Ensaio Light Spot-Based para análise de Drosophila larval Phototaxis

Resumo

Este protocolo introduz um ensaio do luz-ponto para investigar o comportamento phototática da Drosophila larval. Neste ensaio, um ponto luminoso é gerado como a estimulação clara, e o processo da vacância clara larval é gravado por um sistema Light-based infravermelho da imagem latente.

Resumo

As larvas de Drosophila melanogaster mostram um comportamento óbvio de evitar a luz durante o estágio de forrageamento. Os Phototaxis de Drosophila larval podem ser usados como um modelo para estudar o comportamento da vacância animal. Este protocolo introduz um ensaio do luz-ponto para investigar o comportamento phototática larval. A set-up experimental inclui duas partes principais: um sistema de estimulação visual que gera o ponto de luz, e um sistema de imagem à base de luz infravermelha que registra o processo de evasão de luz larval. Este ensaio permite o rastreamento do comportamento da larva antes de entrar, durante o encontro, e depois de deixar o ponto de luz. Detalhes de movimento larval incluindo desaceleração, pausa, fundição de cabeça e torneamento podem ser capturados e analisados usando este método.

Introdução

As larvas de Drosophila melanogaster mostram um comportamento óbvio de evitar a luz durante o estágio de forrageamento. Drosophila larval Phototaxis tem sido investigação, especialmente nos últimos 50 anos^{1,2,3,4,5,6,7 ,8}. Nos últimos anos, apesar do fato de que 1) muitos neurônios que mediando a vacância clara larval foram identificados^4,

Protocolo

1. preparação de larvas de Drosophila

1. Prepare o meio padrão constituído por farinha de milho cozida (73 g), Agar (5,6 g), farelo de soja (10 g), levedura (17,3 g), xarope (76 mL) e água (1000 mL).
2. Levante todas as moscas a 25 ° c no meio padrão em um quarto com um ciclo claro/escuro de 12 h/12 h.

2. preparação de placas de agar

1. Prepare 1,0% de solução de agar. Pesar 3 g de agar em um copo de 500 mL com um equilíbrio, em seguida, adicione 300 mL de água destilada. Coloc um papel da folha sobre o disjuntor para impedir que a água evoque. Aqueça o copo em um microondas para ferver.
2. Tire o ....

Resultados

De acordo com o protocolo, o ensaio de ponto de luz foi utilizado para investigar o comportamento de evitação de luz de larvas de terceiro instar que foram levantadas a 25 ° c em meio padrão em uma sala com um ciclo claro/escuro de 12 h/12 h. Uma única larva de w¹¹¹⁸ foi testada usando o ensaio do ponto claro em 25,5 ° c. A intensidade luminosa média do ponto luminoso gerado por um diodo emissor de luz de 460 nanômetro era 0,59 μW/cm². Todo o processo de larval entrando e saindo do ponto d.......

Discussão

Este protocolo apresenta o ensaio de ponto de luz para testar a capacidade de larvas de Drosophila para escapar da luz. Este ensaio permite rastrear o comportamento das larvas antes de entrar, durante o encontro, e depois de deixar um ponto de luz. Detalhes do movimento larval podem ser capturados e analisados. O ensaio do ponto claro é muito simples e possui a pratiqubilidade forte. O custo de todo o dispositivo não é alto. No experimento, a luz LED é usada como fonte de luz. Ele pode ser substituído por fontes.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
850 nm ± LED gerador de luz infravermelha de 3 nm	Thorlabs, EUA	PM100A	Sensores compatíveis: Fotodiodo e Thermal Faixa de potência ópticaa: 100 pW a 200 W Faixa de comprimento de onda do sensor disponívela: 185 nm-25 μ m Taxa de Atualização do Display: 20 Hz Largura de Bandaa: DC-100 kHz Alcance do Sensor de Fotodiodob: 50 nA-5 mA Alcance do Sensor de Termopilhab: 1 mV-1 V
AC para DC conversor	Thorlabs, USA	S120VC	Tamanho da Abertura: Ø 9,5 mm Faixa de comprimento de onda: 200-1100 nm Faixa de potência: 50 nW-50 mW Tipo de detector: Fotodiodo Si (UV Extended) Linearidade: ± 0,5% Incerteza de medição: ± 3% (440-980 nm), ± 5% (280-439 nm), ± 7% (200-279 nm, 981-1100 nm)
filtro passa-banda	Thorlabs, EUA	DC2100	LED Faixa de corrente: 0-2 A Resolução de corrente LED: 1 mA Precisão de corrente LED: ± 20 mA LED Tensão Direta: 24 V Faixa de Frequência de Modulação: 0-100 kHz Onda Senoidal Modulação: Luz
LED azul colimada arbitrária	ELP, China	USBFHD01M	Resolução Máxima: 1920X1080 F6.0 mm Sensor: 1/2.7" CMOS OV2710
Console compacto do medidor de potência	Ocean Optics, EUA	USB2000+(RAD)	Dimensões: 89,1 mm x 63,3 mm x 34,4 mm Peso: 190 g Detector: Sony ILX511B (matriz CCD de silício linear de 2048 elementos) Faixa de comprimento de onda: 200-850 nm Tempo de integração: 1 ms - 65 segundos (20 segundos típicos) Faixa dinâmica: 8,5 x 10^7 (sistema); 1300:1 para uma única aquisição Relação sinal-ruído: 250:1 (sinal completo) Ruído escuro: 50 contagens RMS Grade: 2 (250 - 800 nm) Fenda: SLIT-50 Lente de coleta do detector: L2 Classificação de pedidos: OFLV-200-850 Resolução óptica: ~2,0 nm FWHM Luz difusa: < 0,05% a 600 nm; < 0,10% a 435 nm Conector de fibra óptica: SMA 905 a 0,22 abertura numérica fibra de fio único
Driver de LED de alta potência	Minhongshi, China	MHS-48XY	Tensão de trabalho: DC12V Comprimento de onda central: câmera
web de alta resolução	Thorlabs, EUA	MWWHL4	Cor: Branco quente Temperatura de cor correlacionada: 3000 K Corrente de teste para potência típica do LED: 1000 mA Corrente Máxima (CW): 1000 mA Largura de Banda (FWHM): N/A Potência Elétrica: 3000 mW Ângulo de Visão (Ângulo Total): 120? Tamanho do Emissor: 1 mm x 1 mm Vida Útil Típica: >50 000 h Temperatura de Operação (Sem Condensação): 0 a 40 > C Temperatura de armazenamento: -40 a 70 > C Grupo de Riscoa: RG1 – LED de baixo risco
branco quente	Mega-9, China	BP850/22K	Ø 25,4(+0~-0,1) mm Largura de banda: 22± 3nm Transmitância de pico: 80% Comprimento de onda central: 850nm± 3nm
Espectrômetro	Noel Danjou	Amcap9.22	AMCap  é um aplicativo de captura de fotos e vídeos com recursos avançados de visualização e gravação. É um aplicativo de desktop projetado para computadores que executam o Windows 7 SP1 ou posterior. A maioria Vídeo para Windows e  Dispositivos compatíveis com DirectShow são suportados, sejam eles webcams baratas ou placas de captura de vídeo avançadas.
Sensor de potência de fotodiodo padrão	Super Dragon, China	YGY-122000	Entrada: AC 100-240V~50/60Hz 0.8A Saída: DC 12V 2A
Sensor de potência térmica	Thorlabs, EUA	M470L3-C1	Cor: Azul Comprimento de onda nominal: 470 nm Largura de banda (FWHM): 25 nm Corrente máxima (CW): 1000 mA Tensão direta: 3,2 V Potência elétrica (máx.): 3200 mW Tamanho do emissor: 1 mm x 1 mm Vida útil típica: 100 000 h Temperatura de Operação (Sem Condensação): 0 a 40 & C Temperatura de armazenamento: -40 a 70 > Grupo de Risco C b: GR2 – Grupo de Risco Moderado
Sensor de potência térmica	Thorlabs, EUA	S401C	Faixa de comprimento de onda: 190 nm-20 μ m Faixa de potência óptica:10 μ W-1 W(3 Wb) Tamanho da abertura de entrada: Ø 10 mm Área ativa do detector: 10 mm x 10 mm Densidade máxima de potência óptica: 500 W/cm2 (Méd.) Linearidade: ± 0,5%

de 850nm