É apresentado um método para o omental transplante de ilhotas em um rato. As ilhotas isoladas são misturadas com hidrogel e a mistura é colocada em bolsa omental de um rato diabético. Então, a glicose no sangue é monitorada, e é realizada a análise imuno-histoquímico.
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Artigo de método
Um método de transplante de ilhotas para o omento no Mouse
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Neste artigo
Resumo
Resumo
Transplante de ilhotas tem sido proposto para ser um potencial tratamento para o diabetes tipo 1. Recentes evidências indicam que a infusão intravascular Ilhéu está longe do ideal e, portanto, o omento é re-emergente como um local potencialmente valioso para transplante de ilhotas. Esse experimento requer o isolamento de ilhotas de alta qualidade e a implantação dos ilhéus aos destinatários diabéticos. Transplante para o omento requer etapas cirúrgicas que podem ser melhor demonstradas visualmente. Aqui, as etapas detalhadas para este procedimento são apresentadas. Dois métodos de misturar as ilhotas isoladas com hidrogel antes de colocar a mistura dentro da bolsa omental de ratos diabéticos são descritos aqui. Hidrogel diferentes é utilizados para as diferentes condições. Níveis de glicose de destinatários de rato diabético de ilhotas syngeneic no omento foram monitorados por até 35 dias. Alguns animais foram sacrificados após 14 dias para realizar a análise imuno-histoquímico. Esta abordagem pré-clínico de transplante pode ser usada como dados preliminares que antecederam a tradução para transplante clínico.
Introdução
De acordo com a Federação Internacional de Diabetes (IDF), o diabetes mellitus afeta atualmente 382 milhões de pessoas, com um aumento previsto de 592 milhões de pessoas por 20351. Em ambos os transplante alogênico e xenogénica ilhéu, terapia imunossupressora sistêmica é necessária. Sem imunossupressão, imune a rejeição é das principais causas de perda de enxerto2. Há também um problema significativo de perda de ilhéu transplantado devido o sangue instantânea mediada por reação inflamatória (IBMIR)3,4. No entanto, mesmo na ausência de uma resposta imune, tal como....
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Protocolo
Todos os mouses utilizados neste estudo foram obtidos a partir da centro médico Animal de Guangdong província. A utilização de animais foi aprovada pelo Hospital de ética revisão Comissão de Shenzhen segundo do povo, em conformidade com os princípios de bem-estar animal.
1. ilhéu transplante para o omento
Nota: Este protocolo requer 2 pessoas realizar.
- Monte o material cirúrgico, que está listado na tabela 1. Preparar o campo asséptico na área cirúrgica com materiais estéreis, como cortinas e descartáveis e manter condições assépticas durante cirurgia. Esterilize todos os instrumentos c....
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Resultados
Post-digestive estado do pâncreas é mostrado na figura 1A. Purificada ilhotas são mostradas na figura 1B. Ditizona manchando e teste de viabilidade dos ilhéus são mostrados na Figura 2. As principais etapas da transplante de ilhotas para o omento são mostradas na Figura 3. Os níveis de glicose do sangue dos destinatários após transplante omental são mostrados na
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Discussão
Transplante de ilhotas no fígado através da veia portal é o método mais usado de transplante de ilhotas em seres humanos, mas ainda existem preocupações de segurança e eficiência como a veia porta-trombose e fígado esteatose17. Estudos recentes mostram que o omento pode ser uma alternativa adequada para o fígado, mas mais pesquisa precisa ser realizada antes da tradução clínica12,14,18,
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Divulgações
Os autores relatam que não há conflitos de interesse.
Agradecimentos
Alguns dos autores deste trabalho foram apoiados em parte por concessões do nacional chave R & D programa de China (2017YFC1103704), projeto de Sanming de medicina em Shenzhen (SZSM201412020), fundo para alto nível médico disciplina construção de Shenzhen (2016031638), Shenzhen Fundação de ciência e tecnologia (JCJY20160229204849975, GJHZ20170314171357556, JCYJ20160425110110658), Fundação de Shenzhen, da saúde e da Comissão de planejamento familiar (SZXJ2017021).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Equipamento | |||
| 5 polegadas (12-13 cm) Tesoura | RWD Ciências da Vida | S12030-11 | |
| Pinça Fina | RWD Life Science | F11010-13 | |
| Pequenos clipes para feridas | RWD Life Science | R33003-01 | |
| Acutenáculo | RWD Life Science | F31044-13 | |
| 2 pares de pinças de tecido | RWD Life Science | F13023-10 | |
| 4-0 Sutura com agulha | Chenghe, China | 17094 | |
| 200 μ L Pipeta e pontas | Gilson | PN11 | |
| One Touch ultraeasy Sistema básico de monitoramento de glicose no sangue | Johnson & Lâmina | de | |
| Philips | HC1099/15 | ||
| Material e animais | |||
| Pentobarbital Sódico | Sigmaaldrich.com | P3761 | Para anestesia |
| Hidrogel | bdbiosciences.com | 356234 | Matriz de Membrana Basement |
| Fibrina-Trombina Hidrogel | Baxter.com | 1501250 | Os componentes coagulam quando misturados |
| 70% Etanol | Yingniu medical, Anhui, China | 23170608 | |
| Iodophor | Lierkang medical technology, Shangdong, China | 170521 | |
| Solução salina normal | Baxter.com | 2B1324 | |
| Cefalosporina | Lukang medical, Shangdong, China | 150303 | |
| Cefazolina | Baxter.com | 2G3508 | |
| pomada lubrificante para os olhos | Major Pharmaceuticals | 203964 | |
| estreptozotocina | Sigmaaldrich.com | S0130 | |
| colagenase Tipo V | Sigmaaldrich.com | C9262 | |
| CMRL-1066 | media celltrans, Wenzhou, China | X018D1 | |
| histopaco | Sigmaaldrich.com | 10771 | gradiente de densidade |
| Tubulação PE50 | Braintreesci.com | PE50 100 FT | Polietileno .023" x .038 |
| Calcein AM | Sigmaaldrich.com | C1359 | |
| Iodeto de propídio | Sigmaaldrich.com | P4864 | |
| composto de temperatura de corte ideal (OCT) | Tissue-Tek; Miles, Naperville, IL | 4583 | incorporando |
| meio insulina anticorpo | Tecnologia de Sinalização Celular, Danvers, MA 01923 | 8138S | |
| meio de coloração de hematoxilina | Tecnologia de Sinalização Celular, Danvers, MA 01923 | 14166S | |
| meio de coloração de eosina | Beyotime Biotech, China | C0109 | |
| DAPI | Thermo Fisher Scientific Inc. | D1306 | |
| C57Bl / 6 Camundongos Centro | de Animais Médicos da Província de Guangdong | / | |
| Soro Fetal | Bovino GE Healthcare Life Sciences | SH30084 | |
| Frascos T175 | Falcon | 353112 | |
| 1,5 mL Tubos Snap-top | Axygen | MCT-150-C |
Referências
- Guariguata, L., et al. Global estimates of diabetes prevalence for 2013 and projections for 2035. Diabetes research and clinical practice. 103 (2), 137-149 (2014).
- Bellin, M. D., et al.
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Reimpressões e permissões
