Este protocolo descreve um método colorimétrico novo para a deteção antimaláricos do primaquina (pmq) em urinas sintéticos e em serums humanos.
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Artigo de método
Reação aperfeiçoada de Griess para a determinação UV-VIS e nu-olho do Primaquine anti-malarial
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
A primaquina (PMQ), uma importante droga antimalarial, tem sido recomendada pela Organização Mundial de saúde (OMS) para o tratamento de infecções que ameaçam a vida causadas por P. vivax e ovale. No entanto, o PMQ tem efeitos adversos indesejados que levam à hemólise aguda em pacientes com deficiência de glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD). Há uma necessidade de desenvolver métodos simples e confiáveis para a determinação do PMQ com o objetivo de monitoramento de dosagem. No início de 2019, temos relatado uma abordagem baseada em UV-VIS e olho nu para quantificação colorimétrica PMQ. A detecção foi baseada em uma reação de Griess-like entre o PMQ e as anilinas, que podem gerar produtos azo coloridos. O limite de detecção para a medição direta de PMQ em urina sintética está na faixa de nanomolar. Além disso, este método mostrou o grande potencial para a quantificação de PMQ das amostras humanas do soro em concentrações clìnica relevantes. Neste protocolo, descreveremos os detalhes técnicos sobre as sínteses e caracterização de produtos azo coloridos, a preparação do reagente e os procedimentos para determinação do PMQ.
Introdução
O pmq é uma das mais importantes drogas antimaláricas, ele funciona não apenas como um schizontocida tecidual para prevenir a recidiva, mas também como um gametocitocide para interromper a transmissão da doença1,2,3,4. A hemólise intravascular é um dos efeitos colaterais relacionados ao PMQ, que se torna extremamente grave naqueles deficientes em G6PD. Sabe-se que a desordem genética de G6PD é distribuída no mundo inteiro com uma freqüência do gene entre 3-30% em áreas endêmicas da malária. A gravidade da fraqueza do pmq depende do grau de d....
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Protocolo
1. síntese de AZOs coloridos
- Em um balão de fundo redondo de 25 mL (RBF), dissolva anilina (0,1 mmol) e bisfosfato de primaquina (45,5 mg, 0,1 mmol) em 10 mL de solução de H3po4 (5% v/v). Põr o RBF sobre um banho de gelo, adicione uma barra do stir com o tamanho apropriado na solução, e põr o RBF sobre uma placa do stir.
Nota: Para a síntese de azo 3G (Figura 2), utilizar 0,2 mmol de primaquina bisfosfato. - Dissolver NaNO2 (6,9 mg, 0,1 mmol) em 1 ml de água arrefecida e, em seguida, adicionar à mistura de reacção Dropwise. Retire o banho de gelo e man....
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Resultados
Para otimizar as condições de reação (Figura 2), várias anilinas foram usadas para o casal com pmq através da reação de Griess. Nós alcançamos uma série de e com cores diferentes. Verificou-se que anilinas com um elétron doar substituente pode causar uma mudança de vermelho no espectro de absorção UV-VIS. Os cálculos teóricos foram realizados por meio da teoria funcional da densidade dependente do tempo (TD-DFT). Conforme apresentado na Figura 2a, o resultado do.......
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Discussão
Nós descrevemos um método colorimétrico para a quantificação conveniente de PMQ. É potencialmente o método de corrente mais simples e rentável. Mais importante, este método oferece permite a medição de PMQ com base no olho nu sem usar nenhum equipamento.
A reação aperfeiçoada de Griess para a deteção de PMQ pode gerar um azo da cor vermelha com uma absorção máxima em 504 nanômetro. A influência potencial da absorção UV-VIS de biomoléculas endógenas é limitada, fazendo assim o método prometedor.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a declarar.
Agradecimentos
Os autores reconhecem a concessão do start-up da Universidade de Guangzhou da medicina chinesa e do projeto de treinamento da pesquisa científica da juventude de GZUCM (2019QNPY06). Nós igualmente reconhecemos o centro médico da pesquisa de Lingnan da Universidade de Guangzhou da medicina chinesa para o apoio em facilidades.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 4-Metoxianilina | Aladdin | K1709027 | |
| 2,4-Dimetoxianilina | Heowns | 10154207 | |
| 3,4-Dimetoxianilina | Bidepharm | BD21914 | |
| 4-Metilanilina | Adamas-beta | P1414526 | |
| 4-Nitroanilina | Macklin | C10191447 | |
| 96-poços, Flat Botton | Labserv | ||
| Gaussian@16 software | Gaussian, Inc | Versão: x86-64 habilitado para SSE4_2 / Linux | |
| Ácido clorídrico | GCRF | 20180902 | |
| esboço de Marvin (software) | Edição gratuita CHEMAXON | : 15.6.29 | |
| Ácido fosfórico | Macklin | C10112815 | |
| Primaquina bisifosfato | 3A Produtos Químicos | ||
| sódio | Alfa Aesar | 5006K18R | |
| Sulfonamidas | TCI (shanghai) | GCPLO-BP | |
| Varioskan LUX Leitor de placas | Thermo Fisher | fornecido com o software SkanIt 4.1 |
Referências
- Fernando, D., Rodrigo, C., Rajapakse, S. Primaquine in vivax malaria: an update and review on management issues. Malar Journal. 10, 351(2011).
- Deng, C., et al. Large-....
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Reimpressões e permissões
