Co transplante de tecido ovariano humano com células endoteliais engenharia: uma combinação de estratégia baseada em célula acelerado perfusão com entrega direta parácrina

Resumo

Para alguns pacientes, a única opção para preservação de fertilidade é a criopreservação de tecido ovariano. Infelizmente, revascularização atrasada prejudica a viabilidade folicular. Aqui, apresentamos um protocolo para co transplante de tecido ovariano humano com células endoteliais para utilização como uma estratégia baseada em célula combinando acelerada perfusão com uma entrega parácrina direto de moléculas bioativas.

Resumo

Infertilidade é um efeito colateral frequente da quimioterapia e/ou radioterapia e para alguns pacientes, criopreservação de oócitos ou embriões não é uma opção. Como alternativa, um número crescente destes pacientes está optando por cryopreserve tecido ovariano para autoenxerto após recuperação e remissão. Apesar das melhorias em termos de resultados entre os pacientes submetidos a autotransplante de tecido ovariano criopreservado, revascularização eficiente do tecido enxertado continua a ser um grande obstáculo. Para atenuar a isquemia e, assim, melhorar os resultados em pacientes submetidos a autotransplante, desenvolvemos uma estratégia baseada em célula vascular para acelerar a perfusão do tecido ovariano. Nós descrevemos um método para co transplante de células endoteliais exógenas (executivos) com tecido ovariano criopreservado em um modelo de enxerto heterólogo do rato. Estendemos essa abordagem para empregar os executivos que têm sido projetados para expressar constitutivamente hormônio Anti-Mulleriano (AMH), permitindo assim sustentada parácrina sinalizando a entrada para enxertos ovarianos. Transplante co com executivos aumentou volume folicular e desenvolvimento folicular antral melhorada e AMH-expressando executivos promovido retenção dos folículos primordiais quiescentes. Essa estratégia combinada pode ser uma ferramenta útil para atenuar a isquemia e modulando a ativação folicular no contexto da preservação da fertilidade e/ou infertilidade em geral.

Introdução

Câncer permanece entre as principais causas de morte no mundo desenvolvido, no entanto, décadas de pesquisa produziram um progresso significativo para a maioria dos tipos de câncer e em alguns casos quase duplicou de sobrevivência taxas¹. Infelizmente, agentes quimioterapêuticos são frequentemente gonadotoxic, esgotando a reserva de folículos primordiais nos ovários e redução da fertilidade². Este crescimento da população pode se beneficiar de vários métodos de preservação da fertilidade, incluindo criopreservação de ovócitos e/ou embrião, no entanto, pacientes que necessitam de iniciação rápida da terapia do câncer e pa....

Protocolo

Todos os procedimentos envolvendo assuntos animais foram aprovados pelo cuidado institucional do Animal e Comissão de utilização (IACUC) no Weill Cornell Medical College. Todos os experimentos xenotransplante usando tecido ovariano foram realizados em conformidade com os regulamentos e orientações pertinentes. Tecido ovariano humano foi coletado de pacientes agendados para quimioterapia ou radioterapia para tratamento de câncer ou transplante de medula de óssea prévia. O Conselho de revisão institucional (IRB) Comitê de Weill Cornell Medical College aprovou a coleção de tecidos para potencial uso autólogo e mediante o consentimento informado do paciente, que realizou-....

Resultados

Para determinar se o transplante co de executivos fornece um benefício ao tecido dos pacientes, descongeladas tiras corticais ovarianos foram divididas em pedaços de tamanhos iguais e incorporadas bilateralmente em imuno-comprometido, NOD scid gama (NSG), ratos. Com um lado incorporado em um coágulo de fibrina sozinho (sem ECs) e os outros executivos contendo (Figura 1a), cada rato serviu como seu próprio controle. Os executivos foram obtidos através do isola.......

Discussão

Aqui podemos demonstrar esse transplante co de executivos fornece um benefício significativo a viabilidade do tecido ovariano e função após enxerto heterólogo em camundongos. Normas para a aplicação clínica da autotransplante de tecido ovariano para preservação da fertilidade não foram conjunto e os parâmetros ideais (tamanho, local de transplante, duração do enxerto, etc.) ^{32 , 33 , 34} para recuperação melhorada da pis.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Leibovitz' s L-15 meio	Gibco	11415064
Antibiótico-Antimicótico	Gibco	15240062	Anti-Anti X100
Sacarose	Sigma	S 1888
Fibrinogênio	Sigma	F 8630	de plasma bovino
Trombina	Sigma	T 1063	de plasma humano
DMSO	Sigma	D 2650
DMEM	Gibco	12491015
Enzyme Cell Detachment Medium	Invitrogen	00-4555-56	Accutase
Filme plástico de parafina	Bemis NA		Parafilm M
Fita de papel cirúrgico 2,5 cm	3M	1530-1	Micropore
Fita de papel cirúrgico 1,25 cm	3M	1530-0	Micropore
Plástico perfurado Fita cirúrgica 1,25 cm	3M	1527-0	Transpore
Monofilamento Sutura Absorvível	Covidien	UM-203	Biosyn
Sutura Absorvível Trançada	Covidien	GL-889	Solução de
Iodopovidona Polissorb USP 10%	Produtos Purdue	67618-153-01	Betadine Solução Swab Stick
Cryoviales	Nunc	377267	CryoTube
ocular estéril lubrificante	Dechra	17033-211-38	Tubo
de microcentrífuga Puralube 1,7 ml	Denville	C-2172	Eppendorf
Sistema de anestesia	VetEquip	V-1 sistema de mesa com limpeza
Células endoteliais	Angiocrine Biosciences, Inc., San Diego, CA, EUA		Isolado, transfectado com E4-ORF-1 e células endoteliais marcadas
Coloração tricrômica	Kit de	Mancha Tricrômica Sigma	HT15-1kt
Isolectina	Invitrogen	I32450	Isolectina GS-IB4 De Griffonia simplicifolia, Alexa Conjugado Fluor™ 647

(Masson)