Modelo murino aspiração orofaríngea da Pneumonia bacteriana associada e hospitalares

Resumo

Pneumonia infecciosa é entre as infecções mais comuns em humanos. Um modelo apropriado na vivo é fundamental para compreender a patogênese da doença e testar a eficácia da terapêutica de romance. Com este modelo de pneumonia de aspiração orofaríngea murino, um pode examinar a patogênese e novos tratamentos contra essas infecções mortais.

Resumo

Modelos de infecção murino são essenciais para compreender a patogênese da doença e testar a eficácia da terapêutica novela projetada para combater agentes patogénicos causadores. Pneumonia infecciosa está entre as infecções mais comuns apresentadas pelos pacientes na clínica e, portanto, garante um modelo apropriado na vivo . Pneumonia típica modelos usam inoculação intranasal, que deposita excessivos organismos fora do pulmão, causando complicações fora do alvo e sintomas, tais como sinusite, gastrite, enterite, trauma físico ou micropartículas de nebulização para imitar o aerossol Espalhe mais típico de pneumonia viral, fúngica ou tuberculosa. Estes modelos não refletem com precisão a patogênese da pneumonia bacteriana típica ou cuidados de saúde-adquirida na Comunidade. Em contraste, este modelo murino de pneumonia por aspiração orofaríngea imita a rota da gota em pneumonia adquirida na saúde. Suspensão em orofaringe de ratos anestesiados inocular 50 µ l das bactérias faz com que aspiração reflexiva, o que resulta em uma pneumonia. Com este modelo, pode-se examinar a patogênese de patógenos causadores de pneumonia e novos tratamentos para combater estas doenças.

Introdução

Infecção respiratória inferior é a mais mortal das doenças transmissíveis do mundo e a causa mais comum de morte nos países em desenvolvimento¹. Globalmente, estas infecções são responsáveis por mais de 3,2 milhões de mortes¹. Além disso, uma pneumonia nosocomial está entre as formas mais comuns e mortais de infecções adquiridas de saúde e é causada por patógenos mais resistentes aos antibióticos,^2,3. A rota típica de aquisição da pneumonia bacteriana para ambos adquirida na Comunidade e pneumonia nosocomial é a aspiração do conteúdo da orofaringe em alvéolos. Mu....

Protocolo

Todos os procedimentos que envolvam animais devem ser aprovados do pesquisador institucional Cuidado Animal e Comissão de utilização (IACUC).

1. preparação do inóculo bacteriano

1. Isole colônias bacterianas.
   1. Raia uma estirpe bacteriana (por exemplo, a. baumannii "HUMC1") em ágar-ágar estéril apropriado (por exemplo, ágar Tryptic soy), tendo o cuidado de gerar colónias isoladas.
   2. Incube a condições apropriadas (por exemplo, durante a noite a 37 ° C).
2. Cresce a cultura durante a noite.
   1. Selecione um representante, colônia isolada da placa de ágar com um....

Resultados

Cuidadosamente, seguindo o protocolo, reproduzíveis e robustos de dados podem ser facilmente obtidos. É fundamental para aderir do inóculo personalizado preparação protocolo para experiências ser comparado com um outro. Também é importante tratar adequadamente os ratos durante o processo de infecção. Não se esqueça de colocar os ratos em uma câmara de anestesia desprovido de isoflurano. Os ratos entrará em pânico se eles são colocados em uma câmara que tenha sido previamente preenchida co.......

Discussão

Para ter certeza, os ratos não são seres humanos em miniatura. Resultados obtidos em modelos do rato devem ser considerados no contexto e posteriormente interpretados para aplicabilidade aos seres humanos, com base em diferenças e semelhanças entre as duas espécies de⁶. Também é importante escolher a tensão apropriada do mouse como certos estão mais suscetíveis a algumas infecções do que outros; o mesmo se aplica para a cepa de patógeno de escolha¹⁶.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Ágar	BD	214530	Combine com TSB para fazer
grânulos TSA, vidro de borosilicato	Kimble	135003	Esterilize por cozimento ou autoclavagem antes de cada uso
Copo, 250 mL	Pyrex	1003	Usado durante a alíquota precisa de inóculos bacterianos concentrados
Centrífuga	Sorvall	ST 40R	Capaz de 4.000&vezes; g em 4° Câmara C
para Anestesia	Kent Scientific Corporation	VetFlo-0720	Acomoda até 5 camundongos
Criomolde, Tamanho Intermediário	Sakura Tissue-Tek	4566	Moldes de amostra de vinil descartáveis, 15&vezes; 15 vezes; Fio
Dental	Oral-B	37000469537	Amarre ao poste estável aprox. 6" acima da altura da mesa
Fórceps	VWR	82027-440	Usado para puxar suavemente a língua para fora da boca do rato
Homogeneizador para Tecido Pulmonar	Omni International	TM125-115	Autoclave antes do primeiro uso; enxágue entre as amostras
Isoflurano para Anestesia	Abbott	10015516	Pode ser usado medicamento alternativo; modificar o procedimento de acordo
com o cartucho iSTAT	Abbott	03P79-25	Vários cartuchos estão disponíveis para atender às suas necessidades
Cetamina, 100 mg/mL	Western Medical Supply	4165	Diluir 1:10 em PBS para 1 mg/mL e combinar com xilazina a 1 mg/mL
Pomada para olhos	Akorn	Lágrimas	renovadas Evite tocar no olho com a ponta do dispensador
Temperatura ideal de corte (OCT) Composto	Fisher Scientific	23-730-571	Usado para congelar amostras de pulmão a -80 ° C para preparar para a patologia seccionando
Placa de Petri	VWR	25384-302	Poliestireno, descartável, esterilizado, 100&vezes; 15 mm
de solução salina tamponada com fosfato (PBS)	Corning	21-031-CM	PBS de Dulbecco sem cálcio e magnésio
Pontas de pipeta, 200-μ L	VWR	10017-044	Autoclave antes do uso
Pipetter, 200-μ L	Gilson	Pipetman P200	Autoclave e calibre antes de usar
Espalhador, Célula Bacteriana	Bel-Art	F377360006	Esterilize por cozimento ou autoclave antes de cada uso
Barra de Agitação, Magnética, 7,9 mm de Diâmetro e tempos; 38,1 mm de Comprimento	VWR	58948-150	Usado para agitar inóculos bacterianos concentrados durante a alíquota
Placa de Agitação, Corning Magnético		PC-620D	Usado para agitar inóculos bacterianos concentrados durante a alíquota
Caldo de soja tríptico (TSB)	BD	211822	Combine com ágar para fazer frasco TSA
, cônico, estéril, 50 mL	Corning	431720	Usado para preparar inóculos bacterianos
Frasco, cônico, estéril, 500 mL	Corning	431123	Usado para concentrar inóculos para preparar inóculos congelados
Frasco, criogênico, 2,0 mL	Corning	430659	Usado para armazenamento criogênico de inóculos bacterianos concentrados
Xilazina, 20 mg / mL	Akorn	AnaSed	Diluir 1:20 em PBS para 1 mg / mL e combinar com cetamina a 1 mg / mL

de 5 mm Injeção