Eletroforese em Gel bidimensional juntamente com métodos de espectrometria de massa para uma análise do proteoma de tecido humano Adenoma de hipófise

Xianquan Zhan; Yuda Huang; Ying Long

doi:10.3791/56739

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Artigo de método

Eletroforese em Gel bidimensional juntamente com métodos de espectrometria de massa para uma análise do proteoma de tecido humano Adenoma de hipófise

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DOI:

10.3791/56739

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2 de abril de 2018

Xianquan Zhan¹^,²^,³^,⁴ , Yuda Huang¹^,²^,³ , Ying Long¹^,²^,³

¹Key Laboratory of Cancer Proteomics of Chinese Ministry of Health, Xiangya Hospital, Central South University, ²Hunan Engineering Laboratory for Structural Biology and Drug Design, Xiangya Hospital, Central South University, ³State Local Joint Engineering Laboratory for Anticancer Drugs, Xiangya Hospital, Central South University, ⁴The State Key Laboratory of Medical Genetics, Central South University

Neste artigo

Resumo

Aqui, apresentamos uma eletroforese em gel bidimensional (2DE) acoplada com espectrometria de massa (MS) para separar e identificar adenoma de hipófise humana tecido proteome, que apresenta um padrão de 2DE bom e reprodutíveis. Muitas proteínas são observadas em cada ponto de 2DE quando analisando proteome complexo de câncer com o uso de MS de alta sensibilidade.

Resumo

Adenoma de hipófise humana (PA) é um tumor comum que ocorre na glândula pituitária humana nos sistemas de eixo hipotálamo-hipófise-alvo do órgão e pode ser classificado como PA clinicamente funcional ou não funcional (FPA e NFPA). NFPA é difícil para o diagnóstico precoce de palco e terapia devido ao mal, elevando hormônios no sangue em comparação com a FPA. O nosso objectivo a longo prazo é usar métodos de proteômica para descobrir biomarcadores confiáveis para o esclarecimento dos mecanismos moleculares de PA e reconhecimento de marcadores eficazes de diagnósticos, prognósticos e alvos terapêuticos. Eletroforese em gel bidimensional eficaz (2DE) juntamente com métodos de espectrometria de massa (MS) foram apresentados aqui para analisar humana proteomes PA, incluindo a preparação de amostras, análise de imagem, em-gel electroforese do gel 2D, visualização de proteína digestão do trypsin, impressão digital em massa de peptídeo (PMF) e em tandem (MS/MS) de espectrometria de massa. 2-dimensional gel de electroforese do laser assistida por matriz dessorção/ionização espectrometria de massa PMF (2DE MALDI MS PMF), 2DE MALDI MS/MS e os procedimentos de MS/MS cromatografia líquido-2DE (LC) foi aplicado com sucesso em uma análise do proteoma NFPA. Com o uso de um espectrômetro de massa de alta sensibilidade, muitas proteínas foram identificadas com o método de 2DE-LC-MS/MS em cada ponto em uma análise do tecido complexo de PA para maximizar a cobertura de proteome humano de PA de gel 2D.

Introdução

PA é um tumor comum que ocorre na glândula pituitária humana nos sistemas eixo hipotálamo-hipófise-alvo do órgão, que desempenham importantes funções no sistema endócrino humano. PA inclui funcionais e clinicamente PAs (FPA e NFPA)¹^,². NFPA é difícil no início fase de diagnóstico e terapia por causa dos níveis de hormônio apenas ligeiramente elevada (por exemplo, LH e FSH) no sangue em comparação com FPA, que aumentou significativamente os níveis de hormônios correspondentes no sangue³^,⁴ ^,⁵. O esclarecimento....