Um novo portátil em Vitro Cassette exposição para amostragem de aerossol

Resumo

Aqui, apresentamos um protocolo para realizar exposições de aerossol de celular portátil e medir a resposta celular. O método utiliza células, crescidas na interface ar-líquido, imitando a fisiologia na vivo . Observou-se resposta celular de aerossóis de nanopartículas de cobre como estresse oxidativo através da geração de espécies reativas de oxigênio e citotoxicidade como liberação de lactato desidrogenase.

Resumo

Este protocolo introduz um novo em vitro sistema de exposição, capaz de ser usado, incluindo sua caracterização e desempenho. Sistemas de interface ar-líquido (ALI) em vitro exposição são frequentemente grandes e volumosas, tornando o transporte para o campo e a operação na fonte de emissão ou dentro da zona de respiração difícil. Através da miniaturização destes sistemas, o laboratório pode ser trazido para o campo, acelerando o tempo de processamento e fornecendo um método de exposição mais apropriado que não altera o aerossol antes de entrar em contato com as células. O portátil em vitro exposição Cassette (PIVEC) adapta-se uma fita de filtro de 37 mm para permitir a toxicidade em vitro testes fora de um ambiente de laboratório tradicional. O PIVEC foi caracterizado usando três tamanhos de nanopartículas de cobre para determinar a eficiência de deposição, com base em gravimétrica e análise de concentração número de partícula. Foram realizados experimentos de citotoxicidade inicial com células de pulmão exposto para determinar a capacidade do sistema de depósito de partículas, mantendo a viabilidade celular. O PIVEC fornece uma eficiência de deposição semelhante ou maior quando comparados aos dispositivos de fluxo perpendicular disponível em vitro exposição. Apesar da taxa de transferência de amostra menor, o tamanho pequeno dá algumas vantagens para o atual em vitro ALI sistemas de exposição. Estes incluem a capacidade de ser usado para monitoramento pessoal, custam de vários sistemas de resolução espacial, mantendo um usuário menor mobilidade do laboratório para a fonte de emissão e a opção de set-up. O PIVEC é um sistema capaz de coletar aerossóis no campo e dentro da zona de respiração em um modelo de ar-interfaceado, in vitro .

Introdução

Amostragem pessoal, usando técnicas em vitro pode fornecer informações abrangentes sobre os efeitos biológicos de aerossóis no ambiente de trabalho. ¹ exposição a contaminantes no ar incluem exposições para o produto químico em si, para as amostras de ar coletadas, sob condições submersas, onde o gás é introduzido à suspensão de células, as exposições intermitentes usando um dispositivo como um roqueiro, directa ou exposições na interface ar-líquido (ALI). ² muitas dessas técnicas são realizadas com células cultivadas em suspensão ou a coleta de amostras antes da exposição, cada um deles pode afetar o estudo tox....

Protocolo

Os operadores devem usar equipamento de proteção pessoal (por exemplo, jaleco, luvas, óculos de proteção) quando executar etapas 1, 2, 3, 5 e 6.

1. preparação de materiais

1. Prepare materiais para a montagem do sistema e exposição garantir repetibilidade.
   1. Certifique-se de nova utilização ou etanol a 70% limpo ¼" diâmetro interno condutiva e tubo de ¼" diâmetro exterior conectores para a montagem do sistema.
   2. Loja de materiais de teste incluindo filtros, componentes PIVEC, pinças e pós de partículas em um ambiente bem controlado, com relação a temperatura e umidade, pelo menos 24 h antes do exper....

Resultados

Toxicologia Ocupacional em vitro envolve a manutenção da viabilidade celular durante a realização de exposição de aerossol. O sistema PIVEC é mostrado na Figura 2, incluindo a temperatura e controle de umidade e o PIVEC desgastado. A temperatura foi mantida usando um aquecedor resistivo pilhas e o aerossol humedecido utilizando aumentou umidificação natural através de um tubo poroso, molhada. Em um aerossol controlado configuração dentro de um labora.......

Discussão

Fitas de filtro fornecem um método simples, barato, de coleta de aerossóis na zona de respiração; no entanto, amostras de aerossol extraídas de filtros não representam o aerossol inteiro (ou seja, gases voláteis e partículas) e, consequentemente, limitar a avaliação dos efeitos biológicos relacionados. Usando o projeto inicial da fita de filtro de 37 mm, o PIVEC é projetado para manter a portabilidade e imitar a deposição na vivo de partículas de inalação. O PIVEC é significativamente menor do que os atuais sist.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Medidor de partículas de mobilidade de varredura (SMPS)	TSI, Inc.	3910	NanoSMPS
Medidor óptico de partículas (OPS)	TSI, Inc.	3330
, 4" de comprimento	McMaster-Carr	4830K116	Parede padrão 304/304L, rosqueado em ambas as extremidades, Válvula de esfera de latão de 1/8 de tamanho de tubo
com alça de alavanca	McMaster-Carr	4112T12	Compact High-Pressure Rating, 1/8 NPT Female
Steel Pipe, 2" Long	McMaster-Carr	7753K121	Standard Wall, rosqueado em uma extremidade, 1/8 de tamanho de tubo
HEPA filtro	GE Healthcare	09-744-12	HEPA-Cap Cápsula de Filtração de Ar Descartável Gerador
de Vácuo	PISCO USA	VCH10-018C
PIVEC	VCU		Para design, entre em contato com os autores
Aquecedor
1/4" conectores farpados	Zefon International, Inc.
Tubos porosos	Scientific Commodities, Inc.	BB2062-1814A	Hidrofílico 10 umes poros
Bateria banco de
Inserção de cultura de células	Fisherbrand	353095	24 bem inserção de placa
Pinça de filtro	Fisherbrand	09-753-50
Pipeta de transferência	ThermoScientific	13-711-27
Filtros de fibra de vidro	SKC	225-7	Tipo sem aglutinante Filtro AE 37 MM 1,00 um poro
Ultra Micro Balance	A& D	BM-22	Alojado em câmara ambiental
de filtro de 37 mm	SKC	225-3250	de filtro em branco, 37 mm, Bomba
de vácuo de fluxo variável	SKC	220-5000TC	AirChek TOUCH, 5 a 5000 mL/min
Partículas de cobre	U.S. Research Materials, Inc.	US1090	40 nm
Partículas de Cobre	U.S. Research Materials, Inc.	US1088	de 100 nm
	Materiais de pesquisa dos EUA, Inc.	US1117M	800 nm

Tubo de aço inoxidável resistivo459743potência de estireno transparente Partículas de cobre