Repetir o processo usando uma série de quadrados de igual tamanhos com diferentes tamanhos.
- Sinopse o logaritmo do número de caixas contendo os traçados do navio contra o logaritmo do tamanho das caixas e calcular o declive da linha resultante; esta é a dimensão fractal.
- Identificar vasos com primeira bifurcação na zona C e calcular os ângulos (θ) abertura entre a primeira filha de dois navios 32 ( Figura 6). Calcular o valor médio para obter o ângulo de ramificação médio.
- Calcular o coeficiente de ramificação da zona C, usando a fórmula:
(d 1 2 + d 2 2) /d 0 2, onde d 0 é o calibre do tronco médio, e d 1 e d 2 são os calibres de ramificação média ( Figura 6).
- Fechar a janela de classificação. Clique “ enviar ” na caixa de diálogo pop-up para carregar a imagem classificada para o servidor baseado em nuvem e registrar os parâmetros vasculares da retina automaticamente medidos.
Figura 6: quantificação da vasculatura retiniana. (A) zona B (definido como 0.5-1.0 disc diâmetros longe da margem do disco) é usado para medir calibres de navio da zona B, de acordo com o risco de aterosclerose em comunidades de estudo. Zona C (definido como 0.5-2.0 disco diâmetros longe da margem do disco) é usado para medir a embarcação calibres da zona C e um espectro de parâmetros de rede vascular da retina (como tortuosidade, dimensão fractal e bifurcação). (B) as tampas do vaso são linhas de medição utilizadas para estimar os calibres de vasos da retina (ou diâmetros). Tampas de vaso incorreta devem ser manualmente excluídas da medição. (C) para todos os navios que têm a sua primeira bifurcação dentro zona C, o programa automaticamente mede os ângulos de ramificação (θ) da primeira bifurcação. Além disso, o coeficiente de ramificação também é calculado usando a fórmula: coeficiente de ramificação = (d 1 2 + d 2 2) /d 0 2, onde d 0 é o calibre do tronco e d 1 e d 2 são os calibres de ramo. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
3. avaliar a espessura do GC-IPL e RNFL

Figura 7: diagrama esquemático mostrando os procedimentos de medição de espessura RNFL e GC-IPL. Tomografia de coerência óptica (OCT) pode ser usada para medir a espessura da camada plexiforme de gânglio célula-interior (GC-IPL) e camada de fibras de nervo da retina (RNFL). (A, B) Medir as espessuras GC-IPL e RNFL usando o built-in “ macular cubo ” e “ cubo disco óptico ” digitalização protocolos respectivamente. (C, D) Verifica a qualidade da imagem imediatamente após a aquisição da imagem. Descartar a imagem e repita o exame se a força do sinal é menor que 6, ou artefatos de movimento são detectados. (E, F) Em seguida, solicitar o programa de análise de built-in automaticamente analisar o resultado do exame e gerar um relatório para interpretação. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
- Realizar a aquisição de imagens usando a tomografia de coerência óptica (OCT).
- Abrir o programa da OCT e selecione o “ Macular cubo ” digitalização protocolo para iniciar um novo scan macular ( Figura 7A).
- Localizar o aluno na viewport íris ajustando o chinrest. Diminuir a iluminação, se o tamanho da pupila é muito pequeno.
- Clique o “ Auto foco ” botão e depois o “ otimizar ” botão para melhorar a qualidade de imagem.
- Instruir o sujeito a piscar algumas vezes imediatamente antes de iniciar a varredura.
- Clique o “ captura ” botão para iniciar a verificação, quando a borda ao redor do botão torna-se verde. Instruir o assunto para focar o alvo de fixação visual durante a aquisição de imagem para evitar artefatos de movimento.
- Rever a qualidade da digitalização usando 7 figura como um padrão. Descartar o resultado do exame e repita a verificação se a força do sinal é menor que 6 ( Figura 8A) ou artefatos de movimento são detectados (indicado pela descontinuidade dos vasos sanguíneos) ( Figura 8B).
- Salvar o resultado do exame.
- Repita etapas 3.1.1 a 3.1.7 para o outro olho.
- Executar uma verificação de cabeça do nervo óptico com o “ cubo de disco óptica ” varredura seguinte protocolo passos 3.1.2 a 3.1.9 ( figuras 7B e 7D).
Figura 8: sub-ótimo resultados da tomografia de coerência óptica. Resultados abaixo do ideal comuns da tomografia de coerência óptica (OCT) incluem (A) sinal fraco (valor de força < 6) e (B) artefatos de movimento. A qualidade da digitalização deve ser revista imediatamente após a aquisição da imagem, e o exame deve ser repetido se esses artefatos são encontrados. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
- gerar uma impressão de análise da espessura macular GC-IPL.
- Selecione a “ Macular cubo ” digitalizar registros de ambos os olhos na interface de análise.
- Clique a “ análise de UO de células ganglionares ” para iniciar o algoritmo de análise automática para avaliar a espessura de GC-IPL da verificação ( Figura 7E).
Nota: Passo 3.2.2 automaticamente é completado pelo algoritmo de análise.
- Gerar um 14,13 mm 2 centrada na fóvea elíptico anel que tem raios horizontais de interiores e exteriores de 0,6 mm e 2,4 mm, respectivamente e verticais raios internos e externas de 0.5 mm e 2,0 mm, respectivamente.
Nota: O tamanho e forma do annulus elíptico conformam-se estreitamente a anatomia macular e, portanto, correspondem à área onde os RGCs são mais espessos em olhos normais 33 , 34. A área dentro do anel interno do annulus não é medida, como o GC-IPL nesta área é muito fino.
- Segmentar o limite externo do RNFL e o limite externo da camada plexiforme interna (IPL) para localizar o GC-IPL ( Figura 9).
- Medir a média, mínimo e seis setoriais (superior, superotemporal, superonasal, inferonasal, inferior, inferotemporal) espessuras de GC-IPL macular dentro o fóvea-cenanel elíptico tered.
- Comparar as espessuras de GC-IPL medidas para o dispositivo ’ s interno normativo idade correspondente do banco de dados e gerar um mapa de desvio e um mapa de significado
- Relatar os resultados de medição em uma impressão de análise.
- Salvar a impressão de análise no formato. pdf.

Figura 9: camadas da retina, utilizadas para o avaliação da estrutura da retina neuronal. A camada de fibras nervosas da retina (RNFL) é medida usando o algoritmo de nervo ótico (HNO) cabeça, enquanto a camada plexiforme de célula-interior do gânglio é medida usando o algoritmo de análise (GCA) de células ganglionares. O algoritmo de HNO segmentos fronteira interna e externa da RNFL para medir a espessura de RNFL. O algoritmo de GCA detecta o limite externo da camada retinal da fibra do nervo (RNFL) e a camada plexiforme interna (IPL) para produzir a espessura combinada da camada de células ganglionares (GCL) e o IPL. As espessuras de GCL e o IPL são medidas juntos, como a fronteira entre GCL e IPL é anatomicamente indistinta. No entanto, a espessura combinada do GCL e IPL (ou seja, GC-IPL) é ainda indicativa da saúde de RGCs. por favor clique aqui para ver uma versão maior deste Figura.
- gerar a impressão de análise da espessura RNFL ( Figura 7F).
- Selecione a “ cubo de disco óptica ” digitalizar registros de ambos os olhos na interface de análise.
- Clique o “ HNO e análise de UO RNFL ” para iniciar o algoritmo de análise automática para avaliar a espessura RNFL da varredura.
Nota: Etapas 3.3.2.1 para 3.3.2.6 podem ser concluídas automaticamente pelo algoritmo de análise.
- Medir a espessura RNFL em cada ponto de verificação e gerar um mapa de espessura RNFL.
- Identifique o disco óptico, detectando uma mancha escura perto do centro da varredura que tem um tamanho e forma consistente com a escala de uma óptica desc...
- Posicionar uma grade de medição de 3,46 mm de diâmetro ao redor do disco óptico no mapa da espessura RNFL.
- Medida e calcular os globais, quatro-quadrantes (temporais, superiores, nasais e inferiores) e doze horas-relógio parapapillary RNFL espessuras da grade de medição.
- Comparar as espessuras RNFL medidas para o dispositivo ’ s interno normativo idade correspondente do banco de dados e gerar um mapa de desvio e um mapa de significância.
- Relatar os resultados de medição em uma impressão de análise.
- Salvar a impressão de análise no formato. pdf.