O protocolo descreve o uso de miografia de arame para avaliar a tensão isométrica transmural de artérias mesentéricas isoladas de camundongos, com especial consideração da modulação por fatores liberados das células endoteliais e dos tecidos adiposos perivasculares.
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Artigo de método
Avaliação da responsividade do tônus vascular usando artérias mesentéricas isoladas com foco na modulação por tecidos adiposos perivasculares
Neste artigo
Resumo
Resumo
A responsividade do tônus vascular alterada aos estímulos fisiopatológicos contribui para o desenvolvimento de uma ampla gama de doenças cardiovasculares e metabólicas. A disfunção endotelial representa um grande culpado para a redução da vasodilatação e aumento da vasoconstrição das artérias. Tecidos adiposo (gordura) que cercam as artérias desempenham papéis importantes na regulação do relaxamento dependente do endotélio e/ou contração das células musculares lisas vasculares. As conversações cruzadas entre o endotélio e os tecidos adiposos perivasculares podem ser avaliadas ex vivo usando vasos sanguíneos montados por um sistema de miografia de arame. No entanto, devem ser estabelecidas definições ideais para as artérias derivadas de animais de diferentes espécies, idades, origens genéticas e/ou condições fisiopatológicas.
Introdução
As dilatações e constrições das artérias são alcançadas por relaxações e contrações, respectivamente, de suas células musculares lisas vasculares. As alterações na responsividade vascular das pequenas artérias contribuem para a regulação homeostática da pressão arterial por nervos autonômicos e hormônios presentes no sangue (por exemplo, catecolaminas, angiotensina II, serotonina, vasopressina). No nível local, as respostas vasculares das células musculares lisas são moduladas por sinais de ambas as células endoteliais da íntima e do tecido adiposo em torno das artérias (Figura 1).
O endotélio não é apenas uma ....
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Protocolo
Todos os animais utilizados para o estudo a seguir foram fornecidos pela unidade de laboratório de animais da faculdade de medicina da Universidade de Hong Kong. A aprovação ética foi obtida do Comitê departamental de uso de animais de laboratório para ensino e pesquisa (CULATR, no.: 4085-16).
1. os preparativos
- Preparação de fármacos
- Armazene os medicamentos apropriadamente conforme indicado na ficha de dados de segurança de material (MSDS) imediatamente após recebê-los. Dissolver as drogas em pó em forma de solventes como soluções de alta concentração de ações e, em seguida, alíquota para armazenamento....
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Resultados
Exame das relações comprimento/tensão para obtenção do fator de normalização k
A quantidade de estiramento aplicada a um segmento do vaso influencia a extensão da interação da actina-miosina e, consequentemente, a força ativa máxima desenvolvida. Assim, para cada tipo de vaso sanguíneo, é necessário determinar a quantidade de estiramento necessária para a força ativa máxima para estudos de miografia ade.......
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Discussão
Aparte das pilhas endothelial, os sinais derivados do PVAT jogam um papel importante na regulação da reactividade do Tom de músculo liso30. O pvat saudável libera o não e o Adiponectina anti-inflammatory para exercer um efeito anticontractile nas artérias, que é perdida circunstâncias patológicas tais como a obesidade e a síndrome metabólica31,32. Nos Estados de doença, o pvat contribui para o desenvolvimento da disfunção endotelial e outr.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Este trabalho foi financeiramente apoio pelas subvenções do Conselho de subvenção de investigação de Hong Kong [17124718 e 17121714], Hong Kong Health and Medical Research Fund [13142651 e 13142641], fundo de investigação colaborativa de Hong Kong [C7055-14G], e o National Basic Programa de pesquisa da China [973 Program 2015CB553603].
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Acetilcolina | Sigma-Aldrich | A6625 | Concentração de estoque: 10-1 M Concentração de trabalho: 10-10 a 10-5 M |
| L-NAME (Nω-nitro-L-arginina metil éster) | Sigma-Aldrich | N5751 | Concentração de estoque: 3 x 10-2 M Concentração de trabalho: 10-4 M |
| Fenilefrina | Sigma-Aldrich | P6126 | Concentração de estoque: 10-2 M Concentração de trabalho: 10-10 a 10-5 |
| M U46619 (9,11-dideoxi-9&alfa;,11&alfa; metanoepoxi prostaglandina F2&alfa;) | Enzo | BML-PG023-0001 | Concentração de estoque: 10-5 M Concentração de trabalho: 1-3 x 10-8 M Miógrafo |
| multifios | dinamarquês MyoTechnology (DMT) | 620M | |
| PowerLab 4/26 | ADInstruments | ML848 | |
| Labchart7 | ADInstruments | - | |
| Adipo-SIRT1 camundongos do tipo selvagem | Unidade de Animais de Laboratório, Universidade de Hong Kong | CULATR NO.: 4085-16 | |
| Placas de Petri revestidas de silicone | MyoTechnology dinamarquês (DMT) | ||
| Fios de tungstênio | MyoTechnology dinamarquês (DMT) | 300331 | |
| Ferramentas |
Referências
- Furchgott, R. F., Zawadzki, J. V. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine. Nature. 288 (5789), 373-376 (1980).
- Furchgott, R. F., Vanhoutte, P. M. Endothelium-derived relaxing and contracting factors.....
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Reimpressões e permissões
