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Artigo de método

In Vitro Criação de abelhas solitárias: uma ferramenta para avaliar os fatores de risco Larval

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DOI:

10.3791/57876

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16 de julho de 2018

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Neste artigo

Resumo

Sprays de fungicida em plantas de floração podem expor abelhas solitárias para altas concentrações de resíduos do fungicida transmitidas pelo pólen. Usando experimentos baseados em laboratório, envolvendo-se em vitro-larvas de abelha criados, este estudo investiga os efeitos interativos de consumir pólen tratada com fungicida derivado de host e host não plantas.

Resumo

Embora as abelhas solitárias fornecem serviços de polinização crucial para culturas selvagens e gerenciados, este grupo de ricos em espécies foi negligenciado em grande parte em estudos de regulamento de pesticidas. O risco de exposição a resíduos do fungicida é provável que seja especialmente elevado se o spray ocorre em ou perto de plantas hospedeiras, enquanto as abelhas estão coletando pólen para provisionar seus ninhos. Para espécies de Osmia que consomem pólen de um seleto grupo de plantas (oligolecty), a incapacidade de usar o pólen de plantas não-hospedeiras pode aumentar seu fator de risco para toxicidade relacionadas com fungicida. Este manuscrito descreve protocolos usados com sucesso criar abelhas oligolectic mason Osmia ribifloris sensu lato, do ovo à fase prepupal em placas de cultura de células em condições laboratoriais padronizados. O em vitro-abelhas criadas posteriormente são usadas para investigar os efeitos da fonte de exposição e pólen de fungicida na aptidão de abelha. Baseado em um experimento fatorial 2 x 2 totalmente atravessado, o experimento examina os efeitos principais e interativos da fonte de exposição e pólen de fungicida na aptidão larval, quantificada por biomassa prepupal, tempo de desenvolvimento larval e sobrevivência. Uma grande vantagem desta técnica é que usando em vitro-abelhas criadas reduz a variabilidade natural de fundo e permite a manipulação simultânea de vários parâmetros experimentais. O protocolo descrito apresenta uma ferramenta versátil para hipóteses testes envolvendo o conjunto de fatores que afetam a saúde das abelhas. Para os esforços de conservação a ser cumprido com sucesso significativo e duradouro, tais insights sobre a complexa interação de fatores fisiológicos e ambientais que levam a abelha declínios provarão para ser crítico.

Introdução

Dado o seu papel como o grupo dominante de insetos polinizadores1, a perda global em populações de abelhas é uma ameaça para a segurança alimentar e o ecossistema estabilidade2,3,4,5,6 ,7. As tendências em declínio em ambas as populações de abelhas gerenciado e selvagens têm sido atribuídas a vários factores de risco compartilhados, incluindo fragmentação de habitat, emergentes, parasitas e agentes patogénicos, perda de diversidade genética e a int....

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Protocolo

1. prepare soluções propiconazol para experimentos de exposição de fungicida

  1. Prepare 0,1 x solução fungicida dissolvendo volumes adequados de propiconazol adquiridos comercialmente 14,3% em água estéril no dia do experimento. Certifique-se de que a única solução recentemente preparada de fungicida é usada para todos os tratamentos.
  2. Adicione 23 µ l de 0,1 x solução fungicida por grama de provisão de pólen para obter a concentração máxima de propiconazol anteriormente relatado de pólen de abelha-coletados24 (0,361 PPM ou µ g de ingrediente ativo g-1 de pólen).

2. colher ovos e disposi....

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Resultados

Aptidão larval foi quantificada utilizando três métricas (i) larval tempo do desenvolvimento, (ii) prepupal biomassa e sobrevivência (iii) por cento. Uma ANOVA de duas vias foi realizada utilizando exposição fungicida (dois níveis: nenhum fungicida, fungicida) e fonte de pólen (dois níveis: Host pólen, pólen de Non-host) como variáveis independentes e tempo de desenvolvimento larval como variável dependente. O principal efeito para exposição de fungicida (F1,28 = 1,24,.......

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Discussão

Criação de abelhas do lado de fora seus juncos de nidificação naturais, sob condições de laboratório, permite o teste de múltiplas hipóteses relativas à aptidão larval. Na medida em que fatores não identificados continuam a causar mortalidade das abelhas, os estudos de avaliação de risco usando em vitro experiências podem ajudar a identificar ameaças potenciais e informar as práticas de gestão para este grupo de ricos em espécies de polinizadores selvagens 12 ,

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Divulgações

Os autores não têm nada para divulgar.

Agradecimentos

Os autores agradecer Kimball Clark e Tim Krogh para fornecer Osmia aninhamento juncos, Meredith Nesbitt e Molly Bidwell para assistência em laboratório, os Drs Cameron Currie, Christelle Guédot, Terry Griswold, Michael Branstetter e três revisores anônimos para seus comentários úteis que melhorou o manuscrito. Este trabalho foi financiado por fundos de USDA-Agricultural Research Service, que se apropriou (atual Research Information System #3655-21220-001), Wisconsin, Ministério da agricultura, do comércio e defesa do consumidor (#197199), National Science Foundation (sob N º de Grant Deb-1442148), o centro de pesquisa de bioenergia do DOE grandes lagos (DOE e....

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
ovos de O. ribifloris sensu lato (s.l.)Kaysville, Condado de Davis, Utah, EUA
Palhetas OsmiaNativebees.comNAPalhetas recém-tampadas
Conjunto de dissecaçãoVWR89259-964Esterilizar antes de usar
Alicate de ponta compridaHusky1006
Placas de cultura de 6 poçosVWR10062-892Estéril selado
Placas de cultura de 48 poçosVWR10062-898Placas de Petri seladas estéreis
VWR25373100selados estéreis
VWR10770-448
Escova de pêlo de cameloBioquip1153A
Cápsulas de estanhoEA ConsumíveisD1021Esterilizar antes de usar
SacaroseVWR470302-808
Propiconazol 14,3Quali-Ppro60207-90-1Propiconazol 14,3%
Pólen de abelhaenergizado897098001244Pólen cru natural não tratado
MicrobalançaVWR10204-990
PulverisetteLAB SYNERGY INC.
Varetas de madeiraVWR470146908Esterilizar antes de usar
Fita de vedaçãoVWR89097-912
MicroscópioVWR89403-384
Tabuleiro de plantaçãoVWR470150-632
EtanolVWRBDH1158-4LP
Tubo de centrifugaçãoVWR21008936
MicrosseringaCole-PalmerUX-07940-07
Pinça de borrachaAmazonB0135HWPN4
Agulhas de seringaVWR89219-334
LiofilizadorLabconoLFZ-1L
Software estatísticoSPSSVersão 21.0
Barcos de pesagem quadrados 30334913

Referências

  1. Klein, A. -M., et al. Importance of pollinators in changing landscapes for world crops. P Roy Soc Lond B Bio. 274 (1608), 303-313 (2007).
  2. Biesmeijer, J. C. J., et al. Parallel declines in pollinators and insect-pollinated plants in Britain ....

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Reimpressões e permissões

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