Este manuscrito descreve um método de induzir o estado de mal epiléptico por injeção de pilocarpina sistêmica e de monitorização espontâneas convulsões recorrentes em animais vivos, usando um sistema de eletroencefalograma e vídeo sem fio telemetria. Este protocolo pode ser utilizado para estudar os mecanismos fisiopatológicas da epilepsia crônica, epileptogenesis e convulsões agudas.
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Artigo de método
O modelo de pilocarpina de epilepsia do lobo Temporal e EEG monitoramento usando sistema de radiotelemetria em ratos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Epilepsia do lobo temporal (TLE) é uma desordem neurológica comum na idade adulta. Para estudos translacionais de epilepsia crônica, induzidas pela pilocarpina estado epiléptico (SE) frequentemente é selecionado para recapitular espontâneas convulsões recorrentes (SRS). Aqui nós apresentamos um protocolo de indução SE por injeção intraperitoneal (i.p.) de pilocarpina e monitoramento de convulsões recorrentes crônicas em animais vivos, usando um sistema de eletroencefalograma (EEG) e vídeo sem fio telemetria. Demonstrámos notáveis mudanças comportamentais que necessitam de atenção após a injeção de pilocarpina e sua correlação com a perda neuronal hippocampal em 7 dias e pós-pilocarpina 6 semanas. Também descrevemos os procedimentos experimentais de implantação de eletrodo para vídeo e gravação de EEG e análise da frequência e duração das convulsões recorrentes crônicas. Finalmente, podemos discutir as possíveis razões por que os resultados esperados não são alcançados em cada caso. Isto fornece uma visão geral básica de epilepsia crônica em ratos e diretrizes para solução de problemas de modelagem. Acreditamos que este protocolo pode servir como uma base para modelos apropriados de epilepsia crônica e epileptogenesis.
Introdução
TLE é um do mais comum adquirida Epilepsias1. Pessoas com epilepsia sofrer ataques recorrentes, como resultado de actividades neuronais anormais no cérebro2,3. Dado que o TLE é muitas vezes intratável, é crucial entender os mecanismos básicos subjacentes ao desenvolvimento de epilepsia.
Modelos animais que podem recapitular as principais características da TLE humana podem oferecer melhor apreciação da fisiopatologia do TLE, permitindo-nos facilmente monitorar e manipular fatores críticos no epileptogenesis. Entre eles, SE induzida por chemoconvulsants tem si....
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Protocolo
Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê de ética da Universidade Católica da Coreia e foram realizados em conformidade com os institutos nacionais de saúde guia para o cuidado e o uso de animais de laboratório (NIH publicações n º 80-23).
1. SE indução
- Compra de camundongos C57BL/6NHsd sexo masculino de 8 semanas de idade e pesar cada rato. Em seguida, use uma caneta para marcar as caudas de todos os mouses para facilitar a sua identificação durante a indução SE.
- Calcular a quantidade de brometo de metilo de escopolamina (escopolamina; 2 mg/kg), Terbutalina hemisulfate (terbutaline; 2 mg/kg) e cl....
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Resultados
SE bem sucedido pode induzir a morte celular hippocampal e SRS (Figura 1 e Figura 2). Nós denunciado comportamentais convulsões agudas por injeção de diazepam a 3 h após início SE e sacrificou os ratos 7 dias ou seis semanas mais tarde.
Para o monitoramento de vídeo-EEG, os ratos que receberam a cirurgia de implante em 4 semanas após SE, e casos SRS foram avaliados por .......
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Discussão
Este trabalho descreve os procedimentos experimentais para a indução SE e a avaliação das convulsões crônicas.
Vários fatores podem afetar a indução SE bem sucedida. Acurada monitoramento comportamental, de acordo com a escala de Racine é fundamental para o desenvolvimento dos SRS. Cabeça balançando, clonus do membro anterior, criação e queda são as características comportamentais de convulsões agudas, desenvolvendo-se em fase SE4,16. .......
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pela concessão nacional pesquisa Fundação da Coreia (NRF) financiado pelo governo coreano (NRF-2014R1A1A3049456) e uma subvenção da Coreia saúde tecnologia R & D projeto através da Coreia saúde indústria desenvolvimento Institute (KHIDI), financiado pelo Ministério da saúde & bem-estar, República da Coreia (HI15C2854).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| C57BL / 6 | Envigo | C57BL / 6NHsd | |
| Nitrato de metila de escopolamina | Sigma | S2250 | Faça 10X estoque |
| Sal de hemissulfato de terbutalina | Sigma | T2528 | Faça 10X estoque |
| Cloridrato de pilocarpina | Sigma | P6503 | |
| Cloridrato de cetamina | Yuhan corporation | ||
| Xylazine cloridrato | Bayer Coréia | ||
| Diazepam | SAMJIN | ||
| Óleo de rícino (Kolliphor EL) | Sigma | C5135 | Polioxil 35 óleo de rícino hidrogenado |
| Saline | Daihan pharm. | ||
| 5% de dextrose | Daihan pharm. | ||
| Solução de iodo (Povidin) | Pomada veterinária Firson | ||
| (Terramicina) | Pfizer | ||
| Blue Nylon | AILEE | NB617 | |
| Mupirocina (Bearoban) | Daewoong Pharmaceutical Co., Ltd | ||
| Ketoprofeno | Samchundang Pharm. Co., Ltd | 5 mg/kg | |
| Gentamicina | Huons, Ltd. | 5 mg/kg | |
| 1 mL seringa | Sung shim medial Co., Ltd. | ||
| 26 agulha de calibre | Sung shim medial Co., Ltd. | 26 G * 13 milímetros (1/2 ") | |
| 30 calibre | Sung shim medial Co., Ltd. | 30 G * 13 milímetros (1/2 ") | |
| lâmina de barbear | Dorco | ||
| broca | precisão Saeshin Co., Ltd. | 207A, 35K (velocidade) | |
| Sistema de telemetria de vídeo/EEG | Data sciences International. Inc. | Versão 5.20-SP6 | |
| Transmissor implantável | Data sciences International. Inc. | Parafuso ETA-F10 | |
| Sungho Steel | M1.4, 2 mm de comprimento em aço inoxidável | ||
| Material dental Vertex | Dentimex | ||
| Acetona | Duksan pure chemicals Co., Ltd. | CAS 67-64-1 | |
| Paraformaldeído (PFA) | millipore | 1.04005.1000 | 4 % |
| Sacarose | Sigma | S9378 | Solução a 30% em 0,01 M PBS |
| Acetato violeta de cresil | Sigma | C5042 | |
| Etanol | EMD Millipore Co. | UN1170 | |
| xileno | Duksan pure chemicals Co., Ltd. | UN1307 | |
| Ácido acético químico glacial | Junsei | 31010-0350 | |
| FSC33 Transparente | Leica biosystems | OCT composto para congelamento de tecidos | |
| DPX Montagem para histologia | Sigma | 6522 | |
| Fórceps | Ferramentas de ciências finas | 11002-12 | |
| Tesoura | Solco biomedical | 02-2445 | |
| Quadro estereotáxico | David Kopf Instruments | E51070012 |
Referências
- Chang, B. S., Lowenstein, D. H. Epilepsy. N Engl J Med. 349 (13), 1257-1266 (2003).
- Scharfman, H. E. The neurobiology of epilepsy. Curr Neurol Neurosci Rep. 7 (4), 348-354 (2007).
- Rakhade, S. N., Jensen, F. E.
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Reimpressões e permissões
