Muitas doenças oculares visão em risco estão associadas com microvessels da retina disfuncional. Portanto, a medição das respostas arteríola retinal é importante para investigar os mecanismos fisiopatológicos subjacentes. Este artigo descreve um protocolo detalhado para isolamento de rato arteríola retinal e preparação para avaliar os efeitos de substâncias vasoativas no diâmetro vascular.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Etapas de preparação para medição de reatividade no Mouse arteríolas retina Ex Vivo
Neste artigo
Resumo
Resumo
Insuficiência vascular e alterações na perfusão retiniana normal estão entre os fatores principais para a patogênese de várias doenças oculares visão em risco, tais como retinopatia diabética, retinopatia hipertensiva e, possivelmente, glaucoma. Portanto, preparações microvasculares da retina são ferramentas cruciais para estudos fisiológicos e farmacológicos delinear os mecanismos fisiopatológicos subjacentes e a concepção terapias para as doenças. Apesar da ampla utilização de modelos de rato em pesquisa oftálmica, estudos sobre a reatividade vascular da retina são escassos nesta espécie. Das principais razões para esta discrepância é os desafiante procedimentos de isolamento devido ao tamanho pequeno destes vasos sanguíneos da retina, que é ~ ≤ 30 µm de diâmetro luminal. Para contornar o problema de isolamento direto destes microvessels da retina para estudos funcionais, estabelecemos uma técnica de isolamento e preparação que permite ex vivo estudos de vasoactivity da retina do rato sob condições fisiológicas perto . Embora as preparações experimentais presentes irão se referir especificamente as arteríolas retina do rato, esta metodologia prontamente pode ser empregada para microvessels de ratos.
Introdução
Distúrbios na perfusão da retina têm sido implicados na patogênese de várias doenças oculares, como retinopatia diabética, retinopatia hipertensiva e glaucoma1,2,3. Assim, estudos que visam medir a reatividade vascular na retina são importantes para compreender a fisiopatologia dessas doenças, e desenvolver novo tratamento se aproxima.
Devido à possibilidade de manipulação genética no genoma murino, o mouse tornou-se um modelo animal utilizado para estudos do sistema cardiovascular4. No entanto, por causa do pequeno tamanho ....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
Os procedimentos experimentais deste estudo foram aprovados pelo Animal conta Comissão de Renânia-Palatinado, Alemanha. Cuidados com animais em conformidade com as orientações institucionais e a associação para pesquisa em visão e oftalmologia (ARVO) instrução para o uso de animais em oftalmologia e visão pesquisa. Animais foram tratados de acordo com a directiva da União Europeia 2010/63/UE para experiências em animais. Masculinos camundongos C57BL/6J (The Jackson Laboratory, Porto da barra, ME, EUA), com 3-4 meses de idade foram utilizados para os experimentos. Os animais estavam alojados em condições normais (temperatura de 23 ± 2 ° C, umidade gama 55 ± 10% e 12 h ....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
U-46619 produziu respostas vasoconstritor dependente da concentração em arteríolas da retina de ratos do selvagem-tipo do fundo C57Bl/6J. Em uma concentração de 10-6 M, diminuição do diâmetro luminal foi ≈50% do diâmetro de descanso. Figura 9A mostra uma curva concentração-resposta representativa de uma arteríola retinal. Em arteríolas preconstricted com U46619, cumulativa administração de acetilcolina evocados dependente da concentração aumenta no.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
A medição das respostas vasculares na retina do rato é um desafio devido ao pequeno tamanho de vasos da retina. Com a técnica apresentada, arteríolas retina são visualizadas por microscopia de luz transmitida. Isso é possível, porque a retina isolada é translúcida. A vantagem da técnica é a alta resolução óptica. A resolução espacial calculada é 11 px/µm. No entanto, a resolução real para este sistema óptico que utiliza a luz branca é entre 200 e 300 nm, que é explicado pelo limite de difração de Abbe. Desde o primeiro r.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Os autores têm sem interesses financeiros concorrentes.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado por concessões do und Ernst Berta Grimmke Stiftung e da Deutsche Ophthalmologische Gesellschaft (cão).
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Tesoura de aço | Carl Roth GmbH | 3576.1 | 1x 140 mm |
| Tesoura de olho | Geuder | G-19390 | 1x reta, 10,5 cm |
| Pinça de precisão, reta com pontas finas | Carl Roth GmbH | LH68.1 | 2x tipo 4 |
| Pinça de precisão, reta com pontas extra finas | Carl Roth GmbH | LH53.1 | 2x tipo 5 |
| Tesoura de capsulotomia Vannas | Geuder | 19760 | 1x reta, 77 mm |
| Tesoura de mola Student Vannas | Ferramentas de ciência fina | 91501-09 | 1x curvado, |
| Barraquer porta-agulha | Geuder | G-17500 | 1x curvado, agulha de 120 mm |
| Becton, Dickinson and Company | 305128 | 1x 30 G | |
| capilares de vidro (para produção de micropipetas) | Drummond Scientific Company | 9-000-1211 | 1x (1,2 x 0,8 mm; diâmetro externo/interno) |
| Sutura de nylon | Alcon | 198001 | 1x 10-0 |
| Placa de cultura de células Nunclon | Thermo Fisher Scientific | 153066 | 1x 35 mm de diâmetro |
| Placa de cultura de células Nunclon | Thermo Fisher Scientific | 172931 | 1x 100 mm de diâmetro |
| Discofix C | Braun | 16500C | 10 cm |
| Histoacryl adesivo | B. Braun Surgical, S.A. | 1050052 | |
| Nome | Empresa< | strong>Número de Catálogo | Comentários |
| Equipamento | |||
| Bomba pericíclica (CICLO II) | Carl Roth GmbH | EP76.1 | 1x |
| Extrator de pipeta vertical Modelo 700C | David Kopf Instruments | 1x | |
| Microscópio (Vanox-T AH-2) | Olympus | 1x | |
| Objetiva de imersão em água LUMPlanFL, 1.0 NA | Olympus | 1x | |
| Câmera digital (TK-C1381) | JVC | 1x | |
| Câmara de perfusão | de fabricação | 1x | |
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
| Drugs and Solutions | |||
| Etanol | Carl Roth GmbH | K928.4 | |
| Cloreto de cálcio di-hidratado (CaCl2) | Carl Roth GmbH | 5239.1 | |
| Cloreto de cálcio (KCl) | Carl Roth GmbH | 6781.1 | |
| Dihidrogenofosfato de cálcio (KH2PO4) | Carl Roth GmbH | 3904.2 | |
| Sulfato de magnésio (MgSO4) | Carl Roth GmbH | 261.2 | |
| Cloreto de sódio (NaCl) | Carl Roth GmbH | 9265.2 | |
| Hidrogenocarbonato de sódio (NaHCO3) | Carl Roth GmbH | 0965.3 | |
| α-(D)-(+)- Glicose mono-hidratada | Carl Roth GmbH | 6780.1 | |
| 9,11-dideoxi-9&alfa;,11&alfa;-metanoepoxi prostaglandina F2&alfa; (U-46619) | Cayman Chemical | 16450 | |
| Cloreto de acetilcolina | Sigma-Aldrich | A6625-25G |
Referências
- Toda, N., Nakanishi-Toda, M. Nitric oxide: ocular blood flow, glaucoma, and diabetic retinopathy. Prog Retin Eye Res. 26 (3), 205-238 (2007).
- Schuster, A. K., Fischer, J. E., Vossmerbaeumer, C., Vossmerbaeumer, U. Optical coheren....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
