Aqui, apresentamos um protocolo de constrição transversal da aorta (TAC) através de uma toracotomia lateral. Esta técnica é um procedimento cirúrgico minimamente invasivo, fechado no peito, com o objetivo de simular a sobrecarga de pressão e de insuficiência cardíaca em ratos utilizando as configurações padrão de laboratório de TAC.
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Artigo de método
Um modelo de peito fechado para induzir a constrição da aorta transversa em ratos
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Pesquisa sobre a hipertrofia cardíaca e insuficiência cardíaca baseia-se frequentemente a modelos de rato sobrecarga de pressão induzidos pela TAC. O procedimento padrão é a realização de uma toracotomia parcial para visualizar o arco aórtico transverso. No entanto, o trauma cirúrgico causado pela toracotomia em modelos de peito aberto altera a fisiologia respiratória como as costelas são dissecadas e deixou solteira após fechamento do peito. Para evitar isso, estabelecemos uma abordagem minimamente invasiva, fechado no peito através de toracotomia lateral. Aqui nos aproximamos da aorta através do espaço intercostal 2nd sem entrar nas cavidades torácica, deixando o mouse com uma lesão menos traumática para recuperar. Realizamos esta operação usando as configurações padrão de laboratório para procedimentos de peito aberto TAC com as taxas de sobrevivência igual. Além de manter os padrões de respiração fisiológica devido a abordagem de peito fechado, os ratos parecem beneficiar, mostrando recuperação rápida, como a técnica menos invasiva aparece para facilitar um processo de cura rápido e reduzir a resposta imune após trauma.
Introdução
Modelos de mouse são frequentemente usados para imitar doenças humanas1. Constrição da aorta transversa (TAC) é usada para induzir sobrecarga de pressão e hipertrofia de ventrículo esquerdo2. O modelo de TAC de peito aberto em camundongos foi validado por Rockman et al 3 e o procedimento cirúrgico é descrito em detalhes por DeAlmeida et al 4. faixas da aorta transversa é mais favorável em comparação com a constrição da aorta abdominal, porque uma parcela maior da circulação pode compensar os efeitos negativos deste último procedimento2
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Protocolo
Este protocolo foi aprovado pelo Comitê de ética para experimentação de Animal LANUV Recklinghausen (#84-02.04.2016.A374). Geralmente, este procedimento é realizado em ratos adultos > 10 semanas de idade. No entanto, é possível realizar essa cirurgia em animais mais jovens também. Instrumentos cirúrgicos devem ser esterilizados antes do uso, e todas as etapas devem ser executadas sob condições assépticas.
1. indução da anestesia e intubação
- Injete o peso do corpo de buprenorfina 0,1 µ g/g intraperitonealmente para alívio da dor. Repita as injeções intraperitoneal de buprenorfina 0,1 mg/kg cada 8 h para os próximos três dias após a....
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Resultados
Uma bem sucedida TAC garante a indução de sobrecarga de pressão e hipertrofia ventricular esquerda. Uma validação ad hoc de sobrecarga de pressão pode ser alcançada usando a medição de velocidade de fluxo Doppler, como mostrado na Figura 2. Enquanto a velocidade do fluxo de sangue pré-operatório é igual em ambas as artérias carótidas, TAC faz com que uma velocidade aumentada do sangue na artéria carótida direita devido à elevada pressão no ventrículo esquerdo.......
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Discussão
O início rápido da hipertensão devido TAC difere clinicamente relevante hipertrofia causada por estenose aórtica ou hipertensão. No entanto, o uso de modelos animais pequenos para induzir insuficiência cardíaca tem muitas vantagens e é, portanto, escolhido por muitos investigadores11. Este modelo de peito fechado melhora os modelos já existentes da técnica cirúrgica para induzir a constrição da aorta transversa em ratos4.
O passo mais crítico é a.......
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Agradecimentos
Agradecemos Stilla Frede e Susanne Schulz por sua assistência técnica. Este estudo não recebeu nenhum financiamento.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Cateter de pressão-volume | Millar Instruments, EUA | SPR-839 | |
| Ventilador de rato | Harvard Apparatus GmbH, Alemanha | Minivent - TIPO 845 | |
| Ventilador de rato | Harvard Apparatus GmbH, Alemanha | Ligação em Y com cânula de intubação OD 1,2mm 73-2844 | |
| Vaporizador | Drä ger Medical AG&CO. KG, Alemanha | 19.3 Isoflurano-Vaporizador (uma versão mais recente está disponível sob o número de catálogo D-877-2010) | |
| Microscópio | Leica Microsystems, Alemanha | MZ 7.5 | |
| Fonte de luz | Schott AG, Alemanha | KL 1500 LCD | |
| 6-0 Prolene | Ethicon, EUA | Sutura de polipropileno BV-1 9,3 mm 3/8c | para cirurgia |
| Seraflex | Serag Wiessner, Alemanha | USP 5/0 schwarz; IC108000 | sutura para constrição |
| Mesas de operação controladas homeotérmicas | Harvard Apparatus GmbH, Alemanha | Tipo 872/3 HT com tripé e controlador homeotérmico Tipo 874; 73-4233 | |
| Sonda retal flexível | Harvard Apparatus GmbH, Alemanha | 1,6 mm OD; 55-7021 | |
| Instrumento de visualização de sinal Doppler | Indus Instruments, Estação | de trabalho de processamento de sinal Doppler (DSWP) dos EUA com módulo Doppler pulsado de 20 MHz | |
| Pinça Intracapsular Arruga | Altomed, Reino Unido | A5400 | |
| Doppler Probe | Indus Instruments, EUA | Sonda montada em tubo de 20MHz | |
Referências
- Tarnavski, O. Mouse surgical models in cardiovascular research. Methods Mol Biol Clifton NJ. 573, 115-137 (2009).
- Tarnavski, O., McMullen, J. R., Schinke, M., Nie, Q., Kong, S., Izumo, S. Mouse cardiac surg....
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Reimpressões e permissões
