Summary
O objetivo deste trabalho é descrever um protocolo para a criação de um fantasma gordo-água prático que pode ser personalizado para produzir espectros com diferentes porcentagens de gordura e volumes.
Abstract
Como novas técnicas são desenvolvidas para o tecido adiposo de imagem, métodos para validar tais protocolos estão se tornando cada vez mais importantes. Fantasmas, réplicas experimentais de um tecido ou órgão de interesse, fornecem uma solução de baixo custo, flexível. No entanto, sem acesso a equipamento especializado e caro, construindo fantasmas estáveis com altas frações de gordura (EG., > níveis de gordura fração 50% como aqueles vistos em marrom tecido adiposo) pode ser difícil devido à natureza hidrofóbica de lipídios. Este trabalho apresenta um protocolo detalhado, de baixo custo para a criação de fantasmas de 5 x 100 mL com gordura frações de 0%, 25%, 50%, 75% e 100% usando componentes facilmente acessíveis (água destilada, ágar, solúvel em água e suprimentos de laboratório básico (placa de aquecimento, copos, etc.) surfactante, benzoato de sódio, agente de contraste gadolínio-diethylenetriaminepentacetate (DTPA), óleo de amendoim e óleo solúvel surfactante). O protocolo foi projetado para ser flexível; Ele pode ser usado para criar espectros com diferentes frações de gordura e uma grande variedade de volumes. Fantasmas, criadas com essa técnica foram avaliadas no estudo de viabilidade que comparou os valores de fração de gordura do gordo-água ressonância magnética para os valores-alvo nos phantoms construídos. Este estudo resultou em um coeficiente de correlação de concordância de 0.998 (intervalo de confiança de 95%: 0.972-1,00). Em resumo, estes estudos demonstram a utilidade da gordura fantasmas para validar as técnicas de imagem através de uma gama de tecidos clinicamente relevantes e órgãos de tecido adiposo.
Introduction
Interesse em quantificar o tecido adiposo e conteúdo de triglicérides usando modalidades de imagem, como ressonância magnética (MRI), se estende em muitos campos. Áreas de investigação incluem a investigação de depósitos de tecido adiposo de branco e marrom e gravidez ectópica armazenamento de lipídio em órgãos e tecidos como o fígado1, pâncreas2e músculo esquelético3. Como essas novas técnicas de quantificação adiposa são desenvolvidas, métodos são necessários para confirmar que imagens parâmetros são válidos para pesquisa e aplicações clínicas.
Fantasmas, réplicas experimentais de um tecido ou órgão, fornecer uma ferramenta de baixo custo, flexível e controlado para desenvolver e validar imagem técnicas4. Especificamente, os fantasmas podem ser construídas para consistem de gordura e água em uma proporção ou gordura fração de volume (FF) comparável do tecido de interesse clínico. Clinicamente, os valores de FF em tecidos e órgãos podem variar amplamente: FF em marrom tecido adiposo cai entre 29,7% e 93,9%5; o fígado médio FF em pacientes de esteatose é 18,1 ± 9,0%6; o FF do pâncreas em adultos em risco para intervalos de diabetes tipo 2 entre 1,6% e 22,2%7; e em alguns casos de doença avançada, pacientes com distrofia muscular de Duchenne podem ter valores de FF de quase 90% em alguns músculos8.
Porque moléculas não polares tais como lipídios não se dissolvem bem em soluções compostas por moléculas polares tais como a água, criar fantasmas estáveis com um alvo de alto FF permanece desafiador. Para FF até 50%, muitos métodos existentes podem ser usados para criar gordura água fantasmas9,10,11,12. Outros métodos que atingir maiores FFs normalmente exigem equipamentos caros como um homogeneizador ou uma célula ultra-sônico disruptor13,14. Embora essas técnicas fornecem um roteiro para altas fantasmas de FF, restrições de equipamentos e quantidades variadas de detalhes experimentais limitam os esforços para criar fantasmas água gordura robusto e reprodutível.
Baseando-se estas técnicas anteriores, desenvolvemos um método para construir os phantoms água gordura rentável e estável em um valores de intervalo personalizável de FF. Este protocolo detalha os passos necessários para completar 5 x 100 mL de gordura fantasmas com valores de FF de 0%, 25%, 50%, 75% e 100% usando uma única placa de aquecimento. Pode ser facilmente ajustada para criar vários volumes (10 a 200 mL) e percentagens de gordura (% de 0 a 100). A eficácia da técnica fantasma foi avaliada a viabilidade estudo comparando gordo-água MRI FF valores para os valores-alvo FF nos phantoms construídos.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. preparar a estação de trabalho e materiais
- Cumpra todas as regras de segurança de laboratório. Use luvas e óculos de proteção. Leia a folha de dados material de segurança para cada um dos reagentes utilizados e tomar as devidas precauções. Revise os materiais e lista de equipamentos, procedimentos de manipulação de produtos químicos e produtos vidreiros precauções.
Atenção: Este protocolo requer o uso de uma placa de aquecimento em altas temperaturas. Use cautela e use luvas resistentes ao calor quando interagindo com hot recipientes e não toque na superfície da chapa. - Limpar o espaço de trabalho e limpe as superfícies com desinfetante. Lave as mãos e colocar luvas.
- Esterilize todos os instrumentos e o interior de todos os frascos de vidro para reduzir o risco potencial de contaminação e aumentar a longevidade do fantasma.
Nota: Se o fantasma será usado para mais de um par de dias, Limpe periodicamente a superfície do fantasma concluído com etanol para impedir o crescimento bacteriano.
2. preparar a solução de água
- Prepare o espaço de trabalho para a solução de água. Posicione os seguintes materiais e equipamentos no banco: cilindro, copo de 400 mL, barra de agitação, escala, 2 barcos de pesar x, espátula, 2 x 1.0 mL seringas com agulha, água destilada, agente de contraste gadolínio-diethylenetriaminepentacetate (DTPA), formou-se catiônico solúvel em água, ágar e benzoato de sódio.
Nota: Seringas podem ser usadas com ou sem agulhas. No entanto, usar agulhas irá melhorar a precisão da medição e evitar respingos quando o conteúdo está sendo adicionado às soluções de água ou óleo. - Coloque uma barra de agitação em um copo de 400 mL. Use um cilindro de 100 ou 200 mL graduada para medir 300 mL de água destilada e despeje a água no copo. Colocar o copo na placa de aquecimento e definir a 90 ° C, com uma taxa de agitação de 100 rpm.
Nota: Altas temperaturas são usadas neste protocolo para obter resultados rápidos. Porque as soluções não são deixadas na placa de aquecimento por longos períodos de tempo, a temperatura de set-point para a chapa não reflete a temperatura da solução. - Use uma escala calibrada para medir 0,30 g de benzoato de sódio em um barco de pesar. Adicione o benzoato de sódio para a solução de água.
- Use uma seringa para medir 0,6 mL do tensoactivo solúvel em água. Certifique-se de que não há nenhuma bolha de ar. Segure a agulha alguns milímetros sobre o centro da solução e libere lentamente o surfactante solúvel em água para evitar respingos nas paredes do copo.
- Utilizando uma seringa limpa, medida 0,24 mL do agente de contraste de gadolínio-DTPA. Adicioná-lo para o copo, usando a mesma técnica como na etapa 2.4.
Nota: O gadolínio-DTPA é usada para ajustar propriedades de relaxamento de MRI do fantasma para coincidir com as do tecido de interesse. O leitor pode ajustar o volume do gadolínio-DTPA adicionado para melhor coincidir com as propriedades de relaxamento do tecido de interesse. - Medida 9,0 g de ágar-ágar em um barco de pesar. Lentamente, colher o ágar com uma espátula para o copo com água.
- Uma vez que tudo foi adicionado à solução de água, aumentar a temperatura da placa de aquecimento a 350 ° C e agitar barra velocidade de 1100 rpm durante 5-10 min derreter o ágar.
- Para verificar se o ágar é derretido, brevemente remover a solução da água da placa de aquecimento, pare de mexer e ver a cor da solução. Ágar-ágar derretido deve ser limpo (sem enfeites ou aglomerados) e amarelo ou laranja na cor.
- Uma vez que o agar é totalmente derretido, use uma seringa ou despeje cerca de 3,5 mL de solução de água em um pequeno frasco. Se a solução de teste não define ou separa após 5-10 min, o ágar não é derretido. Aumentar a temperatura da placa de aquecimento volta a 350 ° C e continuar a solução de aquecimento.
- Repita a etapa 2.8 até a solução de água em conjuntos de frasco de teste corretamente.
- Deixe a solução de água na placa de aquecimento a 50 ° C e 100 rpm. Limpar o espaço de trabalho e preparar a solução de óleo.
- Remover os seguintes materiais de banco: escala, 2 x pesar barcos, espátula, 2 x 1.0 mL seringas com agulha (usado), água destilada, agente de contraste gadolínio-DTPA, catiônico solúvel em água, ágar e benzoato de sódio.
- Posicione os seguintes materiais e equipamentos no banco: copo de 400 mL (limpo), agitar bar (limpo), seringa de 2,0 mL com agulha, óleo de amendoim e óleo solúvel surfactante.
3. solução de óleo
- Coloca uma nova barra de agitação em um copo limpo 400 mL. Use um cilindro graduado para medir 300 mL de óleo de amendoim e despeje o copo. Retirar o copo que contém a solução de água e colocar o copo de solução de óleo na placa de aquecimento. Conjunto para 90 ° C, com uma taxa de agitação de 100 rpm durante 1 min.
Nota: o óleo de amendoim é usado porque tem um espectro de ressonância magnética nuclear similar em comparação com triglicérides no tecido adiposo humano15.- Não deixe o óleo na placa de aquecimento sem vigilância. Se o óleo fica muito quente e começa a fumar, remova-o da placa de aquecimento e reduzir a temperatura antes de retornar o óleo para a chapa.
- Medida de 3,0 mL do tensoactivo solúveis no óleo com uma seringa limpa. Usando a mesma técnica descrita na etapa 2.4, adicione o óleo solúvel surfactante para o copo. Defina a placa de aquecimento a 150 ° C e 1100 rpm por 5 min misturar totalmente a solução de óleo.
- Levar a solução de óleo fora a chapa e limpar o espaço de trabalho em preparação para a criação do fantasma.
- Remover os seguintes materiais de banco: seringa de 2,0 mL com agulha (usado), óleo de amendoim e óleo solúvel surfactante.
- Posicione os seguintes materiais e equipamentos no banco: 250 mL frasco de Erlenmeyer, agite bar (limpo), pipetas volumétricas, titular da pipeta volumétrica e frascos de vidro de 5 x 120 mL.
4. criar fantasma emulsão
- Prepare-se para as soluções de água e óleo pipetas volumétricas. Pipetas só devem ser usadas com suas respectivas soluções para evitar a contaminação cruzada.
- Corresponde ao tamanho da pipeta para o volume que está sendo usado no protocolo. Por exemplo, use pipetas volumétricas de 2 x 50 mL (50 mL de solução de água + 50 mL de solução de óleo) para criar um 100ml fantasma com um alvo FF de 50% de gordura.
- A solução de água na placa de aquecimento e a placa de aquecimento a 300 ° C e 1100 rpm. Depois de 4-5 min, desliga o misturador.
- Usando uma pipeta volumétrica, verificar se a solução de água está pronta para extração parcialmente encher a pipeta com uma pequena quantidade (5-10 mL) da solução e soltando volta para o copo. Se a solução de água pode ser facilmente removida e lançada sem excessivas remanescentes na pipeta, avançar para o próximo passo, caso contrário, deixá-lo na placa de aquecimento e verifique novamente em 2-3 min.
Nota: Os componentes da solução de água são mais suscetíveis à configuração e separando, por isso é melhor manter a solução de água, agitação e/ou quente tão frequentemente quanto possível. Se a solução de água não é aquecida e mexida antes de ser transferido, será muito difícil medir volumes precisos devido à tendência de ágar a se congelar quando resfriado. - Cuidadosamente, adicione uma barra de agitação limpa para um Erlenmeyer de 250 mL. Levar a solução de água fora da chapa, medir o volume adequado (tabela 2) e transferir para o Erlenmeyer.
- A solução de óleo na placa de aquecimento e a 90 ° C e 1100 rpm para garantir que a solução é homogênea. Após 1-2 min, remover a solução de óleo da placa de aquecimento e substituí-lo com o balão de Erlenmeyer.
- Medir a quantidade apropriada da solução de óleo (tabela 2) e adicionar lentamente a solução de água no Erlenmeyer.
- Uma vez que toda solução de óleo foi adicionada, aumentar a temperatura de 300 ° C e manter a agitação a 1100 rpm. Misture as soluções combinadas para 4-5 min (deve haver vórtice da barra de agitação). A emulsão deve ser branca, com uma textura cremosa.
- Use um retriever de barra de agitação magnética para remover a barra de agitação.
Nota: O recuperador de barra de agitação deve ser usado para remover as barras do rebuliço de todas as emulsões de futuros. Limpe-a completamente entre cada uso. - Use luvas resistentes ao calor para com cuidado, despeje a mistura no Erlenmeyer em um frasco de vidro limpo 120 mL. Lentamente, despeje a mistura em baixo do lado da jarra de vidro para evitar bolhas na mistura, enquanto esfria.
- Limpe o frasco Erlenmeyer e agitar bar e, em seguida, repita os passos 4.2-4.8, ajustando as quantidades das soluções de água e óleo, até que todos os fantasmas são criadas.
Nota: Certifique-se que o vidro é legal antes de limpar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Se a solução de água foi preparada corretamente, uma pequena quantidade da solução deve congelar rapidamente em um frasco de teste (Figura 1, à esquerda). Se a solução separa (Figura 1, direita), a solução deve ser preparada novamente (conforme instruído na etapa 3.8 do protocolo). Se a emulsão separa (exemplos na Figura 2, esquerdo e direito), o fantasma não é viável e deve ser Descartado. Quando isso ocorre, geralmente é porque a emulsão não atingiu uma temperatura alta o suficiente.
Fantasmas de sucesso irão congelar para formar uma mistura homogênea, que pode ser fotografada e medida através de MRI. (Figura 3). Um coeficiente de correlação de concordância alta (0.998; intervalo de confiança de 95%: 0.972-1,00) e a inclusão da linha de identidade dentro da banda de confiança de 95% da linha de regressão sugere que os valores de fração (FSF) média MRI-observado sinal de gordura medidos em uma região de interesse nas imagens não diferiu significativamente entre os valores conhecidos de FF dos phantoms de gordura-água (Figura 4).
Figura 1. Ilustração de congelados (à esquerda) e separados dos frascos de testes de solução de água (à direita). Um frasco de teste pequena deve ser amostrado para avaliar a viabilidade da solução de água. Se a solução de água congela (à esquerda), prosseguir com o próximo passo no protocolo fantasma de construção. Se o separa de solução de água (indicado por duas setas no rótulo do frasco certo), a solução de água precisa ser re-elaborado antes ele pode ser usado para a formação da emulsão fantasma.
Figura 2. Exemplo de emulsões fantasmas malsucedidas. Inspecione visualmente o fantasma aproximadamente 10 min depois de derramar para determinar se a emulsão irá definir corretamente. Se o fantasma começa a se separar (esquerda) ou aparece não-homogênea (direita), os phantoms precisam ser refeito.
Figura 3. Representação esquemática de uma gama de espectros e seus resultados respectivos ressonância magnética (MRI). Fotos mostram as diferenças de cor ligeira nos phantoms construídos (0%, 25%, 50%, 75% e 100%; superior). Mapas de (FSF) de gordura-sinal-fração de próton-densidade revelam uma medida de FSF homogênea semelhantes para o teor de gordura alvo (médio). Efeitos de borda distintos, devido às propriedades de imagem dos recipientes de vidro são aparentes nas fronteiras de cada mapa da FSF.
Figura 4. Gráfico de dispersão mostrando medidos valores FSF como uma função de valores conhecidos de FF (pontos azuis). A linha preta sólida indica identidade. A linha tracejada azul indica a linha de melhor ajuste. A área sombreada indica o intervalo de confiança de 95% das estimativas. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 5. Desenho ilustrando a visão geral de alto nível do protocolo. Canto superior esquerdo do diagrama mostra os ingredientes, materiais e as configurações da placa de aquecimento para preparar a solução de água e o superior direito do diagrama mostra os ingredientes, materiais e as configurações da placa de aquecimento para preparar a solução de óleo. A parte inferior mostra as configurações da placa de aquecimento para combinar as soluções de óleo e água para formar a emulsão. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
| Quantidade | Equipamento/Material | ||
| 300 mL | Água destilada | ||
| 9,0 g | Ágar-ágar | ||
| 0,6 mL | Catiônico solúvel em água | ||
| 0,24 mL | Agente de contraste gadolínio-DTPA | ||
| 0,3 g | Benzoato de sódio | ||
| 300 mL | Óleo de amendoim | ||
| 2,0 mL | Óleo solúvel Surfacant | ||
| 1 * | Placa de aquecimento com agitador | ||
| 3 | Mexa bares | ||
| 2 | Copo de 400 mL | ||
| 1 | Balão de Erlenmeyer de 250 mL | ||
| 2 | Pipeta volumétrica de 25 mL | ||
| 1 | 3,0 mL seringa | ||
| 2 | Seringa de 1,0 mL | ||
| 3 | Agulhas de seringa | ||
| 1 | Espátula | ||
| 1 | Escala | ||
| 2 | Pesar de barcos | ||
| 5 | Frascos de vidro de 120 mL | ||
| 1 | Luvas resistentes ao calor (par) | ||
| 1 | frasco de dram de 1-3 | ||
| 2 | pipeta volumétrica de 50 mL | ||
| 2 | pipeta volumétrica de 75 mL | ||
Tabela 1. Quantidade de materiais e equipamentos necessários para fantasmas de 5 x 100 mL (0%, 25%, 50%, 75% e 100%).
| Medições de fantasma de água/óleo | ||
| Percentual de gordura | Solução de água | Solução de óleo |
| 0% | 100 mL | 0 mL |
| 25% | 75 mL | 25 mL |
| 50% | 50 mL | 50 mL |
| 75% | 25 mL | 75 mL |
| 100% | 0 mL | 100 mL |
Tabela 2. Medições de óleo e água soluções para criar fantasmas 5 x 100 mL (0%, 25%, 50%, 75% e 100%).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Nós descrevemos um método robusto para criar fantasmas gordo de água adequado para validar as técnicas de imagem médicas usadas para quantificar o tecido adiposo e triglicérides conteúdo vivo em. Criando dois reservatórios (um para a solução de óleo) e outro para a solução de água, os phantoms estáveis com uma variedade de valores de FF, incluindo valores superiores a 50%, foram construídos sem a necessidade de equipamento caro. Fantasmas de FF altas (> 50%) fornecer o utilitário para assegurar-se de técnicas de imagem para quantificação adiposa são válidas para os tecidos ou órgãos com valores elevados de FF, como marrom tecido adiposo5. As estimativas de MRI da FSF bem foram correlacionadas com os valores conhecidos de FF.
Quando apenas uma única placa de aquecimento está disponível (como descrito neste protocolo), a logística de manutenção de calor em cada solução é uma preocupação primordial. Sem aquecimento ou agitação, a solução de água pode esfriar e começar a congelar. Para evitar isso, coloque a solução de água na placa de aquecimento (< 100 ° C, ~ 100 rpm) sempre que possível e sempre entre os phantoms de mistura. Importante, o óleo e a água de soluções devem ser bem misturadas quando cada solução é extraída para criar o fantasma. Coloque sempre a respectiva solução na placa de aquecimento pelo menos 30 s (< 100 ° C, ~ 100 rpm) antes de extrair a solução. Em um caso ideal, fogão separado deve ser usado para a solução de água, a solução de óleo e a emulsão de fantasma. Siga os mesmos passos descritos acima para criar cada solução. Uma vez inteiramente misturados, conjunto ambos fogão a 50 ° C e 100 rpm para evitar a congelação e sedimentação. Antes de extrair a solução do copo, desligue o misturador e esperar para a barra de agitação parar completamente em movimento.
Enquanto a precisão e exatidão do óleo a proporção de água em emulsão é crítica, as medições de cada componente nas soluções de óleo e água permitem mais flexibilidade. Em sua fundação, a FSF MRI-observado é uma medida de "gordura" versus "non-fat" sinais no volume total; Portanto, "non-fat" pode ser qualquer composto que contribui para a intensidade do sinal de imagem (água, ágar, surfactante, etc.). Ainda é aconselhável medir componentes da solução de água e óleo com a maior precisão possível, como essas proporções foram encontradas para criar os espectros mais estáveis e repetíveis. Pequenos desvios do montante do ágar na solução de água (ex., 8,9 em vez de 9,0 g), no entanto, não deverá afectar o FF global da emulsão se o óleo, a proporção da solução de água é mantido. A medição dos volumes das soluções de água e óleo acima da temperatura ambiente também pode resultar em um erro pequeno devido aos efeitos da expansão térmica do volume de cada componente. Tendo em conta a temperatura volumétrica coeficientes de expansão de água e óleo, como refletido em suas densidades16,17e a relativamente pequena variação de temperatura, estimamos que o erro do FF global devido a térmica expansão para ser menos de 0,5%. Constatamos também a possibilidade de que o relaxivity de gadolínio-DTPA para água e lipídios pode ser diferentes. Se assim e dependendo dos parâmetros de sequência de pulso, a precisão quantitativa das medidas MRI FSF poderia ser diminuído. A FSF MRI-observado também pode variar com o modelo espectral utilizado para analisar os dados.
Embora o método descrito aqui só tem sido utilizado para fazer fantasmas entre 10 mL e 200 mL, a técnica pode ser usada para produzir os phantoms volume menor ou maior. Nomeadamente, é difícil extrair volumes de < 10 mL dos reservatórios devido à viscosidade das soluções. Fantasmas de pequeno volume, portanto, exigem emulsão excesso de qual desenhar o volume desejado para manter a precisão de FF do fantasma final. Por exemplo, um 10 mL fantasma com uma meta de 10% FF exige uma extração de 10ml de uma emulsão de 100 mL. Ao criar espectros grandes (> 100 mL), o tamanho da barra de agitação e vidraria deve ser escalado up junto (e a proporção da solução para capacidade de vidro) para criar um vórtice na solução quando o misturador é definido como > 500 rpm. A emulsão provavelmente não vai conseguir homogeneidade sem um vórtice.
Dada a complexidade da criação de altas fantasmas de FF, pequenos desvios do protocolo podem ter um efeito profundo sobre a estabilidade e a qualidade do final fantasma. Condições ambientais, como temperatura, altitude e umidade, podem alterar o processo de preparação fantasma de maneira divergente e afetar adversamente o produto final. Controlos intermédios da solução água fornecem oportunidades para detectar e mitigar estes efeitos possíveis. No entanto, é possível que, mesmo com rigorosa atenção para os detalhes de protocolo, o último fantasma pode separar, e o processo terá de ser repetido.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Os autores declaram que a pesquisa foi realizada na ausência de qualquer relação comercial ou financeira que poderia ser interpretada como um potencial conflito de interesses.
Acknowledgments
Apoio financeiro para esta pesquisa foi fornecida o National Institutes of Health (NIH) e Instituto Nacional de Diabetes e digestivo e doenças do rim (NIDDK) / NIH R01-DK-105371. Agradecemos a Dr. Houchun (Harry) Hu para conselhos e sugestões na criação fantasma gordo de água.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Distilled Water | Amazon | B000P9BY38 | Base of water solution |
| Agar | Sigma Aldrich Incorporated | A1296-100G | Gelling agent |
| Water-Soluble Surfactant | Sigma Aldrich Incorporated | P1379-500ML | Surfactant/emulsifying agent |
| Gadolinium-DTPA Contrast Agent | Bayer Healthcare | 50419-0188-01 | Magnetic Resonance Imaging Contrast Agent. |
| Sodium Benzoate | Sigma Aldrich Incorporated | 71300-250G | Preservative |
| Peanut Oil | Amazon | 54782-LOU | Base of oil solution |
| Oil-Soluble Surfactant | Sigma Aldrich Incorporated | S6760-250ML | Surfactant/emulsifying agent |
| Hotplate w/ Stirrer | Fisher Scientific | 07-770-152 | |
| Stir bars (Egg-Shaped) | Sigma Aldrich Incorporated | Z127116-1EA | |
| 400 mL Beaker | Sigma Aldrich Incorporated | CLS1003400-48EA | |
| 250 mL Erlenmeyer Flask | Sigma Aldrich Incorporated | CLS4450250-6EA | |
| 25 mL Glass Volumetric Pipette | Fisher Scientific | 13-650-2P | Quantity = 2 |
| 50 mL Glass Volumetric Pipette | Fisher Scientific | 13-650-2S | Quantity = 2 |
| 75 mL Glass Volumetric Pipette | Fisher Scientific | 13-650-2T | Quantity = 2 |
| 3.0 mL Syringe | Sigma Aldrich Incorporated | Z248002-1PAK | |
| 1.0 mL Syringe | Sigma Aldrich Incorporated | Z230723-1PAK | |
| Spatula | Sigma Aldrich Incorporated | S3897-1EA | |
| Scale (100g X 0.01g Resolution) | Amazon | AWS-100-BLK | |
| Weigh Boats | Sigma Aldrich Incorporated | Z740499-500EA | |
| 120 mL Glass Jars | McMaster Carr Supply Co | 3801T73 | |
| Heat Resistant Gloves (pair) | Amazon | B075GX43MN | |
| Syringe Needles | Sigma Aldrich Incorporated | Z192341-100EA | |
| 18" stir bar retriver | Fisher Scientific | 14-513-70 | |
| 1 Dram Clear Glass Vial | Fisher Scientific | 03-339-25B |
References
- Franz, D., et al. Association of proton density fat fraction in adipose tissue with imaging-based and anthropometric obesity markers in adults. Int J Obes. , 1-8 (2017).
- Chai, J., et al. MRI chemical shift imaging of the fat content of the pancreas and liver of patients with type 2 diabetes mellitus. Exp Ther Med. 11 (2), 476-480 (2016).
- Hogrel, J. Y., et al. NMR imaging estimates of muscle volume and intramuscular fat infiltration in the thigh: variations with muscle, gender, and age. Age (Omaha). 37 (3), 1-11 (2015).
- Hoskins, P. R. Simulation and Validation of Arterial Ultrasound Imaging and Blood Flow. Ultrasound Med Biol. 34 (5), 693-717 (2008).
- Hu, H. H., Perkins, T. G., Chia, J. M., Gilsanz, V. Characterization of human brown adipose tissue by chemical-shift water-fat MRI. Am J Roentgenol. 200 (1), 177-183 (2013).
- d'Assignies, G., et al. Noninvasive quantitation of human liver steatosis using magnetic resonance and bioassay methods. Eur Radiol. 19 (8), 2033-2040 (2009).
- Schwenzer, N. F., et al. Quantification of pancreatic lipomatosis and liver steatosis by MRI: comparison of in/opposed-phase and spectral-spatial excitation techniques. Invest Radiol. 43 (5), 330-337 (2008).
- Wokke, B. H., et al. Quantitative MRI and strength measurements in the assessment of muscle quality in Duchenne muscular dystrophy. Neuromuscul Disord. 24 (5), 409-416 (2014).
- Fischer, M. A., et al. Liver Fat Quantification by Dual-echo MR Imaging Outperforms Traditional Histopathological Analysis. Acad Radiol. 19 (10), 1208-1214 (2012).
- Hayashi, T., et al. Influence of Gd-EOB-DTPA on proton density fat fraction using the six-echo Dixon method in 3 Tesla magnetic resonance imaging. Radiol Phys Technol. , (2017).
- Hines, C. D. G., Yu, H., Shimakawa, A., McKenzie, C. A., Brittain, J. H., Reeder, S. B. T1 independent, T2* corrected MRI with accurate spectral modeling for quantification of fat: Validation in a fat-water-SPIO phantom. J Magn Reson Imaging. 30 (5), 1215-1222 (2009).
- Fukuzawa, K., et al. Evaluation of six-point modified dixon and magnetic resonance spectroscopy for fat quantification: a fat-water-iron phantom study. Radiol Phys Technol. , 1-10 (2017).
- Bernard, C. P., Liney, G. P., Manton, D. J., Turnbull, L. W., Langton, C. M. Comparison of fat quantification methods: A phantom study at 3.0T. J Magn Reson Imaging. , (2008).
- Poon, C., Szumowski, J., Plewes, D., Ashby, P., Henkelman, R. M. Fat/Water Quantitation and Differential Relaxation Time Measurement Using Chemical Shift Imagin Technique. Magn Reson Imaging. 7 (4), 369-382 (1989).
- Yu, H., Shimakawa, A., Mckenzie, C. a, Brodsky, E., Brittain, J. H., Reeder, S. B. Multi-Echo Water-Fat Separation and Simultaneous R2* Estimation with Multi-Frequency Fat Spectrum Modeling. Spectrum. 60 (5), 1122-1134 (2011).
- Peri, C. The extra-virgin olive oil handbook. , John Wiley & Sons, Ltd. Chichester, UK. (2014).
- Kell, G. S. Density, Thermal Expansivity, and Compressibility of Liquid Water from 0° to 150°C: Correlations and Tables for Atmospheric Pressure and Saturation Reviewed and Expressed on 1968 Temperature Scale. J Chem Eng Data. 20 (1), 97-105 (1975).
