O teste de infecção da planta: Spray e inoculação mediada por ferimento com o de patógeno vegetal Magnaporthe Grisea

Resumo

Aqui, apresentamos um protocolo para testar a virulência da planta com o patógeno vegetal Magnaporthe grisea. Este relatório contribuirá para o rastreio em larga escala das raças de isolados de fungos e servir como um excelente ponto de partida para a compreensão dos mecanismos resistentes de plantas durante reprodução molecular.

Resumo

As plantas possuem um sistema poderoso para se defender contra potenciais ameaças por fungos patogênicos. Para plantas agronomicamente importantes, no entanto, medidas atuais para combater tais patógenos revelaram-se demasiado conservadoras e, assim, não é suficientemente eficaz e eles podem potencialmente representar riscos ambientais. Portanto, é extremamente necessário identificar fatores de resistência do hospedeiro para auxiliar no controle de doenças de plantas naturalmente através da identificação de germoplasma resistente, o isolamento e caracterização de genes de resistência e a reprodução molecular de cultivares resistentes. A este respeito, há necessidade de estabelecer um método de inoculação precisa, rápida e em larga escala para criar e desenvolver genes de resistência da planta. O arroz bombardear o patógeno fungo Magnaporthe grisea causas sintomas de doença grave e perdas de rendimento. Recentemente, M. grisea tem emergido como um organismo modelo para estudar os mecanismos de interações planta-fungo patogênico. Daí, nós relatamos o desenvolvimento de um método de teste de virulência de planta que é específico para M. grisea. Este método fornece para inoculação de pulverizador com uma suspensão conidiais e ferindo inoculação com cubos de micélio ou gotículas de suspensão conidiais. A etapa chave do método de inoculação ferindo para folhas de arroz destacado é tornar-se feridas nas folhas da planta, que evita qualquer interferência causada pela resistência à penetração do anfitrião. Este pulverizador/ferir protocolo contribui para o rastreio rápido, preciso e em grande escala das raças de isolados de M. grisea . Este integrado e o método de infecção sistemática vegetal irá servir como um excelente ponto de partida para a obtenção de uma perspectiva ampla de questões em Fitopatologia.

Introdução

Brusone do arroz, causada pelo M. grisea, é uma das doenças mais graves para as variedades de arroz em todo o mundo^1,2. O processo pelo qual M. grisea infecta plantas hospedeiras inclui uma produção de conídios e a fixação de superfície, uma germinação de conídios e a formação de apressório, uma formação do peg de penetração e diferenciação de hifa infecciosa, e uma doença se espalhar ³. todas as etapas são comuns em muitos outros fungos patogênicos de plantas, e, de fato, um bloqueio de qualquer único estágio impede a infecção de plantas hospedeiras. Devido à sua impo....

Protocolo

1. spray inoculação com uma suspensão de conídios de M. grisea

1. Cultura de fungosa por M.grisea
   1. Prepare o meio de cultura de ágar (OTA) de tomate de aveia para estirpes fúngicas.
   2. Pesar de 30-50 g de farinha de aveia, adicione isto a 800 mL de água destilada/deionizada (ddH₂O) e ferver a mistura por 30 min na panela elétrica.
   3. Filtre o suco aveia cozida para o béquer através de um pedaço de gaze.
   4. Adicionar 150 mL de suco de tomate e 20 g de ágar-ágar ao filtrado no copo e adicione O ddH₂até 1.000 mL.
2. Preparação dos materiais exper....

Resultados

O fluxo de trabalho inteiro para a técnica é mostrado na Figura 1. Os planta infecção ensaios foram realizados em mudas de arroz suscetíveis de 14 dias de idade (o. sativa cv CO-39) ou folhas de cevada suscetível de 7 dias de idade (H. vulgare cv Golden promessa)^7,8,9. Para testar uma infecção sobre as folhas de arroz, uma suspensão conidiais (1.0 x.......

Discussão

Genes de resistência de doença de planta desempenham um papel essencial na prevenção de infecções por patógenos, incluindo patógenos fúngicos^1,12. Brusone do arroz tem sido usado como um modelo para entender a natureza das estruturas de população do patógeno e a identificação de genes de resistência de planta⁴. Portanto, é necessário examinar o genótipo de resistência de doença e de genótipos de avirulence das principais variedades de plan.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Papel de filtro	da marca GE Healthcare(Suécia)
Tubo de 50 mL	CORNING(Amercia)	430290
Centrífuga	Eppendorf(Amercia)	5804R
Prato de cultura	Thermofisher(Amercia)	150326
Pipeta de 0,5-5 mL	Eppendorf
pipeta 100-1000uL	Eppendorf	4920000083
Bomba de vácuo	Leybold	D25B
Agulha de dissecção	FST	26000-35
Incubadora	MEMMERT	PYX313
Anel de inoculação	Greiner Bio One	731175

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