Aqui nós apresentamos um método reprodutível para desenvolver um modelo murino ortotópico de cabeça e pescoço carcinoma de células escamosas. Tumores demonstram clinicamente relevantes características histopatológicas da doença, incluindo necrose, pobre diferenciação, metástases nodais e infiltração imune. Tumor-rolamento ratos desenvolvem sintomas clinicamente relevantes, incluindo disfagia, deslocamento da mandíbula e perda de peso.
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Artigo de método
Intramucosal inoculação de células de Carcinoma de células escamosas em ratos para perfil imune de Tumor e tratamento avaliação de resposta
Neste artigo
Resumo
Resumo
Cabeça e pescoço carcinoma de células escamosas (HNSCC) é uma doença debilitante e mortal com uma elevada prevalência de recidiva e falha do tratamento. Para desenvolver melhor estratégias terapêuticas, compreensão tumor microenvironmental fatores que contribuem para a resistência de tratamento é importante. Um impedimento importante para compreender os mecanismos da doença e melhorar a terapia tem sido a falta de linhas de celulares murino que se assemelham a natureza agressiva e metastática da HNSCCs humanas. Além disso, a maioria dos modelos murino empregar implantes subcutâneos de tumores que não possuem características fisiológicas importantes da região da cabeça e pescoço, incluindo alta densidade vascular e extensa vascularização linfática residente flora da mucosa. O objetivo deste estudo é desenvolver e caracterizar um modelo ortotópico de HNSCC. Nós empregamos duas linhas de células geneticamente distintas de murino e tumores estabelecidas na mucosa bucal de ratos. Otimizamos a métodos de digestão tumor colagenase-baseado para a recuperação ideal de células únicas de tumores estabelecidas. Os dados aqui apresentados mostram que ratos desenvolvem tumores altamente vascularizados que metastatizam para linfonodos regionais. Análise de citometria de massa Multiparamétrico monocelulares mostra a presença de diversas populações imunes com células mieloides, que representa a maioria de todas as células do sistema imunológico. O modelo proposto neste estudo tem aplicações em biologia do câncer, imunologia de tumor e desenvolvimento pré-clínico da novela terapêutica. A semelhança do modelo ortotópico para características clínicas da doença humana irá fornecer uma ferramenta para tradução melhorada e melhorou os resultados dos pacientes.
Introdução
HNSCC é a quinto mais comum malignidade globalmente, com mais de 600.000 pacientes diagnosticados anualmente1. Apesar do tratamento agressivo, envolvendo quimioterapia e radioterapia (RT), a taxa global de sobrevivência (OS) para pacientes com HNSCC sem infecção pelo papilomavírus humano (HPV) continua a ser inferior a 50% após 5 anos2. Isto é atribuído em grande parte para um microambiente do tumor altamente complexo como tumores podem se originar de vários sítios anatômicos distintos dentro da região de cabeça e pescoço, incluindo a mucosa bucal, língua, assoalho da boca, cavidade nasal, cavidade oral, faringe, orofari....
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Protocolo
Todos os procedimentos de animais foram efectuados de acordo com um institucional animal cuidados e uso Comité (IACUC) protocolo aprovado da Universidade de Colorado Denver (protocolo # 00250).
1. cultura de células de tumor
Nota: Linhas de células B4B8 e LY2 foram usadas para gerar tumores HNSCC ortotópico: B4B8 células de tumor foram derivadas de queratinócitos da mucosa cancerígena-transformadas (a partir de camundongos BALB/C)11. As células do tumor LY2 foram derivadas do linfonodo metástase de um queratinócito BALB/C espontaneamente transformado linha (Pam 212)
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Resultados
A avaliação in vitro da proliferação celular de LY2 e B4B8 mostrou que ambas as linhas de célula têm tempos de duplicação similares (21h e 23h, respectivamente). In vivo, ambas as linhas de célula formaram uma massa única, visível e palpável dentro de 1 semana de inoculação (figura 1A). Em camundongos com tumores LY2, o maxilar foi deslocado por 3 semanas devido a carga do tumor (figura 1A). Ratos de controle que não recebeu célu.......
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Discussão
Uma análise rigorosa e caracterização do microambiente do tumor representam uma importante estratégia para os mecanismos de compreensão do desenvolvimento do tumor, progressão e metástases e para o desenvolvimento de terapias eficazes. Câncer de cabeça e pescoço é uma doença complexa que pode originar-se de vários locais anatômicos dentro da região de cabeça e pescoço. Um impedimento importante para compreender os mecanismos da doença e melhorar a terapia tem sido a falta de linhas de células de rato murino que se asseme.......
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Divulgações
Os autores não têm nada para divulgar.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Colagenase III | Worthington Biochemical Corp. | ||
| DNase I | Worthington Biochemical Corp. | ||
| Bloco Fc (CD16/32) | BD Biosciences | 553141 | Clone 2.4G2 |
| Tampão de Coloração por Citometria de Fluxo | eBioscience | 00-4222-26 | |
| HBSS | ThermoFisher Scientific | 14175079 | sem cálcio, sem magnésio, sem feno vermelho |
| Helois citômetro de massa | Fluidigm | NA | |
| Matriz de membrana | Matrigel Corning | CB-40234B | |
| Scanner de ressonância magnética | Bruker | NA | 7.4 Tesla |
| RBC tampão de lise | BioLegend | 420301 | |
| inibidor de tripsina | Worthington Biochemical Corp. |
Referências
- Chaturvedi, A. K., et al. Worldwide trends in incidence rates for oral cavity and oropharyngeal cancers. Journal of Clinical Oncology. 31 (36), 4550-4559 (2013).
- Ang, K. K., Sturgis, E. M.
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Reimpressões e permissões
