Se movendo para cima: Um simples e flexível em Vitro invasão tridimensional protocolo do ensaio

Tanner J. McArdle; Brenda M. Ogle; Felicite K. Noubissi

doi:10.3791/56568

É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de método

Se movendo para cima: Um simples e flexível em Vitro invasão tridimensional protocolo do ensaio

5.7K visualizações

⸱

DOI:

10.3791/56568

⸱

12 de março de 2018

Tanner J. McArdle¹ , Brenda M. Ogle¹^,²^,³^,⁴^,⁵ , Felicite K. Noubissi⁶

¹Department of Biomedical Engineering, University of Minnesota - Twin Cities, ²Stem Cell Institute, University of Minnesota - Twin Cities, ³Masonic Cancer Center, University of Minnesota - Twin Cities, ⁴Lillehei Heart Institute, University of Minnesota - Twin Cities, ⁵Institute for Engineering in Medicine, University of Minnesota - Twin Cities, ⁶Department of Biology, Jackson State University

Neste artigo

Resumo

Este protocolo descreve um ensaio de invasão vertical invertida que poderia ser usado para quantificar os recursos de migração e invasão de células em uma configuração tridimensional, preservando o microambiente celular. Este ensaio é adequado para células raras e/ou sensíveis.

Resumo

Embora a invasão 3D ensaios têm sido desenvolvidos, persiste o desafio de estudar células sem afetar a integridade do seu microambiente. Ensaios de 3D tradicionais tais como a câmara de Boyden exigem que as células são deslocadas do local cultura original e mudou-se para um novo ambiente. Não só faz isso atrapalhar os processos celulares que são intrínsecos para o microambiente, mas muitas vezes resulta em uma perda de células. Estes problemas são especialmente desafiadoras quando se lida com as células que são raros ou extremamente sensível ao seu microambiente. Aqui, descrevemos o desenvolvimento de um ensaio de invasão 3D que evita as duas preocupações. Neste ensaio, as células são banhadas dentro de um pequeno bem e uma matriz de ECM contendo um quimiotático é colocada no topo das células. Isto requer nenhum deslocamento de célula e permite que as células invadir para cima dentro da matrix. Neste ensaio, invasão da célula, bem como a morfologia da célula pode ser avaliada dentro do gel de colágeno. Usando este teste, podemos caracterizar a capacidade invasiva das células de raras e sensíveis; as células híbridas resultantes da fusão entre células de câncer de mama MCF7 e mesenquimais/multipotentes haste/estroma células (MSCs).

Introdução

Motilidade celular é um processo fisiológico e de desenvolvimento normal das células. No entanto, as mudanças no padrão e a capacidade das células para migrar e invadir estão associadas com condições patológicas, incluindo doenças inflamatórias e câncer metástase¹^,²^,³. Metástase é, sem dúvida, o aspecto mais mal compreendido em câncer. Para metástase, as células cancerosas deve degradar a matriz extracelular (ECM), invadir o tecido local e intravasate. Uma vez em circulação, as células cancerosas vão divulgar o site distante, extravasate e formar tumores secundários. Portanto....