Um modelo de camundongo de câncer hepatocelular induzido por hepatócitos oncogênico, decorrente do ajuste da inflamação e fibrose hepática

Resumo

Aqui, nós descrevemos o desenvolvimento de um modelo murino clìnica relevante do cancro do fígado que recapitulando as características imunes típicas do cancro hepatocelular (HCC).

Resumo

A ausência de um modelo animal clinicamente relevante abordando as características imunes típicas do câncer hepatocelular (HCC) tem impedido significativamente a elucidação dos mecanismos subjacentes e o desenvolvimento de estratégias imunoterapêuticas inovadoras. Para desenvolver um modelo animal ideal que recapitulando o HCC humano, os ratos masculinos imuno-competentes de C57Bl/6J recebem primeiramente uma injeção do tetracloreto de carbono (CCL₄) para induzir a fibrose do fígado, a seguir recebem hepatócitos oncogênico histològica-normais do macho novo Antígeno SV40 T (TAg)-camundongos transgênicos (MTD2) por inoculação intra-esplênica (ISPL). Andrógeno gerado em ratos machos receptores na puberdade inicia a expressão de TAg o controle de um promotor específico do fígado. Como resultado, os hepatócitos transferidos tornam-se células cancerosas e formam massas tumorais no cenário de fibrose hepática/cirrose. Este modelo novo imita a iniciação e a progressão humanas do HCC no contexto da fibrose/cirrose do fígado e reflete as características as mais típicas do HCC humano que inclui a deficiência orgânica imune.

Introdução

O câncer hepatocelular (HCC) é o tipo de câncer mais rapidamente crescente nos Estados Unidos (US)^1,2,3. Todos os anos, aproximadamente 850.000casos novos são diagnosticados^4,5 e 700.000 pacientes morrem desta doença letal^6,7,8,9,10 , tornando-se a segunda maior causa de morte relacionada ao câncer em todo o mundo. A gerência de HCC inclui o resection cirúr....

Protocolo

Nota: todo o procedimento, incluindo os sujeitos animais foram aprovados pelo IACUC na Universidade de Missouri. Todos os camundongos receberam cuidados humanitários de acordo com os critérios delineados no "guia para o cuidado e uso de animais de laboratório". O procedimento a seguir para isolamento e inoculação celular deve ser realizado em um capô. Todos os artistas devem usar o equipamento de proteção individual padrão para o manuseio dos camundongos e tecidos.

1. indução de fibrose hepática e cirrose com injeção de IP de tetracloreto de carbono (CCl₄)

Nota: consulte a Figura 1. (CCl....

Resultados

Hepatócitos oncogênicos isolados de camundongos TAg-transgênicos (Figura 2) foram semeados no fígado de camundongos tipo selvagem por injeção intraesplênica (Figura 3). Os hepatócitos transplantados com sucesso e de forma confiável cresceram tumores ortotópicos de HCC (Figura 4) com antígeno específico SV40 TAg do tumor (Figura 5) no cenário de inflamação e fibrose hepática (Figura 1).

Discussão

Com este protocolo, nós estabelecemos um modelo murino de confiança e reprodutível de HCC que imita a iniciação e a progressão humanas do HCC. Clinicamente, muitos fatores de risco induzem sucessivamente lesão hepática, fibrose hepática, cirrose e a fase final da HCC. Em nosso protocolo, a injeção do IP de CCL₄ é usada para produzir primeiramente a fibrose do fígado em ratos do tipo selvagem, que permite que os hepatócitos oncogênico subseqüentes Formem os tumores no ajuste da fibrose do fígado. Nós encontramo.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Máquina de anestesia	VETEQUIP	IMPAC6	máquina de anestesia para cirurgia
Agulha borboleta	BD	8122963	Agulha usada para perfusão hepática
Camundongos C57BL/6	Jackson Lab	000664	Camundongos usados no prototol
Carprofeno	CRESCENT CHEMICAL	20402	carprofeno para liberação de dor
Filtro de Células	CORNING	REF 431751	Filtro de células, 70µ m, para isolamento de hepatócitos
Centrífuga	Beckman Coulter	Allegra X-30R	para isolamento celular
Clips	Teleflex Medical	REF 523700	Clipes de titânio para microscópio de baço
	Zeiss	Primovert	microscópio para observação celular
Mtd2 camundongos	N / A		Presente do Dr. William A Realizado no Roswell Park Cancer Institute em 2002, mantido em nosso laboratório
Agulha	BD	REF 305109	BD agulha de deslizamento de precisão, 27G x 1/2 (0,4 mm x 13 mm)
Sutura	ETHICON	J303H	revestido com sutura VICRYL
SV40 T Ag anticorpo	Abcam	ab16879	anti-SV40 anti-SV40 anticorpo de antígeno T para
IHC Seringa	BD	REF 309626	Seringa TB de 1 mL para injeção celular
Azul de tripano	SIGMA	T 8154	Solução de azul de tripano para teste de viabilidade celular
Clipes de ferida		Reflexo de reflexo9, Part. No. 201-1000	clipes de ferida de aço inoxidável para fechamento de ferida