Descrevemos um não-invasivo multimodal de imagem abordagem baseada na Micro-CT e fluorescência molecular tomografia computadorizada para avaliação longitudinal do rato modelo fibrose pulmonar induzida por instilação intratraqueal duplo da bleomicina.
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Artigo de método
Um Multimodal abordagem de imagem baseado em Micro-CT e fluorescência Molecular tomografia para avaliação Longitudinal de fibrose pulmonar induzida por bleomicina em ratos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Fibrose pulmonar idiopática (IPF) é uma doença pulmonar fatal caracterizada pela destruição progressiva e irreversível da arquitetura do pulmão, que causa deterioração significativa na função pulmonar e subsequente morte por insuficiência respiratória.
A patogênese da IPF em modelos animais experimentais tem sido induzida pela administração de bleomicina. Neste estudo, investigamos um modelo IPF-como rato induzido por uma duplo intratraqueal instilação de bleomicina. Padrão histológicas Avaliações para estudar fibrose pulmonar são procedimentos invasivos de terminais. O objetivo deste trabalho é monitorar a fibrose pulmonar através de técnicas de imagem não invasivas, como tomografia computadorizada Molecular fluorescente (FMT) e Micro-CT. Essas duas tecnologias validadas com as conclusões de histologia poderiam representar uma abordagem revolucionária funcional para monitoramento invasivo em tempo real de progressão e severidade da doença IPF. A fusão das diferentes abordagens representa mais um passo para a compreensão da doença IPF, onde os eventos moleculares que ocorrem em uma condição patológica podem ser observados com a FMT e as subsequentes alterações anatômicas podem ser monitoradas por Micro-CT.
Introdução
Fibrose pulmonar idiopática (IPF) é uma doença pulmonar crônica, com diminuição progressiva das funções pulmonares que infelizmente muitas vezes fatal dentro de quatro anos de diagnóstico1. Os principais recursos do IPF são proliferação de fibroblastos e deposição de matriz extracelular, mas a patogênese não é ainda totalmente compreendida. A hipótese mais apoiada é que vários ciclos de lesões pulmonares causam a destruição das células epiteliais alveolares que leva à alteração da proliferação mesenquimal ciclo celular, exagerado acúmulo de fibroblastos e miofibroblastos, e produção de matriz aumentada. Mediadores envolvidos nestes processos, t....
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Protocolo
Todas as experiências com animais aqui descritas foram aprovadas pelo Comité de bem-estar animal intramural a experimentação animal de Chiesi Farmaceutici e ERASMUS MC sob número de protocolo: EMC 3349 (138-14-07), em conformidade com o Europeu UE Directiva 2010/63, LGS italiano 26/2014 e a revista "Guia para o cuidado e uso de animais de laboratório"23.
Nota: Antes da utilização, camundongos C57Bl/6 (7-8 semanas de idade) puras fêmeas foram aclimatados pelo menos 7 dias para as condições de viveiro local (temperatura: 20-24 ° C; umidade relativa do ar: 40-70%; ciclo claro-escuro de 12-h), tendo acesso gratuito ao co....
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Resultados
Resolução espontânea das lesões fibrose pulmonar observado três semanas após a administração única de bleomicina e moderadas alterações estruturais destacam os limites deste modelo. Tratamento preventivo só pôde ser executado devido a estreita janela terapêutica que não representam a prática clínica17.
Aqui, demonstramos que nosso protocolo de instilação intratraqueal de duplo bleomicina é capaz de desenv.......
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Discussão
Apesar de muitos grupos de pesquisa se concentra no desenvolvimento de novos medicamentos para tratar o IPF, no momento apenas dois estão disponíveis para os pacientes. Há uma necessidade urgente de médica para encontrar mais eficazes terapias7 porque só pulmão transplantationis capaz de prolongar a sobrevivência de 4-5 anos26. O pré-requisito essencial para o desenvolvimento de novas drogas e medicina translacional é a disponibilidade de um modelo animal que imita as carac.......
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Divulgações
Os autores declaram que eles têm não tem interesses concorrente.
Agradecimentos
Os autores gostaria de agradecer a Dr. Daniela Pompilio e Roberta Ciccimarra para ajuda técnica.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Sistema de Tomografia de Fluorescência FMT 2500 | Perkin Elmer Inc. | Construtor | |
| MMPsense 680 | Perkin Elmer Inc. | NEV10126 | Proteger da luz, armazenar a sonda a 4 graus; C |
| TrueQuant software | Perkin Elmer Inc. | ||
| Fêmea endogâmica C57BL/6 | San Pietro NatisoneHorst, Holanda (UD), | Antes do uso, os animais foram aclimatados por pelo menos 5 dias às condições locais do viveiro | |
| Isoflurano | ESTEVE spa | 571329.8 | Não inalar |
| Contador de células automatizado | Dasit XT 1800J | Experimental Builder | |
| Solução salina, 0,9% de cloreto de sódio (NaCl) | Eurospital | 15A2807 | |
| Quantum FX Micro-CT scanner | Perkin Elmer Inc. | ||
| Sulfato de bleomicina de Streptomyces Verticillus | Sigma | B2434 | |
| Processador automático de lenços de papel | ATP700 Histo-Line Laboratories | ATP700 | |
| Sistema de embutimento | EG 1160 Leica Biosystems | EG 1160 | |
| micrótomo rotativo | Slee Cut 6062 | ||
| NanoZoomer S60, software de análise de imagem Hamamatsu Photonics | |||
| NIS-AR | Nikon | ||
| Masson' s Coloração Tricrômica | Histo-Line Laboratories | ||
| 10% formalina tamponada neutra | Sigma | HT5012-1CS | |
| Penn-century modelo DP-4M Insuflador de energia seca | Penn-century | DPM-EXT | |
| PE190 micro tubo médico | 2instrumentos biológicos snc | BB31695-PE/8 | |
| Seringa sem agulha 5 mL | Terumo | SS*05SE1 | Corte as tábuas do pistão com uma tesoura |
| Hamilton 0,10 mL (modelo 1710) | Gastight | 81022 | |
| Discofix 3-way Stopcock | Braun | 4095111 | |
| Seringa com agulha 1 mL | Solução Pic | 3,071,260,300,320 | Use sem agulha |
| Tubos de alimentação de plástico 18 ga x 50 mm | 2instrumentos biológicos snc | FTP-18-50 | Corte obliquamente a ponta |
Referências
- Wynn, T. A. Integrating mechanisms of pulmonary fibrosis. J. Exp. Med. 208 (7), 1339-1350 (2011).
- Wynn, T. A., Ramalingam, T. R. Mechanisms of fibrosis: therapeutic translation for fibrotic disease. Nat. Med. 18 (7), 1028-1040 (2012).
- Moore, B. B.
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Reimpressões e permissões
