Aqui descrevemos um protocolo passo-a-passo de desbandada cirúrgica de aorta no modelo de camundongos bem estabelecido de constrição aórtica. Este procedimento não só permite estudar os mecanismos subjacentes à remodelação reversa ventricular esquerda e à regressão da hipertrofia, mas também testar novas opções terapêuticas que possam acelerar a recuperação do miocárdio.
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Artigo de método
Estudando remodelagem reversa ventricular esquerda por debandagem aórtica em roedores
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Para entender melhor a remodelagem reversa ventricular esquerda (LV) (RR), descrevemos um modelo de roedor no qual, após a remodelação de LV induzida por banda aórtica, os ratos passam por RR após a remoção da constrição aórtica. Neste artigo, descrevemos um procedimento passo-a-passo para realizar uma debandagem aórtica cirúrgica minimamente invasiva em camundongos. A ecocardiografia foi posteriormente utilizada para avaliar o grau de hipertrofia cardíaca e disfunção durante a remodelação de LV e RR e determinar o melhor tempo para a debandagem aórtica. Ao final do protocolo, foi realizada avaliação hemodinâmica terminal da função cardíaca e coleta de amostras para estudos histológicos. Mostramos que a debandada está associada a taxas de sobrevivência cirúrgica de 70-80%. Além disso, duas semanas após a debandada, a redução significativa da carga pós-onda ventricular desencadeia a regressão da hipertrofia ventricular (~20%) e fibrose (~26%), recuperação da disfunção diastólica avaliada pela normalização do preenchimento ventricular esquerdo e das pressões diastólicas finais (E/e' e LVEDP). A debandagem aoórtica é um modelo experimental útil para estudar LV RR em roedores. A extensão da recuperação do miocárdio é variável entre os sujeitos, portanto, imitando a diversidade de RR que ocorre no contexto clínico, como a substituição da válvula aórtica. Concluímos que o modelo de banda/debandada aórtica representa uma ferramenta valiosa para desvendar novas percepções sobre os mecanismos da RR, ou seja, a regressão da hipertrofia cardíaca e a recuperação da disfunção diastólica.
Introdução
A constrição da aorta transversal ou ascendente no camundongo é um modelo experimental amplamente utilizado para hipertrofia cardíaca induzida por sobrecarga de pressão, disfunção diastólica e sistólica e insuficiência cardíaca1,2,3,4. A constrição aórtica inicialmente leva à hipertrofia concêntrica do ventrículo esquerdo compensado (LV) para normalizar o estresse da parede1. No entanto, sob certas circunstâncias, como a sobrecarga cardíaca prolongada, essa hipertrofia é insuficiente para diminuir o estresse da parede....
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Protocolo
Todos os experimentos em animais estão em conformidade com o Guia de Cuidado e Uso de Animais de Laboratório (NNI Publicação nº 85-23, revisado em 2011) e a lei portuguesa sobre o bem-estar animal (DL 129/92, DL 197/96; P 1131/97). As autoridades locais competentes aprovaram este protocolo experimental (018833). Os camundongos C57B1/J6 masculinos de sete semanas foram mantidos em gaiolas apropriadas, com um ambiente regular de ciclo claro-escuro de 12/12 horas, uma temperatura de 22 °C e 60% de umidade com acesso à água e um anúncio padrão de dieta libitum.
1. Preparação do campo cirúrgico
- Desinfete o local de operação com 70% de ....
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Resultados
Sobrevivência pós-operatória e tardia
A sobrevida perioperatória do procedimento de banda é de 80% e a mortalidade durante o primeiro mês é tipicamente <20%. Como mencionado anteriormente, o sucesso da cirurgia de desbandada depende de quão invasiva foi a cirurgia anterior. Após uma curva de aprendizado, a taxa de mortalidade durante os procedimentos de debandada é de cerca de 25%. Para esta mortalidade, a maioria dos óbitos durante o procedimento cirúrgico, incluindo a ruptura da aorta ou do átrio.......
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Discussão
O modelo aqui proposto imita o processo de remodelação de LV e RR após banda aórtica e debandada, respectivamente. Portanto, representa um excelente modelo experimental para avançar nosso conhecimento sobre os mecanismos moleculares envolvidos na remodelação adversa da LV e testar novas estratégias terapêuticas capazes de induzir a recuperação miocárdia desses pacientes. Este protocolo detalha passos sobre como criar um modelo animal roedor de banda aórtica e debandada com uma técnica cirúrgica minimamente invasiva e alt.......
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Divulgações
Os autores não têm conflito de interesses.
Agradecimentos
Os autores agradecem à Fundação Portuguesa de Ciência e Tecnologia (FCT), União Europeia, Quadro de Referência Estratégica Nacional (QREN), Fundo Europeu de Desenvolvimento Regional (FEDER) e Programa Operacional Factores de Competitividade (COMPETE) pelo financiamento da unidade de pesquisa da UnIC (UID/IC/00051/2013). Este projeto é apoiado pela FEDER por meio do COMPETE 2020 – Programa Operacional Competitividade E Internacionalização (POCI), projeto DOCNET (NORTE-01-0145-FEDER-000003), apoiado pelo Programa Operacional Norte Portugal (NORTE 2020), sob o acordo de parceria Portugal 2020, por meio do Fundo Europeu de Desenvolvimento Regional (ERDF), o projeto NETDIA....
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Lanças de absorção | FST | 18105-03 | Para absorver fluidos durante a cirurgia |
| Lâminas | FST | 10011-00 | Para realizar a incisão na pele |
| Buprenorfina | Buprelief | Analgesia | |
| droga Catutery | FST | 18010-00 | Para evitar exsanguinação |
| Dicas de catutery | FST | 18010-01 | Para evitar cotonete de exsanguinação |
| Johnson's | Para absorver fluidos durante a cirurgia | ||
| Creme depilatório | Veet | Para delipatar o animal | |
| Capa de mesa de centro cirúrgico descartável | MEDKINE | DYND4030SB | Para cobrir a área cirúrgica |
| Sonda de eco | Siemens | Sequoia 15L8W | Aquisição de sinal de ultrassom |
| Ecocardiógrafo | Siemens | Acuson Sequoia C512 | Aquisição de sinal de ultrassom |
| Monitor de CO2 expirado | Kent Scientific | CapnoStat | Para controlar a saturação do gás de expiração |
| Fórceps/Pinças | F.S.T | 11255-20 | Para dissecar os tecidos e a aorta |
| Fórteses/Pinças | F.S.T | 11272-30 | Para dissecar os tecidos e a aorta |
| Fórteses/Pinças | F.S.T | 11151-10 | Para dissecar os tecidos e a aorta |
| Fórceps/pinças | F.S.T | 11152-10 | Para dissecar os tecidos e a aorta |
| Sistema gasoso | Penlon Sigma Delta | Para anestesia e ventilação mecânica | |
| Hemostáticos | F.S.T | 13010-12 | Para segurar a sutura antes de apertar a aorta |
| Hemostáticos | F.S.T | 13011-12 | Para segurar a sutura antes de apertar a aorta |
| Auxiliares de ligadura | F.S.T | 18062-12 | Para colocar uma sutura ao redor da aorta |
| Afastador magnético | F.S.T | 18200-20 | Para ajudar a manter o animal em uma posição adequada |
| Porta-agulha | F.S.T | 12503-15 | Para suturar o animal |
| Agulha 26G | B-BRAUN | Para servir como molde de diâmetro de constrição aórtica | |
| Oxigênio | Ar Líquido | Para anestesia e ventilação mecânica | |
| Sutura de polipropileno | Vycril | W8304/W8597 | Para suturar o animal e fazer a constrição |
| iodopovidona | Betadine® | Skin anti-séptico | |
| PowerLab | Instrumentos Millar | ML880 PowerLab 16/30 | PV loop Aquisição de sinal |
| Oxímetro de pulso | Kent Scientific | MouseStat | Para controlar a frequência cardíaca e a saturação sanguínea |
| Software PVAN | Millar Instruments | Para analisar os dados hemodinâmicos | |
| loop cathether | Millar instruments | SPR-1035. 1.4 F | Afastador de aquisição de sinal de alça PV |
| F.S.T | 17000-01 | Para fornecer uma melhor visão geral da aorta Cabo do | |
| bisturi | F.S.T | 10003-12 | Para realizar a incisão na pele |
| Tesoura | F.S.T | 15070-08 | Para cortar a sutura na cirurgia de debanding |
| Tesoura | F.S.T | 14084-09 | Para cortar outro material durante a cirurgia, por exemplo, sutura, papper |
| Sevoflurane | Baxter | 533-CA2L9117 | |
| Módulo de controle de temperatura | Kent Scientific | RightTemp | Para controlar a temperatura corporal do animal |
| Ventilador | Kent Scientific | PhysioSuite | Para ventilar o animal |
| Banho-maria | Thermo Scientific™ | TSGP02 | Para manter a temperatura da água adequada para aquecer os catethers de loop PV |
Referências
- Arany, Z., et al. Transverse aortic constriction leads to accelerated heart failure in mice lacking PPAR-gamma coactivator 1alpha. Proceedings of the National Academy of Science U. S. A. 103 (26), 10086-10091 (2006).
- Tavakoli, R., Nemska, S., Jamshidi, P., Gassmann, M., Frossard, N.
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Reimpressões e permissões
