Noções básicas sobre esmalte formação e possíveis alterações requer o estudo da atividade do Ameloblasto. Aqui, descrevemos um método confiável e consistente para microdissecar o esmalte órgãos contendo ameloblastos fase de maturação e de secreção que podem ser utilizados para procedimentos experimentais mais quantitativos e qualitativos.
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Artigo de método
Microdissecação do órgão do esmalte do incisivo de ratos expostos a tóxicos ambientais
Neste artigo
Resumo
Resumo
Esmalte defeitos resultantes de condições ambientais e as formas de vida são preocupações de saúde pública por causa de sua alta prevalência. Estes defeitos resultam de actividade alterada das células responsáveis pela síntese de esmalte chamado ameloblastos, que apresentam no órgão do esmalte. Durante a Amelogênese, ameloblastos seguem uma sequência específica e precisa dos acontecimentos de proliferação, diferenciação e morte. Um rato continuamente crescendo incisivos é um modelo experimental adequado para estudar Ameloblasto fases de atividade e diferenciação em condições fisiológicas e patológicas. Aqui, descrevemos um método confiável e consistente para microdissecar o órgão do esmalte de ratos expostos a tóxicos ambientais. O epitélio dental microdissecado conter secreção e maturação-estágio ameloblastos que podem ser utilizados para experiências qualitativas, tais como ensaios de imuno-histoquímica e hibridação in situ , bem como para análises quantitativas como RT-qPCR, RNA-seq e mancha ocidental.
Introdução
Muitos defeitos de esmalte do desenvolvimento podem resultar da exposição a tóxicos ambientais e/ou estilo de vida inadequado1,2,3,4. Caracterização de perturbar eventos e moléculas de Amelogênese usando o procedimento descrito neste momento irá promover o uso de defeitos de esmalte resultante como primeiros marcadores de exposição à várias substâncias tóxicas e pode ajudar a reconstituir a história da saúde de cada paciente durante o período perinatal, quando o esmalte é synthetized1,2
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Protocolo
Todos os animais utilizados neste estudo foram mantidos de acordo com as orientações para o cuidado e o uso de animais de laboratório do Ministério da agricultura (A-75-06-12).
1. animal exposição a substâncias tóxicas
- Antes de realizar este protocolo, obter aprovação institucional necessária e certifique-se de cumprir todas as orientações de cuidados com animais.
- Aplica o design do protocolo de pesquisa que permite a constituição de diferentes grupos experimentais para testar o impacto do molecule(s) investigado na fase de secreção de Ameloblasto e o estágio de maturação do Ameloblasto. Aqui, quatro grupos de ratos Wist....
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Resultados
Muitos esmalte defeitos, tais como fluorose dentária12,13, pode resultar de condições ambientais devido à absorção excessiva de flúor ou esmalte hipomineralização semelhante a MIH devido à exposição a alguns CDE1, 7,22. Esses defeitos no desenvolvimento do esmalte podem ser reproduzidos experimentalmente em ratos (Fi.......
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Discussão
Atividade Ameloblasto alterado e/ou interrompidos Ameloblasto proliferação, diferenciação e liderança de processos de maturação a defeitos de esmalte irreversível e, por sua vez, a caracterização de defeitos de esmalte pode ajudar a desenvolver a compreensão de que a alteração Ameloblasto atividade durante a Amelogênese. Assim, os estudos sobre o órgão do esmalte isoladas são determinantes para elucidar os eventos patológicos levando a esmalte defeitos seja qual for a sua origem, ambiental ou genética.
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Divulgações
Os autores têm sem conflitos de interesse a divulgar.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pela Universidade Paris-Diderot, o Instituto Nacional francês de saúde e pesquisa médica (INSERM) e o Instituto Francês de pesquisa odontológica (IFRO).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Bisfenol A | Sigma Aldrich, Saint Louis MO | 239658 | |
| formalina 10% | Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO | HT5012 | |
| Tri-Reagent | Euromedex, França | TR118 | |
| RLT buffer | Qiagen, Les Ulis, França | 74126 | RNeasy Protect Mini Kit |
| Anticorpo do receptor de andrógeno | Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) | anticorpo policlonal de coelho | sc-816 |
| PBS 10x | EUOMEDEX | ET330. Um | |
| fluoreto de sódio (NaF) | Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO | S-1504 | |
| paraplast regular | Leica microsystems, Nanterre cedex, França | 39601006 | chamado was/parafin no tecido de texto |
| OCT | VWR, Fontenay-sous-Bois, França | 411243 | |
| Tesoura Bonn Extra Fina - Reta/8,5 cm | PHYMEP , Paris, França | 14084-08 | |
| Cabo para Lâminas de Bisturi - 12,5 cm | PHYMEP, Paris, França | 10035-12 | |
| Lâmina de Bisturi Curva | PHYMEP , Paris, França | 10035-20 | |
| Faca de Dissecação - Ponta Fina/Reta | PHYMEP, Paris, França | 10055-12 | |
| Faca de Círculo | PHYMEP, Paris, França | 10059-15 | |
| lâminas de bisturi n° 11 Swann-Morton | VWR, Fontenay-sous-Bois, França | 233-0024 | |
| lente binocular | Leica biosystems, Nanterre cedex, França | MZFLIII |
Referências
- Jedeon, K., et al. Enamel defects reflect perinatal exposure to bisphenol A. Am J Pathol. 183, 108-118 (2013).
- Jedeon, K., et al. Chronic Exposure to Bisphenol a Exacerbates Dental Fluorosis in Growing Rats. J Bone Miner Res. 31, 1955....
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Reimpressões e permissões
Etiquetas
Microdissecação do Órgão do EsmalteIsolamento de Incisivo de RatoSeparação de Estágios de AmeloblastosAmeloblastos em Estágio de SecreçãoAmeloblastos em Estágio de MaturaçãoEnsaios de ImunohistoquímicaProtocolo de Extração de RNAAnálise por Western BlottingExposição ao BPA com FluoretoColoração de Tricrômio de Masson
