Aqui, apresentamos a ligadura parcial biliar como modelo cirúrgico de lesão hepática e regeneração em roedores.
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Artigo de método
Ligadura do colédoco parcial no Mouse: um modelo controlado da colestase obstrutiva localizada
Neste artigo
Resumo
Resumo
Em roedores, ligadura do colédoco completa (cBDL) do ducto biliar comum é uma técnica cirúrgica estabelecida para estudar a proliferação de colestase e ducto biliar obstrutiva. No entanto, as experiências a longo prazo podem levar a aumento da morbidade e mortalidade. Em cepas do mouse selecione com doença hepática subjacente, uma comparação significativa pode ser feita mesmo com ligadura de um único lóbulo do fígado, que pode reduzir as despesas e perdas de animais. Aqui, descrevemos a ligadura parcial de ducto biliar (pBDL) no rato, no qual é ligado somente à esquerda hepático ducto biliar, causando obstrução biliar no lobo esquerdo, mas não os lóbulos remanescentes. Com cuidado técnica microcirúrgica, experimentos de pBDL podem ser rentáveis, desde que o lobo unligated serve como um controle interno para os lóbulos ligados, quando submetidos às mesmas condições no mesmo animal. Ao contrário da cBDL, um grupo de controle de operação separado não é necessário. pBDL é altamente útil diretamente comparar localizada contra efeitos sistêmicos de colestase e outros componentes da bile retida. pBDL também pode ser reaproveitado como um novo método para investigar os mecanismos relacionados a medicamentos e a migração celular.
Introdução
Modelos cirúrgicos da lesão hepática aguda e reparação, tais como hepatectomy parcial ou ligadura do ducto biliar comum (cBDL), têm sido utilizados há décadas em roedores para estudar a regeneração hepática e Patobiológico1,2. Em cBDL, é ligado o ducto biliar comum (que drena todas bile produzida no fígado), resultando em colestase obstrutiva, inflamação e fibrose nas primeiras 2-3 semanas após a cirurgia, com eventual progressão para cirrose3. Proliferação do ducto biliar, transdiferenciação celular e indução de células progenitoras de fígado residente são também características da cBD....
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Protocolo
Todos os procedimentos foram realizados em conformidade com as diretrizes éticas do Comité de uso da Universidade de Pittsburgh e institucional Cuidado Animal.
1. básicas técnicas e procedimentos comuns
- Autoclave todo equipamento microcirúrgico antes do uso.
- Para evitar matar o rato pela anestesia, verificar cuidadosamente seu padrão de respiração.
- Órgãos de toque e intestinos o mínimo possível para evitar danificar os órgãos e causando sangramento. Pressione pontos de sangramento com cotonetes de algodão molhado ou esponjas de gaze.
- Use cotonetes de algodão molhado para manipulação suave dos órgãos. Esponjas de gaze molh....
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Resultados
Para este experimento típico, pBDL foi realizado em ratos transgénicos triplicados PiZ, que recapitular a doença do fígado humana encontrada na deficiência de alfa-1 antitripsina (A1AT). O rato de PiZ overexpresses um transgene consiste em múltiplos fragmentos genomic do DNA que contêm as regiões codificação do gene humano mutante de A1AT e promotor, em conjunto com os intrões e ~ 2 kilobases de upstream e downstream flanqueiam regiões14,
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Discussão
Embora cBDL é a mais comum técnica experimental para colestase obstrutiva, pode apresentar vários desafios em roedores. Dependendo do número de dias pós-operatórios necessários para alcançar um ponto de extremidade, os animais podem experimentar significativa morbidade e mortalidade que o tempo avança. O grau de lesão tecidual e necrose biliar é ainda agravado quando se trabalha com alguns modelos de rato transgénico de doença hepática, que demonstram o parênquima hepática anormal e função na linha de base. Comparado a c.......
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Divulgações
Os autores têm sem divulgações.
Agradecimentos
Dr. Khan reconhece apoio de concessão da K12HD052892 NIH/FORMULADORES, a Alpha-1 Foundation, Fundação Hillman e centro de pesquisa do fígado de Pittsburgh. Dr. Michalopoulos reconhece apoio de concessão do NIH/NIDDK P01DK096990. Agradecemos a assistência técnica excelente e generosa de Anne Orr. Nós também estamos gratos ao Dr. David A. Geller para fornecer acesso ao laboratório de microcirurgia do transplante/roedor.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Microscópio-Leica Wild M650, 6– 40 vezes; ampliação | Leica Microsystems | n/a | |
| Vaporizador de enchimento de funil de isoflurano Tec 3 | Serviços de Anestésico Geral | n/a | |
| Stevens Tenotomia Tesouras | Cirúrgicas Precisas & Scientific Instruments Corporation | ASSI.9193 | |
| Adson Forceps | Ferramentas de ciências finas | 11006-12 | |
| Pinça hemostática delicada clássica Mosquito | Codman | 30-4472 | |
| Micro-retrator | Murdock; Roboz Instrumento Cirúrgico | RS-6550 | |
| Esponjas de gaze não tecida | Fisherband | 870-PC-DBL | |
| Puritan 6" Pequeno Cotonete de Algodão com Cabo de Madeira | Puritan Medical Products Company | 868-WCS | |
| Dumont SS Fórceps - Pontas Padrão/Reto/Inox/13.5cm | Ferramentas de ciência fina | 11203-23 | |
| Dumont SS Fórceps - Pontas Padrão/Angular 45°/Inox/13.5cm | Ferramentas de ciência fina | 11203-25 | |
| Tesoura de mola Vannas - 3mm Cutting Edge | Ferramentas de ciência fina | 15000-00 | |
| Porta-microagulhas | Aesculap Surgical Instruments | FD231R | |
| Micro AROSuture, sutura de nylon estéril 10-0, 70 µ m, pontos TAP | AROSurgical Instruments Corporation | T4A10N07 | |
| 4-0 Vicryl | Ethicon | J662H | |
| Seringa de 5 ml | BD | 309646 | |
| Placa de cultura de tecidos Falcon, 60 & 15 mm | Corning | 353002 | |
| Isoflurano, Farmacopeia dos Estados Unidos (USP) líquido para inalação, 250 ml | Piramal Healthcare | NDC 66794-017-25 | |
| Buprenex injetável (cloridrato de buprenorfina) | Reckitt Benckiser Pharmaceuticals | NDC 12496-0757-1 | |
| Cefazolina para injeção, USP | APP Pharmaceuticals | NDC 63323-238-61 | |
| PVP scrub solution (povidona– iodo 7,5%) | Medline | NDC 12496-0757-1 | |
| 70% Etanol | Decon Labs | 2716 | |
| Solução salina tamponada com fosfato sem cálcio ou magnésio | LONZA | 17-516F | |
| Sirius Red | Sigma | 365548 | |
| Hematolxilina | Fisher (Richard-Allan Scientific) | 22-050-111 (7211) | |
| Eosin | Anatech (Fisher) | 832 (NC9686037) | |
| Formalina | Fisher | SF100-20 |
Referências
- Higgins, G. M., Anderson, R. Experimental pathology of the liver - Restoration of the liver of the white rat following partial surgical removal. Arch Pathol. 12, 186-202 (1931).
- Cameron, G. R., Oakley, C. L. Ligation of the common bile duct. The Journal of Pathology and Bacteriology. 35 (5), 769-798 (1932).
- Kountouras, J., Billing, B. H., Scheuer, P. J.
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Reimpressões e permissões
