Visualização do sulco Superior Ocular durante a embriogênese Danio rerio

Kevin  H. Yoon; Sonya  A. Widen; Melissa  M. Wilson; Jennifer  C. Hocking; Andrew  J. Waskiewicz

doi:10.3791/59259

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Artigo de método

Visualização do sulco Superior Ocular durante a embriogênese Danio rerio

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DOI:

10.3791/59259

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27 de março de 2019

Kevin H. Yoon¹ , Sonya A. Widen¹^,² , Melissa M. Wilson¹ , Jennifer C. Hocking²^,³^,⁴^,⁵ , Andrew J. Waskiewicz¹^,²^,⁶

¹Department of Biological Sciences, University of Alberta, ²Women & Children's Health Research Institute, University of Alberta, ³Division of Anatomy, Department of Surgery, University of Alberta, ⁴Department of Cell Biology, University of Alberta, ⁵Department of Medical Genetics, University of Alberta, ⁶Neuroscience and Mental Health Research Institute, University of Alberta

Neste artigo

Resumo

Aqui, apresentamos uma série padronizada de protocolos para observar o sulco superior e ocular, uma estrutura recentemente identificada, conservado evolutivamente no olho vertebrado. Usando zebrafish larvas, demonstraremos técnicas necessárias para identificar os fatores que contribuem para a formação e o fechamento do sulco superior ocular.

Resumo

Coloboma ocular congênita é uma desordem genética que normalmente é observada como uma fissura no aspecto inferior do olho resultantes de fechamento da fissura coroide incompleta. Recentemente, a identificação de indivíduos com coloboma no aspecto superior da íris, retina e lente levado à descoberta de uma estrutura nova, conhecido como a fissura superior ou superior sulco ocular (SOS), que está presente transitoriamente na dorsal aspecto da Taça óptica durante o desenvolvimento do olho de vertebrados. Embora esta estrutura é conservada em ratos, garota, peixe e Tritão, nossa compreensão atual do SOS é limitado. A fim de elucidar os fatores que contribuem para sua formação e o encerramento, é imperativo para poder observá-lo e identificar anormalidades, tais como atraso no fechamento do SOS. Aqui, nos propusemos a criar uma série padronizada de protocolos que podem ser usados para visualizar eficientemente o SOS combinando técnicas de microscopia amplamente disponível com técnicas de biologia molecular comuns como coloração imunofluorescente e mRNA superexpressão. Enquanto este conjunto de protocolos enfoca a capacidade de observar o atraso de fechamento de SOS, é adaptável às necessidades do experimentador e pode ser facilmente modificado. Em geral, esperamos criar um método acessível através do qual a nossa compreensão do SOS pode ser avançado para expandir o conhecimento atual do desenvolvimento do olho de vertebrados.

Introdução

A formação do olho de vertebrados é um processo altamente conservado em que vias de sinalização intercelulares cuidadosamente orquestradas estabelecer tipos de tecido em especificam a identidade regional¹. Perturbações de início morfogênese olho resultam em defeitos profundos para a arquitetura do olho e são frequentemente cegueira². Uma tal doença resulta do não-fechamento da fissura coroide ocular no lado ventral da Taça óptica³. Esta doença, conhecida como coloboma ocular, estima-se que ocorrem em 1 a 4-5000 nascidos vivos e % de 3-11 causa de cegueira pediátrica, manifestando-se geralmente com....