Estabelecimento de modelos de xenoenxertos derivados de câncer gástrico e linhas celulares primárias

Resumo

O protocolo atual descreve métodos para estabelecer modelos paciente-derivados do xenograft (PDX) e linhas de célula cancerosas preliminares das amostras cirúrgicas do cancro gastric. Os métodos fornecem uma ferramenta útil para o desenvolvimento de drogas e pesquisa de biologia do câncer.

Resumo

O uso de modelos pré-clínicos para avançar nosso entendimento da biologia tumoral e investigar a eficácia dos agentes terapêuticos é fundamental para a pesquisa do câncer. Embora existam muitas linhas celulares de câncer gástrico estabelecidas e muitos modelos de camundongo transgênicos convencionais para pesquisas pré-clínicas, as desvantagens desses modelos in vitro e in vivo limitam suas aplicações. Porque as características destes modelos mudaram na cultura, não mais modelo a heterogeneidade do tumor, e suas respostas não puderam prever respostas nos seres humanos. Assim, modelos alternativos que melhor representem a heterogeneidade tumoral estão sendo desenvolvidos. Os modelos paciente-derivados do xenograft (PDX) preservam a aparência histologic de pilhas de cancro, mantêm a heterogeneidade intratumoral, e refletem melhor os componentes humanos relevantes do microambiente do tumor. Entretanto, toma geralmente 4-8 meses para desenvolver um modelo de PDX, que seja mais longo do que a sobrevivência esperada de muitos pacientes gastric. Por esta razão, estabelecer linhas de células cancerosas primárias pode ser um método complementar eficaz para estudos de resposta a medicamentos. O protocolo atual descreve métodos para estabelecer modelos de PDX e linhas de célula cancerosas preliminares das amostras cirúrgicas do cancro gastric. Esses métodos fornecem uma ferramenta útil para o desenvolvimento de drogas e pesquisa de biologia do câncer.

Introdução

O câncer gástrico é o quinto câncer mais comum em todo o mundo e a terceira causa principal de morte por câncer. Em 2018, mais de 1 milhão casos novos de câncer gástrico foram diagnosticados globalmente, e cerca de 783.000 pessoas foram mortas por esta doença¹. A incidência e a mortalidade do câncer gástrico permanecem muito elevadas nos países asiáticos do nordeste^2,3. Apesar de avanços significativos no campo da terapêutica oncológica, o prognóstico de pacientes com câncer gástrico avançado permanece pobre, com uma taxa de sobrevida de cinco anos de aproximadamente 25%

Protocolo

Este estudo humano foi aprovado pelo Conselho de ética institucional da Sun Yat-Sen University Cancer Center (SYSUCC, Guangzhou, China). O estudo animal foi aprovado pelo Comitê institucional de cuidados e uso de animais da Universidade Sun Yat-Sen. Nota: todos os experimentos foram realizados em conformidade com as leis pertinentes e diretrizes institucionais, incluindo a diretriz para proteção de exposição ocupacional contra patógenos transmitidos pelo sangue.

1. preparação da amostra

1. Obter tecidos de câncer gástrico (P0 = passagem 0) diretamente da operação. O espécime do tumor deve ser maior do que 0,5 cm³.

Resultados

Aqui, os tecidos tumorais de uma operação foram preservados em solução de estoque até o próximo passo. Dentro de 4 horas, os tecidos tumorais foram cortados em pedaços pequenos e implantados nos flancos dorsais de camundongos NSG que haviam sido anestesiados com algodão embebido em isoflurano. Tumores maiores que 1 cm³ poderiam ser ressecados para implantação em camundongos novos (Figura 1) ou cortados com cuidado e preservados em nitrogênio líquido seguindo o protocolo. Neste est.......

Discussão

O câncer gástrico é uma doença agressiva com opções terapêuticas limitadas; assim, os modelos de câncer gástrico tornaram-se um recurso crítico para viabilizar estudos funcionais de pesquisa com tradução direta para a clínica^4,8,17. Aqui, nós descrevemos os métodos e o protocolo de estabelecer modelos do cancro gastric PDX e linhas de pilha preliminares. É importante ressaltar que as características morfológicas e biológicas dos.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
40 μ m Cell Strainer	Biologix, Shandong, China	15-1040
Microscópio Biológico	OLYMPUS, Tóquio, Japão	OLYMPUS CKX41
Centrifuge	Eppendorf, Mittelsachsen, Alemanha.	5427R
CO2 Incubadora	Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, Califórnia, EUA	HERACELL 150i
DPBS	Basalmedia Technology, Xangai, China	L40601
Armário de água eletrotermostático	Yiheng, Xangai, China	DK-8AXX
Soro bovino fetal	Wisent Biotechnology, Vancouver, Canadá	86150040
Isoflurano	Baxter, China	CN2L9100
Kit de tecido vivo Kit Cryo Celliver	Biotechnology, Xangai, China	LT2601
Kit de descongelamento de tecido vivo	Celliver Biotechnology, Xangai, China	LT2602
NSG	Biocytogen, Pequim, China	B-CM-002-4-5W
Penicilin& estreptomicina	Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, Califórnia, EUA	15140122
Tampão de lise de glóbulos vermelhos	Solarbio, Pequim, China	R1010
RPMI-1640 médio	Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, Califórnia, EUA	8118367
Agulhas de sutura cirúrgica com fio	LingQiao, Ningbo, China	3/8 arco 4&vezes; 10
moldes e lâminas auxiliares processadas por tecidos	Celliver Biotechnology, Xangai, China	LT2603
Tripsina-EDTA	Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, Califórnia, EUA	2003779
colagenase tipo 1	Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, Califórnia, EUA	17100017