In Vitro Diferenciação de Mouse Granulócito-macrófago-colônia-estimulando Factor (GM-CSF)-produzindo pilhas de T Helper (THGM)

Yi Lu; Xin-Yuan Fu; Yongliang Zhang

doi:10.3791/58087

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Artigo de método

In Vitro Diferenciação de Mouse Granulócito-macrófago-colônia-estimulando Factor (GM-CSF)-produzindo pilhas de T Helper (T_HGM)

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DOI:

10.3791/58087

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10 de setembro de 2018

Yi Lu¹^,²^,³ , Xin-Yuan Fu³ , Yongliang Zhang¹^,²

¹Department of Microbiology and Immunology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, ²Immunology Programme, Life Sciences Institute, National University of Singapore, ³Cancer Science Institute of Singapore, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore

Neste artigo

Resumo

Aqui, apresentamos um protocolo para diferenciar murino células auxiliares (T_HGM) T granulocyte-macrophage-colony-stimulating-factor-producing de células T CD4 + de ingênuo, incluindo o isolamento de células T CD4 + de ingênuo, diferenciação de T_HGM, e análise de células T_HGM diferenciadas. Esse método pode ser aplicado aos estudos do regulamento e função das células T_HGM.

Resumo

O fator de Granulócito-macrófago-colônia-estimulando (GM-CSF)-produzir células de T auxiliar (T_HGM) é um subconjunto de célula auxiliar de T recentemente identificado que predominantemente segrega GM-CSF, sem produzir o interferon (IFN)-γ ou interleucina (IL) -17 e encontra-se a desempenham um papel essencial no neuroinflammation auto-imune. Um método de isolamento de células T CD4 + de ingênua de uma suspensão de célula única de splenocytes e geração de células T_HGM de células T CD4 + de ingênuo seria uma técnica útil no estudo da imunidade mediada por células T e doenças auto-imunes. Aqui nós descrevemos um método que diferencia as células T CD4 + de ingênuo rato em células T_HGM promovidas pela IL-7. O resultado da diferenciação foi avaliado pela análise da expressão de citocinas, usando técnicas diferentes, incluindo citocinas intracelulares mancha combinada com citometria de fluxo, um quantitativo em tempo real cadeia da polimerase (PCR), e ensaios imunoenzimático (ELISA). Usando o protocolo de diferenciação T_HGM conforme descrito aqui, cerca de 55% das células expressa GM-CSF, com uma expressão mínima de IFNα ou IL-17. A expressão predominante de GM-CSF pelas células T_HGM foi confirmada pela análise da expressão de IFNα, GM-CSF e IL-17 a nível do mRNA e proteínas. Assim, este método pode ser usado para diferenciar ingênuo células T CD4 + T_HGM em vitro, células que serão úteis no estudo da biologia de pilha de T_HGM.

Introdução

Células de CD4 + T auxiliar (T_H) são componentes essenciais do sistema imunológico, tendo papéis cruciais na defesa do hospedeiro contra patógenos microbianos, na vigilância do câncer e em auto-imunidade¹^,²^,³. Após a ativação do receptor (TCR) de células T, células T CD4 + de ingênuo podem ser diferenciadas em T_H1, T_H2, T_H 17, ou regulamentar T (Treg) as células sob a influência de diferentes citocinas www.UniEthos.org.br²^,⁴^, ⁵. recentement....