Isolamento de células mononucleares de lamina propria de cólon murino usando Collagenase E

Duneia McManus; Horacio  J. Novaira; Anouk  A.J. Hamers; Asha  B. Pillai

doi:10.3791/59821

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Artigo de método

Isolamento de células mononucleares de lamina propria de cólon murino usando Collagenase E

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DOI:

10.3791/59821

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26 de setembro de 2019

Duneia McManus¹^,²^,³^,⁴ , Horacio J. Novaira¹^,²^,³^,⁴ , Anouk A.J. Hamers¹^,²^,³^,⁴ , Asha B. Pillai¹^,²^,³^,⁴^,⁵

¹Department of Pediatrics, Division of Hematology / Oncology and Bone Marrow Transplantation, University of Miami Miller School of Medicine, ²Batchelor Children's Research Institute, University of Miami Miller School of Medicine, ³Department of Microbiology & Immunology, University of Miami Miller School of Medicine, ⁴Sylvester Comprehensive Cancer Center, University of Miami Miller School of Medicine, ⁵Holtz Children's Hospital, University of Miami Miller School of Medicine

Neste artigo

Resumo

O objetivo deste protocolo é isolar as células mononucleares que residem na lâmina própria do cólon por digestão enzimática do tecido usando Collagenase. Este protocolo permite a isolação eficiente de pilhas mononucleares tendo por resultado uma única suspensão da pilha que por sua vez possa ser usada para immunophenotyping robusto.

Resumo

O intestino é a casa para o maior número de células imunes no corpo. A exposição da polícia intestinal de pequenos e grandes sistemas imunológicos a antígenos exógenos e modulam respostas a potentes estímulos imunológicos derivados microbialmente. Por esta razão, o intestino é um local principal alvo de desregulação imune e inflamação em muitas doenças, incluindo mas, não limitado a doenças inflamatórias intestinais, como a doença de Crohn e colite ulcerosa, doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH) após o osso transplante de medula óssea (TMO) e muitas condições alérgicas e infecciosas. Os modelos murinos de inflamação e colite gastrintestinal são fortemente utilizados para estudar as complicações do GI e para otimizar as estratégias de prevenção e tratamento pré-clinicamente. Os dados recolhidos destes modelos através da isolação e da análise fenotípica de pilhas imunes do intestino são críticos para uma compreensão imune mais adicional que possa ser aplicada para amenizar desordens inflamatórios gastrintestinais e sistemáticas. Este relatório descreve um protocolo altamente eficaz para a isolação de pilhas mononucleares (MNC) dos dois pontos usando uma relação sílica-baseada misturada do inclinação da densidade. Este método isola revisivelmente um número significativo de leucócito viáveis ao minimizar contaminando restos, permitindo o fenótipo imune subseqüente pela citometria do fluxo ou pelos outros métodos.

Introdução

Embora o trato gastrointestinal (GI) é principalmente dedicado ao processamento e reabsorção de nutrientes de alimentos, o trato gastrointestinal também mantém papéis centrais na integridade dos sistemas vasculares, linfáticos e nervosos e de numerosos outros órgãos através seu sistema imunológico mucoso e submucoso¹. O sistema imunológico Gi tem um papel influente na saúde gastrointestinal e sistêmica, devido à sua exposição constante a antígenos estrangeiros de alimentos, bactérias comensais ou agentes invasores¹^,2. Assim, o sistema imunológico gastrointestinal deve manter um equilíbr....