Este protocolo descreve a produção de filamento policaprolactona (PCL) com microesferas de (PLA) de ácido polilático incorporado que contêm matrizes decellularized (DM) para impressão 3D estruturais de engenharia de tecidos construções.
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Artigo de método
Este protocolo descreve a produção de filamento policaprolactona (PCL) com microesferas de (PLA) de ácido polilático incorporado que contêm matrizes decellularized (DM) para impressão 3D estruturais de engenharia de tecidos construções.
Bioprinting 3D visa criar andaimes personalizados que são biologicamente ativos e acomodar o tamanho desejado e geometria. Um backbone de termoplástico pode fornecer estabilidade mecânica semelhante ao tecido nativo enquanto agentes biológicos oferecem pistas composicionais de células progenitoras, levando a sua migração, proliferação e diferenciação para reconstituir os tecidos originais / órgãos1,2. Infelizmente, muitos compatível com impressão 3D, polímeros biorreabsorvível (tais como o ácido polilático, PLA) são impressas em temperaturas de 210 ° C ou superior - temperaturas que são prejudiciais para produtos biológicos. Por outro lado, policaprolactona (PCL), um tipo diferente de poliéster, é uma matriz, material para impressão 3D que tem uma temperatura de impressão mais suave de 65 ° C. Portanto, foi hipotetisado que decellularized da matriz extracelular (DM) contido dentro de uma barreira PLA termicamente protetora poderia ser impresso dentro do filamento PCL e permanecem na sua conformação funcional. Neste trabalho, osteocondrais reparação foi a aplicação para a qual foi testada a hipótese. Como tal, cartilagem porcina foi decellularized e encapsulada em ácido polilático (PLA) microesferas que então foram extrudadas com policaprolactona (PCL) em filamento para produzir construções 3D através de fundidos modelagem de deposição. As construções com ou sem as microesferas (PLA-DM/PCL e PCL(-), respectivamente) foram avaliados para diferenças nas características da superfície.
Técnicas de engenharia de tecido atual para aplicações clínicas tais como reconstrução de osso, cartilagem, tendão e ligamento usam autoe aloenxertos para reparar tecidos danificados. Cada uma dessas técnicas é de executada rotineiramente como um "padrão ouro" na prática clínica, pela primeira colheita do tecido do doador do paciente ou uma partida de fetos morta e em seguida, colocando o tecido do doador para o local do defeito2. No entanto, estas estratégias são limitadas pela morbidade local doador escassez local doador para grandes defeitos, risco de infecção e a dificuldade em encontrar enxertos que correspondem a geometria desejada. Além ....
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1. obtenção e pré-processamento de microesferas
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Depois de peneirar, microesferas devem aparecer uniformes e ser livre de agregados. Sob SEM, as microesferas peneiradas podem ter pequenos poros em sua superfície, mas caso contrário vão ser esférica e Lisa, como mostrado na Figura 1. Todos os filamentos extrudados devem ser de diâmetro uniforme e seção transversal circular. Um filamento que contém microesferas (PLA-DM/PCL) terá um ligeiramente mais fosco terminar enquanto um PCL-only (filamento PCL(-)) ficar.......
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Ambos decellularized matrizes e 3D impresso PCL andaimes independentemente foram mostrados para permitir a adesão e proliferação de células, validando seu uso para osteocondrais reparar10,11,12. O uso da matriz decellularized em abordagens de engenharia para reparação tecidual tem sido um assunto de muito interesse e sucesso no recente passado2,3,
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Os autores não têm nada para divulgar.
Este projeto foi parcialmente financiado por um subsídio do pediátrico ortopédico sociedade da América do Norte (POSNA) e o National Institutes of Health conceder NIBIB R21EB025378-01 (bolsa de pesquisa exploratória bioengenharia).
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Máquina de peneira | Haver & Boecker Tyler | Ro-Tap RX 29-E Peneira Pura | |
| 90 um | Fisherbrand | 170328156 | No. 170 |
| Peneira 53 um | Fisherbrand | 162513588 | No. 270 |
| Peneira 106 um | Fisherbrand | 162018121 | No. 140 |
| Revestidor por pulverização catódica | Leica | n/a | |
| Microscópio Eletrônico de Varredura | Hitachi, EUA | n/a | |
| Filabot EX2 | Filabot.com | FB00061 | |
| Filabot Spooler | Filabot.com | FB00073 | |
| CAPA 6506 | Perstorp | 24980-41-4 | |
| Solução salina tamponada com fosfato, PBS | Gibco | 10010023 | |
| Comfort Zone | de 6", | n/a | |
| Banho de água ultrassônico | Cole Parmer | SK-08895-13 | |
| Dreamer | FlashForge | n/a | |
| Mixer de Bateria | Feito sob medida | n/a | Equipamento similar: https://www.coleparmer.com/i/argos-technologies-flexiroll-digital-tube-roller-shaker-120-vac/0439744?PubID=UX&persist=true&ip= no& gclid=CjwKCAjw- dXaBRAEEiwAbwCi5khGDMz0 dTjsraEsBGfhMEH7ytx LQWGUPNgUJYQ1p3vj_yxkYoI_ ixoC9GwQAvD_BwE |
| Micro Balance | Mettler Toledo, Fisher Scientific | 01-913-851 | |
| Simplify3D | Simplify3D | n/a | |
| SolidWorks | SolidWorks | n/a | |
| Microesferas | Produzido internamente, veja simultaneamente submissão JoVE submissão | ||
| p-nitrofenil fosfato, sal dissódico, hexahidrato | Millipore | 4876-5GM | |
| Fosfatase, alcalina | Roche Diagnostics GmbH | 10 713 023 001 | |
| Leitor de Absorbância | Tecan | Sunrise | |
| Tris-HCl Buffer | Sigma-Aldrich | T6455-100ML | |
| Agitador aquecido | Novo Brunswick Scientific | Excella E24 |
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