Coloração imuno-histoquímica fluorescente multiplexada, imagem e análise de amostras histológicas de linfoma

Guo Hong; Shuangyi Fan; The Phyu; Priyanka Maheshwari; Michal Marek Hoppe; Hoang Mai Phuong; Sanjay de Mel; Michelle Poon; Siok-Bian Ng; Anand D. Jeyasekharan

doi:10.3791/58711

Artigo de método

Coloração imuno-histoquímica fluorescente multiplexada, imagem e análise de amostras histológicas de linfoma

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DOI:

10.3791/58711

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9 de janeiro de 2019

Guo Hong^*¹^,² , Shuangyi Fan^*³ , The Phyu³ , Priyanka Maheshwari² , Michal Marek Hoppe² , Hoang Mai Phuong² , Sanjay de Mel⁴ , Michelle Poon⁴ , Siok-Bian Ng²^,³ , Anand D. Jeyasekharan²^,⁴

¹Department of Laboratory Medicine, AnSteel Group General Hospital, ²Cancer Science Institute of Singapore, National University of Singapore, ³Department of Pathology, Yong Loo Lin School of Medicine, National University of Singapore, ⁴Department of Haematology-Oncology, National University Health System

^* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Aqui descrevemos um protocolo para multiplex immunohistochemical fluorescente de coloração e de imagem para localização simultânea de múltiplos antígenos associada a câncer de linfoma. Este protocolo pode ser estendido para a análise de colocalization de biomarcadores dentro de todas as secções de tecido.

Resumo

Métodos de imuno-histoquímica (IHC) para a análise in situ da expressão da proteína por microscopia de luz são uma ferramenta poderosa para fins de diagnóstico e pesquisa. No entanto, a visualização e a quantificação de vários antígenos em uma seção de tecido único usando IHC cromogênico convencional é um desafio. Imagem multiplexada é especialmente relevante na investigação de linfoma e diagnósticos, onde marcadores tem que ser interpretada no contexto de um microambiente do tumor complexo. Aqui descrevemos um protocolo para multiplexado IHC fluorescente coloração para permitir a avaliação quantitativa de alvos múltiplos em tipos de células específicas de interesse do linfoma. O método abrange os aspectos de validação de anticorpo, otimização de anticorpo, a otimização multiplex com marcadores de subtipos de linfoma, a coloração de lâminas de tecido microarray (TMA) e a digitalização de slides, seguido de análise de dados, com específicas referência para o linfoma. Usando esse método, partituras para ambos a intensidade média de um marcador de interesse e a percentagem de positividade são geradas para facilitar ainda mais a análise quantitativa. Multiplexação minimiza a utilização da amostra e fornece informação espacial para cada marcador de interesse.

Introdução

Neoplasias linfoides são causadas pela proliferação descontrolada de linfócitos maligna. Estas células são componentes vitais do sistema imunológico e localizar nos órgãos imunes primárias e secundárias, tais como a medula óssea, linfonodos, baço e outro sistema linfoide associado a mucosa. Neoplasias linfoides são um grupo heterogêneo de desordens que são classificados com base em uma constelação de características, incluindo morfologia, imunofenótipo, apresentação clínica e características genéticas. Enquanto cada parâmetro desempenha um papel, linhagem continua a ser uma característica definidora e constitui a base para o sistema de classificação do WHO que reconhe....