Abordagem do Canal Semicircular posterior para a orelha interna Gene entrega no rato Neonatal

Resumo

Neste estudo, descrevemos a abordagem de canal semicircular posterior como um método confiável para a entrega de gene do ouvido interno em camundongos neonatais. Mostramos que a entrega do gene através do canal semicircular posterior é capaz de perfundir toda orelha interna.

Resumo

Terapia de gene do ouvido interno uma grande promessa como um potencial tratamento para perda de audição e tontura. Um dos determinantes essenciais do sucesso da terapia de gene do ouvido interno é encontrar um método de entrega que resulta em eficiência de transdução consistente dos tipos de célula alvo, minimizando a perda de audição. Neste estudo, descrevemos a abordagem de canal semicircular posterior como um método viável para a entrega de gene do ouvido interno em camundongos neonatais. Mostramos que a entrega do gene através do canal semicircular posterior é capaz de perfundir toda orelha interna. A fácil identificação anatômica do canal semicircular posterior, bem como, manipulação mínima do osso temporal exigido, fazer neste cirúrgico aproximar-se uma opção atraente para entrega de gene do ouvido interno.

Introdução

Terapia de gene do ouvido interno é um campo de rápido desenvolvimento de investigação. Aplicação em vários modelos animais para combate ototoxicidade, trauma de ruído e de perda de audição hereditária¹. Vários estudos recentes têm mostrado recuperação funcional da audição e funções de equilíbrio em camundongos mutantes após ouvido interno gene terapia entrega^{2,3,4,5,6, 7}. um dos principais fatores na determinação do sucesso da terapia do gene de or....

Protocolo

Todos os procedimentos de animais foram aprovados pelo Comitê de uso no Instituto Nacional de surdez e outros distúrbios de comunicação (NIDCD ASP1378-15) e cuidado Animal.

1. preparação e instalação do procedimento

1. Esterilize todos os instrumentos com óxido de etileno no início do experimento. Entre os animais, limpe instrumentos usando a esterilização do grânulo.
2. Carrega a solução contendo terapia genética viral em uma micropipeta no micro-injector. O vector viral utilizado neste estudo foi AAV2/8-whirlin (1 x 10¹³ genoma cópias por mililitro, consulte a tabela de materiais).
   Nota: Normalmente, o volume t....

Resultados

Injeção de AAV8-whirlin de terapia gênica em camundongos whirler neonatal através do canal semicircular posterior resultou em whirlin expressão (verde) em células ciliadas utricular (Figura 2), com a eficiência global de infecção de 53,1% (SD 38,1, n = 28)⁵ . Células de cabelo transduzidas tinha alongado Estereocílio (vermelho) em comparação com células ciliadas de orelhas não injectada contralaterais (5,35 ± 2.11 µm vs 3,20 ± 0,34 µm,.......

Discussão

Várias abordagens cirúrgicas têm sido descritas para acessar roedor ouvido interno. Cochleostomy e janela redonda abordagens são mais comumente usadas para acessar a cóclea, Considerando que o canal semicircular posterior e saco endolinfático abordagens são normalmente usadas para acessar os órgãos vestibulares¹. Em um estudo recente, nós mostramos aquele canal semicircular posterior injeções da terapia do gene viral resultaram em alta eficiência de transdução celular cabelo em ambos os órgãos ves.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Microscópio cirúrgico	Zeiss		OPMI Pico Microscópio otorrinolaringológico. Outros microscópios de dissecção também funcionariam.
Micro-forcepts	Fine Science Tools	11251-10, 11295-51	#5 e #55 Dumont
Micro-tesoura	Fine Science Tools	15002-08
Microinjetor Nanoliter2000	World Precision Instruments
Almofada de aquecimento	Mastex	Modelo 500/600
5-0 suturas de vicryl	Ethicon
AAV8-whirlin	Vector Biolabs
pipeta de vidro	Sutter Instruments	B100-75-10	Vidro de borosilicato