Detecção visual de vários ácidos nucleicos em uma matriz capilar

Jianwei Chen; Ning Shao; Jiaying Hu; Rong Li; Yuanshou Zhu; Dabing Zhang; Shujuan Guo; Junhou Hui; Peng Liu; Litao Yang; Sheng-Ce Tao

doi:10.3791/56597

É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de método

Detecção visual de vários ácidos nucleicos em uma matriz capilar

6.8K visualizações

⸱

DOI:

10.3791/56597

⸱

15 de novembro de 2017

Jianwei Chen^*¹^,²^,³ , Ning Shao^*¹^,²^,³ , Jiaying Hu^*⁴ , Rong Li⁴ , Yuanshou Zhu¹^,²^,³ , Dabing Zhang⁴^,⁵ , Shujuan Guo¹^,²^,³ , Junhou Hui⁶ , Peng Liu⁶ , Litao Yang⁴ , Sheng-Ce Tao¹^,²^,³

¹Key Laboratory of Systems Biomedicine (Ministry of Education), Shanghai Center for Systems Biomedicine, Shanghai Jiao Tong University, ²State Key Laboratory of Oncogenes and Related Genes, ³School of Biomedical Engineering, Shanghai Jiao Tong University, ⁴Collaborative Innovation Center for Biosafety of GMOs, National Center for the Molecular Characterization of Genetically Modified Organisms, School of Life Sciences and Biotechnology, Shanghai Jiao Tong University, ⁵Key Laboratory of Crop Marker-Assisted Breeding of Huaian Municipality, Jiangsu Collaborative Innovation Center of Regional Modern Agriculture and Environmental Protection, ⁶Department of Biomedical Engineering, Collaborative Innovation Center for Diagnosis and Treatment of Infectious Diseases, School of Medicine, Tsinghua University

^* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Este protocolo descreve a fabricação de uma gaveta pequena, ready-to-use que pode ser aplicada para a detecção visual de vários ácidos nucleicos em um teste único, que é fácil de operar. Nesta abordagem, uma matriz capilar foi usado para multiplex e altamente eficiente detecção de alvos de OGM.

Resumo

Vários destinos, curto período de tempo e recurso-acessível metodologias para a detecção de vários ácidos nucleicos em um único, fácil de operar o teste são urgentemente necessários no diagnóstico da doença, monitorização microbiana, deteção de organismo geneticamente modificado (OGM), e análise forense. Descrevemos anteriormente a plataforma chamada calma (Capillary Abaseada em rray Loop-mediada isotérmica amplificação para Multiplex de detecção visual de ácidos nucleicos). Aqui, descrevemos melhorada fabricação e processos de desempenho para essa plataforma. Aqui, nós aplicamos uma gaveta pequena, ready-to-use montada por matriz capilar para multiplex de detecção visual de ácidos nucleicos. A matriz capilar é previamente tratada dentro de um padrão hidrofóbico e hidrofílico antes da fixação mediada por loop de amplificação isotérmica (lâmpada) cartilha de moda em capilares. Após a montagem do adaptador de carregamento, mistura de reação de lâmpada é carregada e isolada em cada capilar, devido a força capilar por uma única etapa de pipetagem. As reações de lâmpada são executadas em paralelo em capilares. Os resultados são lidos visualmente para fora pela iluminação com uma lanterna UV à mão. Usando esta plataforma, demonstramos que o monitoramento de 8 frequentemente aparecendo elementos e genes em amostras de OGM com sensibilidade e alta especificidade. Em resumo, a plataforma descrita neste documento destina-se a facilitar a detecção de vários ácidos nucleicos. Acreditamos que será amplamente aplicável em áreas onde a análise de ácidos nucleicos de alto rendimento é necessária.

Introdução

Sistemas de baixo custo, rápidos e fácil de usar para a detecção simultânea de vários ácidos nucleicos são urgentemente necessárias em uma escala larga dos campos, tais como diagnósticos clínicos¹^,²^,³, OGM deteção⁴^, ⁵^,⁶, microbiana monitoramento⁷^,⁸^,⁹, análise forense de¹⁰^,¹¹e testes especialmente point-of-care (POCTs), onde os recur....