Protocolo para criar feridas crônicas em camundongos diabéticos

Resumo

As feridas crônicas são desenvolvidas a partir de feridas agudas em um modelo de mouse diabético induzindo altos níveis de estresse oxidativo após uma ferida cutânea de espessura total. A ferida é tratada com inibidores para catalase e glutationa peroxidase, resultando em comprometimento da cicatrização e desenvolvimento de biofilme por bactérias presentes no microbioma cutâneo.

Resumo

As feridas crônicas se desenvolvem como resultado da regulação defeituosa em um ou mais complexos processos celulares e moleculares envolvidos na cicatrização adequada. Eles impactam ~ 6,5 M pessoas e custo ~ $40B/ano nos EUA sozinho. Embora um esforço significativo tenha sido investido na compreensão de como as feridas crônicas se desenvolvem em humanos, questões fundamentais permanecem sem resposta. Recentemente, nós desenvolvemos um modelo novo do rato para as feridas crônicas do diabético que têm muitas características de feridas crônicas humanas. Usando DB/DB^-/- camundongos, podemos gerar feridas crônicas induzindo altos níveis de estresse oxidativo (os) no tecido da ferida imediatamente após o ferimento, usando um tratamento único com inibidores específicos das enzimas antioxidantes catalase e glutationa peroxidase. Estas feridas têm níveis elevados de OS, desenvolvem o biofilme naturalmente, tornam-se inteiramente crônicos dentro de 20 dias após o tratamento e podem permanecer abertos mais por mais de 60 dias. Este novo modelo tem muitas características de feridas crônicas diabéticas em humanos e, portanto, pode contribuir significativamente para o avanço da compreensão fundamental de como as feridas se tornam crônicas. Este é um avanço importante porque as feridas crônicas nos seres humanos causam a dor e a aflição significativas aos pacientes e conduzem à amputação se não resolvidas. Além disso, essas feridas são muito caras e demoradas para tratar, e levam a perda significativa de renda pessoal para os pacientes. Avanços neste campo de estudo através do uso de nosso modelo de ferida crônica pode melhorar significativamente os cuidados de saúde para milhões que sofrem esta condição debilitante. Neste protocolo, nós descrevemos em grande detalhe o procedimento para causar as feridas agudas para tornar-se crônico, que não foi feito antes.

Introdução

A cicatrização de feridas envolve processos celulares e moleculares complexos que são regulados temporalmente e espacialmente, organizados em estágios seqüenciais e sobrepostos que envolvem muitos tipos de células diferentes, incluindo mas não limitados à resposta imune e à do sistema¹. Imediatamente após a pele sustém uma lesão, fatores e células sanguíneas agregado ao local da ferida e iniciar a cascata de coagulação para formar um coágulo. Depois que a homeostase é conseguida, os vasos sanguíneos dilatam-se para deixar no local da ferida o oxigênio, os nutrientes, as enzimas, os anticorpos e os Fatores Quimiotáticos que quimioatraem polymorp....

Protocolo

Todos os experimentos foram concluídos de acordo e conformidade com os regulamentos federais e da Universidade da Califórnia política e procedimentos foram aprovados pela Universidade da Califórnia, Riverside IACUC.

1. o animal

1. Use diabéticos e obesos B6. BKS (D)-Lepr^DB/j camundongos para o modelo de ferida crônica. As opções de compra incluem heterozigotos para reprodução ou homozigotos diretamente para experimentos.
2. Raça heterozygote machos e fêmeas para produzir descendentes. Apenas um quarto da maca, estatisticamente, crescerá para se tornar diabético e obeso (DB/DB^-/-).
....

Resultados

A Figura 5 mostra um exemplo de uma ferida sem tratamento de nervos inibidores que progridem para o fechamento da ferida e uma ferida com o tratamento de nervos inibidores que progridem para a cronicidade. A limpeza transparente foi deixada no lugar na ferida crônica de modo que o biofilme e a acumulação fluida possam ser vistos.

A iniciação crônica da ferida ocorre em menos de 6 horas e a margem da.......

Discussão

Uma vez que as feridas crônicas são criadas nos camundongos, o modelo pode ser usado para estudar os processos de cicatrização de feridas envolvidas no início da cronicidade. O modelo também pode ser usado para testar a eficácia de uma ampla gama de produtos químicos e drogas que podem reverter o desenvolvimento de feridas crônicas e cicatrização prejudicada e levar ao fechamento da ferida e cicatrização. Os pontos de tempo diferentes após o início da cronicidade podem ser estudados: por exemplo, dias 1-5 após o.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
B6. BKS(D)-Leprdb/J	O Laboratório Jackson	00697	Homozigotos e heterozigotos disponíveis
Loção Removedora de Pêlos Nair com Aloe Calmante e Lanolina	Nair		um depilatório químico
Buprenex (buprenorfina HCl)	Henry Stein Animal Health	059122	0,3 mg/ml, Classe 3
3-Amino-1,2,4-triazol (ATZ)	TCI	A0432
Ácido merpantossuccínico (MSA)	Aldrich	88460
Solução tampão fosfato (PBS)			autoclave esterilizada
Isoflurano	Henry Schein Animal Health	029405	NDC 11695-6776-2
O tanque de oxigênio			deve ser compatível com o sistema de vaporização
Vaporizador de isoflurano	JA Baulch & Associados
Máquina de cortar cabelo Wahl			Lithium Ion Pro
Acu Punch 7mm punções de biópsia de pele	Acuderm Inc.	P750
Tegaderm	3M	Ref: 1624W	Curativo de filme transparente (6 cm x 7 cm)
Almofada de aquecimento	Conair		Almofada de aquecimento seco úmido
Seringas de insulina	BD	329461	0,35 mm (28G) x 12,7 mm (1/2")
70% etanol
Kimwipes
Pinças
Tesoura	cirúrgica afiada
Espátula
Tubulação Nariz
de rato cone
Luvas
pequenos recipientes

de metal fino de plástico