O seguinte protocolo incide sobre o estabelecimento de uma cultura primária de sarcoma de tecidos moles paciente-derivado (STS). Este modelo pode nos ajudar a compreender melhor o fundo molecular e perfil farmacológico destas malignidades raras e poderia representar um ponto de partida para novas pesquisas que visam melhorar a gestão do STS.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Estabelecimento de uma cultura primária de Sarcoma macio do tecido derivado de paciente
Neste artigo
Resumo
Resumo
Sarcomas de partes moles (STS) representam um espectro de malignidades heterogêneos com difícil diagnóstico, classificação e de gestão. Até à data, foram identificados mais de 50 subtipos histológicos destes raros tumores sólidos. Assim, devido à sua extraordinária diversidade e baixa incidência, nossa compreensão da biologia desses tumores é ainda limitado. Paciente-derivado de culturas representam a plataforma ideal para estudar farmacologia e fisiopatologia do STS. Assim, desenvolvemos um modelo humano pré-clínicos de STS a partir de amostras de tumor colhidas de pacientes submetidos à ressecção cirúrgica. Culturas de células do paciente-derivado STS foram obtidas a partir dos espécimes cirúrgicos por digestão de colagenase e isoladas por filtração. As células foram contadas, semeadas e deixou por 14 dias em culturas padrão monocamada e processadas por análise a jusante. Antes de executar análises moleculares ou farmacêuticas, o estabelecimento de culturas primárias de STS foi confirmado através da avaliação das características de cytomorphologic e, quando disponível, marcadores imuno-histoquímicos. Este método representa uma ferramenta útil 1) para estudar a história natural destas malignidades mal exploradas e 2) para testar os efeitos de diferentes drogas em um esforço para aprender mais sobre seus mecanismos de ação.
Introdução
Sarcomas de partes moles (STS) incluem um espectro de lesões heterogêneas de contabilidade de origem mesenquimal para 1% de todos os tumores sólidos1,2, e a nova classificação da Organização Mundial de saúde reconhece a presença de mais de 50 Subtipos diferentes3. Entre estes, os histotypes mais comuns são sarcoma de adipócitos ou Lipossarcoma e Leiomiossarcoma, representando 15% e 11% de todos os adultos STS, respectivamente de4,5. Embora o STS podem desenvolver em diferentes partes do corpo, as extremidades e retroperitoneal s....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
Células de STS são isoladas um tumor extirpado cirurgicamente massa de pacientes com STS. O protocolo foi aprovado pelo Comitê de ética Local e é realizado de acordo com as diretrizes de boas práticas clínicas e a declaração de Helsinque. Todos os pacientes deram consentimento escrito para participar no estudo. Os espécimes cirúrgicos são analisados por um patologista experiente sarcoma e processados dentro de 3 horas de cirurgia.
1. tumor colheita e processamento:
- Colete as amostras de tumor com a ajuda de uma patologista de sarcoma em um recipiente 100 mL de urina estéril com 50 mL de meio DMEM baixa glicose selado com uma pelíc....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
Nós projetamos um método simples para obter o estabelecimento de uma cultura primária de sarcoma macio do tecido derivado de paciente e apresente-se aqui um exemplo dos resultados obtidos em um específico STS histotype13. O protocolo foi utilizado para o estabelecimento de culturas primárias de diferentes histotypes STS, incluindo Lipossarcoma bem diferenciada, condrossarcoma Lipossarcoma Lipossarcoma mixoide, Lipossarcoma pleomórfica, myxofibrosarcoma, indiferenci.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Modelos pré-clínicos bem definidos são necessários para elucidar o fundo molecular de tumores, prever o prognóstico pobre e desenvolver novas estratégias terapêuticas para pacientes com câncer. Isto é especialmente importante para tumores raros como STS cuja alta heterogeneidade em termos de morfologia, comportamento agressivo em potencial e clínico desafia nossa compreensão da biologia do STS e gestão paciente21. Além disso, poucas linhas celulares sarcoma comerciais disponíveis limita pré-clínic.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Os autores têm sem conflitos de interesse a divulgar.
Agradecimentos
Os autores gostaria de agradecer Gráinne Tierney assistência editorial.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Soro bovino | de EuroClone | EuroClone ECS0180D | |
| EuroClone | |||
| Reagente Triazol | Ambion Life-Technologies | 15596018 | |
| Tripsina | EuroClone | ECB3052D |
Referências
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics. CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).
- Linch, M., Miah, A. B., Thway, K., Judson, I. R., Benson, C. Systemic treatment of soft-tissue sarcoma gold standard and novel therapies. Nat Rev Clin Oncol. 11 (4), 187-202 (2014).
- Fletcher, C. D.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
