Genes homeobox são genes regulatórios, frequentemente associados com tumores nos organismos adultos. Nós investigamos sua expressão comparativa por imuno-histoquímica e análise PCR em tempo real, na mucosa nasal normal e inflamatória e em neoplasias Nasossinusal para utilizá-los como possíveis alvos de diagnósticos e terapêuticos.
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Artigo de método
Identificação de OTX1 e OTX2 como duas possíveis marcadores moleculares para Carcinomas Nasossinusal e Neuroblastomas olfativas
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Genes homeobox (HB) de OTX são expressos durante a morfogênese embrionária e durante o desenvolvimento do epitélio olfatório em organismos adultos. Mutações ocorrem nestes genes estão muitas vezes relacionadas a tumorigênese em humanos. Não existem dados hoje sobre a possível correlação entre genes OTX e tumores da cavidade nasal. O objetivo deste trabalho é entender se OTX1 e OTX2 podem ser considerado como marcadores moleculares no desenvolvimento de tumores nasais. Nós selecionamos adenocarcinomas nasais e Nasossinusal para investigar a expressão dos genes OTX1 e OTX2 através de imuno-histoquímica e análises PCR em tempo real. Tanto OTX1 como OTX2 estavam ausentes em todas as amostras de Nasossinusal Adenocarcinomas Intestinal-tipo (ITACs). OTX1 mRNA foi identificado apenas em Non-Intestinal tipo Adenocarcinomas (NITACs), enquanto OTX2 mRNA foi expressa somente em Neuroblastomas olfativo (ONs). Nós demonstramos que a expressão diferencial do gene para ambos OTX1 e OTX2 genes pode ser um útil marcador molecular para distinguir os diferentes tipos de tumores Nasossinusal.
Introdução
OTX HB genes são o vertebrados homólogo dos genes orthodenticle da drosófila (otd) e eles codificam para fatores de transcrição que normalmente são expressos durante a morfogénese embrionária, mas eles também podem ser expressos no organismo adulto com diferentes funções . Durante o desenvolvimento embrionário, eles controlam a especificação de identidade celular, diferenciação celular e o posicionamento do axis¹ corpo. A família OTX inclui genes OTX1 e OTX2 , que exibem diferentes funções. OTX1 está envolvida no cérebro e desenvolvimento de órgãos sensoriais. No organismo adulto, que é expresso em órgãos sensoriais e é tra....
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Protocolo
Todos os estudos foram realizados de acordo com a declaração de Helsínquia (1975) com o consentimento informado por escrito e aprovado pelo Comitê de ética da Universidade de Insubria Varese.
1. coleta das amostras
- Coletar e dividir todas as amostras de Formalin-Fixed Paraffin-Embedded (FFPE) humano em diferentes subgrupos de acordo com a classificação do WHO de cabeça e pescoço tumores14.
Nota: Aqui usamos as seguintes amostras: mucosa Nasossinusal Normal como controle (10 amostras); Papiloma invertido (PI, código ICD-O 8121/1); Sinonasal ITAC (ICD-O código 8144 habitantes/3, 32 amostra....
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Resultados
Na mucosa normal observamos reatividade nuclear forte e homogênea para genes OTX no epitélio de tipo respiratório pseudoestratificado ciliado e nas células glandulares submucosas (figura 1A). Encontramos uma expressão nuclear para OTX1 em todas NITACs as amostras (figura 1B), enquanto pouco ou ausente imunorreatividade destacou-se em ITACs (Figura 1). Imunorreatividade intensa esteve presente em todo.......
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Discussão
Este estudo mostra pela primeira vez que, com base nos níveis de RNAm, os genes HB OTX1 e OTX2 são expressas em mucosa Nasossinusal normal e glândulas submucosas, pólipos inflamatórios, Nasossinusal Schneiderian papilomas e em diferentes epiteliais e Neuroectodérmicos Neoplasias, incluindo carcinomas escamosos, tipo não-intestinal Nasossinusal adenocarcinomas, tumores de glândulas salivares-tipo, neoplasias neuroendócrinas e ONs.
Modificações e solução de problemas:
Pa.......
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo Centro Grandi Strumenti Università dell'Insubria, Fondazione Comunitaria del Varesotto, Fondazione del Monte di Lombardia e e Fondazione Anna Villa Felice Rusconi.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| RecoverAll Isolamento Total de Ácidos Nucleicos | Applied Biosystem | AM1975 | |
| 4368814 Applied Biosystem | Universal | ||
| PCR Master Mix, sem AmpErase UNG | Applied Biosystem | 4326614 | |
| ABI Prism 7000 | Biossistema Aplicado | 270001857 | |
| Sonda ACTB | Biossistema | Aplicado Fora de produção. Sequência protegida por direitos autorais | |
| Sonda OTX1 | Applied Biosystem | Fora de produção. Sequência protegida por direitos autorais | |
| Sonda OTX2 | Applied Biosystem | Fora de produção. Sequência protegida por direitos autorais | |
| Peróxido de hidrogênio aquoso | Merk | 1072090250 | |
| Tampão de citrato | Sigma-Aldrich | 20276292 | |
| Triton | Sigma-Aldrich | 101473728 | |
| Tris | Merk | 108382 | |
| NaCl | Merk | 106404 | |
| Goat Anti-OTX2 Antibody | Vector Laboratories | Fora de produção. Número de catálogo não disponível | |
| Rabbit Anti-Goat Antibody | Vector Laboratories | BA5000 | |
| ABC-Peroxidase Complex | Vector Laboratories | PK6100 | |
| 3,3'-diaminobenzidina tetrahidroclorito (DAB) | Sigma-Aldrich | D5905 | |
| Harris Hematoxilina | Bioptica | 0506004/L | |
| Pertek | Kaltek SRL | 1560 | |
| BioClear | Bioptica | W01030799 |
Referências
- Boncinelli, E., Simeone, A., Acampora, D., Gulisano, M. Homeobox genes in the developing central nervous system. Ann genet. 36 (1), 30-37 (1993).
- Omodei, D., et al. Expression of the Brain Transcription Factor....
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Reimpressões e permissões
