Indução e Micro-CT Imaging de malformações cavernosas cerebrais no modelo de Mouse

Jaesung P. Choi; Xi Yang; Matthew Foley; Xian Wang; Xiangjian Zheng

doi:10.3791/56476

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Artigo de método

Indução e Micro-CT Imaging de malformações cavernosas cerebrais no modelo de Mouse

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DOI:

10.3791/56476

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4 de setembro de 2017

Jaesung P. Choi¹^,² , Xi Yang³ , Matthew Foley⁴ , Xian Wang¹ , Xiangjian Zheng¹^,²^,³

¹Lab of Cardiovascular Signaling, Centenary Institute, ²Faculty of Medicine, Sydney Medical School, University of Sydney, ³Department of Pharmacology, School of Basic Medical Sciences, Tianjin Medical University, ⁴Australian Centre for Microscopy & Microanalysis, University of Sydney

Neste artigo

Resumo

Este protocolo demonstra a indução da doença malformação cavernosa cerebral em um modelo do rato e usa contraste aprimorado micro computadorizada para medir carga de lesão. Esse método aumenta o valor dos modelos de rato estabelecida para estudar a base molecular e terapias potenciais para malformação cavernosa cerebral e outras doenças cerebrovasculares.

Resumo

Mutações no CCM1 (aka KRIT1), CCM2, ou CCM3 (aka PDCD10) gene causar malformação cavernosa cerebral (CCM) em seres humanos. Modelos do rato da doença CCM foram estabelecidos pela exclusão de tamoxifeno induzido de Ccm genes em animais pós-natal. Esses modelos de rato fornecem ferramentas de valor inestimáveis para investigar o mecanismo molecular e abordagens terapêuticas para a doença CCM. Um método exato e quantitativo para avaliar a progressão e o fardo da lesão é essencial para aproveitar o valor total desses modelos animais. Aqui, demonstramos a indução da doença do CCM em um modelo do rato e o uso do contraste melhorado método de (micro-CT) radiografia computadorizada micro medida CCM encargo de lesão no cérebro de rato. No dia pós-natal 1 (P1), usamos 4-hydroxytamoxifen (4HT) para ativar a atividade de recombinase Cre do transgene de Cdh5-CreErt2 para decompor o alelo floxed de Ccm2. Lesões do CCM em cérebro de rato foram analisadas em P8. Para o micro-CT, solução de Lugol à base de iodo foi usada para aumentar o contraste no tecido cerebral. Nós temos otimizado os parâmetros de verificação e utilizou uma dimensão de voxel de 9,5 µm, que levam a um tamanho mínimo de recurso de aproximadamente 25 µm. Esta resolução é suficiente para medir o número e volume de lesão CCM globalmente e com precisão e fornecer alta qualidade 3D mapeamento de lesões do CCM em cérebro de rato. Esse método aumenta o valor dos modelos rato estabelecida para estudar as bases moleculares e terapias potenciais para CCM e outras doenças cerebrovasculares.

Introdução

CCM são de paredes finas, dilatado malformações vasculares no cérebro, com prevalência de até 0,5% na população humana¹. CCM pode ser herdada como uma desordem dominante devido a mutações de perda de função em um dos três genes: CCM1 (aka Krit1), CCM2e CCM3 (também chamado PDCD10)²^,³^,⁴ ^,⁵^,⁶. Estes genes estão presentes em um único complexo de sinalização.

Foram desenvolvidos vários modelos para doenças humanas ....