Method Article

Aquisição e análise de dados na audiometria de resposta evocada de tronco encefálico em camundongos

DOI:

10.3791/59200

⸱

May 10th, 2019

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1Experimental Neuropsychopharmacology, Federal Institute for Drugs and Medical Devices, 2KBRwyle GmbH, 3Cognitive Neurophysiology, Department of Psychiatry and Psychotherapy, Faculty of Medicine, University of Cologne, 4Molecular and Cellular Cognition, German Center for Neurodegenerative Diseases (DZNE), 5Institute of Neurophysiology, Faculty of Medicine, University of Cologne, 6Federal Institute for Drugs and Medical Devices (BfArM), 7Thescon GmbH

In This Article

Summary

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A audiometria evocada da resposta do brainstem é uma ferramenta importante na neurofisiologia clínica. Atualmente, a audiometria de resposta evocada do tronco encefálico também é aplicada na ciência básica e nos estudos pré-clínicos envolvendo modelos animais farmacológicos e genéticos. Aqui nós fornecemos uma descrição detalhada de como as respostas auditivas do tronco encefálico podem com sucesso ser gravadas e analisadas nos ratos.

Abstract

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A audiometria evocada da resposta do brainstem (BERA) é da relevância central na neurofisiologia clínica. Como outras técnicas de potencial evocado (EP), tais como potenciais evocados visualmente (VEPs) ou potenciais evocados somatossensoriais (SEPs), os potenciais evocado auditivos (AEPs) são desencadeados pela apresentação repetitiva de estímulos idênticos, o a resposta electroencephalographic (EEG) de que é calculada subseqüentemente a média tendo por resultado as deflexões positivas (p) e negativas (n) distintas. Nos seres humanos, tanto a amplitude quanto a latência de picos individuais podem ser utilizadas para caracterizar alterações na velocidade de sincronização e condução nos circuitries neuronais subjacentes. É importante ressaltar que os AEPs também são aplicados na ciência básica e pré-clínica para identificar e caracterizar a função auditiva em modelos animais farmacológicos e genéticos. Ainda mais, modelos animais em combinação com testes farmacológicos são utilizados para investigar possíveis benefícios no tratamento da perda auditiva neurossensorial (por exemplo, déficits auditivos induzidos por idade ou ruído). Aqui nós fornecemos uma descrição detalhada e Integrativa de como gravar auditivo brainstem-evocado respostas (ABRs) em camundongos usando clique e Tone-Burst aplicação. Um foco específico deste protocolo está em habitação animal pré-experimental, anestesia, gravação ABR, processos de filtragem de ABR, análise de função de crescimento de amplitude baseada em wavelet automatizada e detecção de latência.

Introduction

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Um aspecto central da fisiologia cerebral é sua capacidade de processar informações ambientais, resultando em diferentes saídas intrínsecas ou extrínsecos, como aprendizado, memória, reações emocionais ou respostas motoricas. Várias abordagens experimentais e diagnósticas podem ser usadas para caracterizar a responsividade eletrofisiológica de tipos de células neuronais individuais ou clusters/conjuntos de neurônios dentro de um circuito neuronal relacionado a estímulos. Essas técnicas eletrofisiológicas abrangem diferentes dimensões espaço-temporais no micro, meso-e macrosescala1. O nível da microescala inclui a tensão e as aproximações atuais....

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Protocol

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Todos os procedimentos animais foram realizados de acordo com as orientações do Conselho alemão de cuidados com os animais e todos os protocolos foram aprovados pela Comissão institucional e nacional de cuidados com os animais (Landesamt für Natur, Umwelt, und Verbraucherschutz, State Escritório de Renânia do Norte-Vestfália, departamento de natureza, meio ambiente e consumismo [LANUV NRW], Alemanha). Os autores certificam ainda que toda a experimentação animal foi realizada de acordo com o guia nacional de institutos de saúde para o cuidado e uso de animais de laboratório (NIH publications no. 80-23) revisado 1996 ou o Reino Unido animais (procedimentos científicos) ....

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Results

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As gravações de ABR evocadas por estouro de clique e Tom podem ser usadas para avaliar diferenças de limiar auditivo, função de crescimento de amplitude e comparação de latência. Os ABRs Click-evoked no modo crescente SPL são representados na Figura 1 para controles e duas linhas de mouse exemplares mutantes que são deficientes para o cav3,2 T-tipo tensão-gated CA2 + Channel (i.e., CAv3,2+/- e CA v3,2 mut.......

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Discussion

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Este protocolo fornece uma descrição detalhada e Integrativa de como gravar respostas evocadas auditivas do tronco encefálico nos ratos. Coloca o foco específico no pré-tratamento animal, na anestesia, e em fatores de confundimento metodológicos potenciais. Estes últimos incluem, entre outros, sexo, linha do mouse, idade e condições de moradia. Deve-se notar que todos esses fatores podem ter impacto na perda auditiva neurossensorial e aspectos fundamentais do processamento da informação auditiva. Assim, a estratificação .......

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Disclosures

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Os autores não têm nada a revelar.

Acknowledgements

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Os autores gostariam de agradecer ao Dr. Christina Kolb (centro alemão de doenças neurodegenerativas [DZNE]) e ao Dr. Robert Stark (DZNE) por sua assistência na criação de animais e na assistência à saúde animal. Este trabalho foi apoiado financeiramente pelo Instituto Federal de medicamentos e dispositivos médicos (Bundesinstitut für Arzneimittel und Medizinprodukte, BfArM, Bonn, Alemanha).

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Software AEP/OAE para RZ6 (software BioSigRZ)Tucker-Davis Technologies (TDT)BioSigRZ
Zeiss Stemi 20000000001003877, 4355400000000, 0000001063306, 4170530000000, 4170959255000, 4551820000000, 4170959040000, 4170959050000
Cages (Macrolon)Techniplast1264C, 1290D
Carprox vet, 50mg/ mlVirbac Tierarzneimittel GmbHPZN 11149509
Fonte de luz friaSchott KL2500 LCD9.705 202
Aplicadores de ponta de algodão (estéreis)Carl RothEH12.1
Gaiola de Faraday de metal de malha personalizada (aço inoxidável, 2 mm de espessura, tamanho de malha de 1 cm)5feito sob medida
(creme para olhos e nariz Bepanthen)Bayer Vital GmbHPZN: 01578681
Eletrodos de agulha
subdérmicos descartáveis de aço inoxidável, 27GA, 12mm		Rochester Electro-Medical, Inc.S03366-18
Folhas de cortina cirúrgica (estéreis)HartmannPZN 0366787
Etanol, 70%Carl Roth9065.5
1/4 '' Kit de microfone de calibração de medição de campo livreTucker-Davis Technologies (TDT)Luvas PCB-378C0
(estéreis)Unigloves1570
Graefe Fórceps curvo, serrilhadoFST11052-10
Software GraphPad Prism 6, V6.07GraphPad Prism Software, Inc.https://www.graphpad.com/
Esterilizador de instrumentos cirúrgicos à base de calorFST18000-50
Homeotérmico
aquecimento em branco		ThermoLux461265 / -67
Ketanest S (Cetamina), 25mg/mlPfizerPZN 08707288
Ringer' s solução (estéril)B.BraunPZN 01471434
software MatlabMathWorks, Inc.
Medusa 4-Channel Low Impedido. HeadstageTucker-Davis Technologies (TDT)RA4LI
Medusa 4-Channel Pre-Amp/DigitizerTucker-Davis Technologies (TDT)RA4PA
MicrofonePCB Pieztronics378C01
Multi Field Speaker- StereoTucker-Davis Technologies (TDT)MF1-S
OsciloscópioTektronixDPO3012
Placa expressa PC1 óptica para interface Optibit)Sistemas Tucker-Davis (TDT)Almofadas PO5e
Askina Braucel (almofadas de absorção de celulose)B.BraunPZN 8473637
Pré-amplificadorPCB Pieztronics480C02
RZ6 Sistema de processador de E/S múltipla (BioSigRZ)Tucker-Davis Technologies (TDT)RZ6-A-PI
0,9% de solução salina (NaCl, estéril)B. Software8609255
Tucker-Davis Technologies (TDT)https://www.tdt.com/R
(versão 3.2.1) + Reshape 2 (versão 1.4.1) + ggplot 2 (versão 1.0.1) + datatable (versão 1.9.4), + gdata (versão 2.13.3), + pastecs (versão 1.3.18), + waveslim (versão 1.7.5), + MassSpecWavelet (versão 1.30.0)The R Foundation, R Core Team 2015Open Source Software (distribuível gratuitamente)
Cubículo de atenuação de somMed Associates Inc.ENV-018V
Pinça de padrão padrão, 12cm e 14,5 cm de comprimentoFST11000-12, 11000-14
Fita de LeukosilkBSN medical GmbH & Co. KGPZN 00397109
Pinça de tecido - 1x2 Dentes 12 cmFST11021-12
Armário ventilado UniprotectBioscapeTHF3378
Armário ventiladoTecniplast9AV125P
xilazina (Rompun), 2%Bayer Vital GmbHPZN 1320422
Microscópio de ampliação cirúrgica binocular Dexpantenol % https://de.mathworks.com/products/matlab.html Software

References

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  1. Sporns, O., Tononi, G., Kotter, R. The human connectome: A structural description of the human brain. PLOS Computational Biology. 1 (4), e42(2005).
  2. Bebarova, M. Advances in patch clamp technique: towards higher quality and quantity. Ge....

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Auditory Brainstem ResponseBrainstem Evoked Response AudiometryClick Tone Burst StimulationAutomated Wavelet AnalysisABR Threshold DetectionABR Latency AnalysisMouse Auditory ProfilingSound Attenuating CubicleSubdermal Electrode PlacementPre amplifier Calibration

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