Este artigo descreve os protocolos usados para produzir uma nova plataforma de entrega de vacinas, "polibolhas", para permitir a liberação de estouro atrasada. Poliésteres incluindo poli (ácido láctico-coglicólico) e policaprolactona foram usados para formar os polibolhas e pequenas moléculas e antígenos foram usados como carga.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Produção de plataforma de entrega de vacinas de vacinação de infravermelho próximo e infravermelho
Neste artigo
Resumo
Resumo
Estratégias de entrega de vacinas que podem limitar a exposição da carga a solventes orgânicos, ao mesmo tempo em que permitem novos perfis de liberação, são cruciais para melhorar a cobertura vacinal em todo o mundo. Aqui, uma nova plataforma de liberação de vacinas injetável, ultravioleta e retardada, que permite a entrega de vacinas chamada polibolhas, é introduzida. A carga foi injetada em polibolhas à base de poliéster que foram formadas em uma solução aquosa baseada em carboxymethycellulose de 10%. Este artigo inclui protocolos para manter a forma esférica dos polibolhas e otimizar a colocação e retenção de carga para maximizar a quantidade de carga dentro dos polibolhas. Para garantir a segurança, o teor de solventes clorados dentro dos polibolhas foi analisado por meio da análise de ativação de nêutrons. Os estudos de liberação foram realizados com pequenas moléculas como carga dentro do polibole para confirmar a liberação retardada da explosão. Para mostrar ainda mais o potencial de entrega sob demanda da carga, nanorods de ouro foram misturados dentro da concha de polímero para permitir a ativação a laser quase infravermelha.
Introdução
A cobertura vacinal limitada resulta na morte de 3 milhões de pessoas especificamente causadas por doenças preveníveis por vacinas1. Condições inadequadas de armazenamento e transporte levam ao desperdício de vacinas funcionais e, portanto, contribuem para a redução da imunização global. Além disso, a vacinação incompleta por não aderir aos calendários vacinais necessários também causa cobertura vacinal limitada, especificamente nos países em desenvolvimento2. São necessárias múltiplas visitas ao pessoal médico dentro do período recomendado para o recebimento de vacinas de reforço, limitando assim o percentual da populaç....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
1. Síntese de triacrilato de policalicona (PCLTA)
- Seque 3,2 mL de 400 Do polycaprolacyone (PCL) triol durante a noite a 50 °C em um frasco traseiro redondo aberto de 200 mL e K2CO3 em um frasco de vidro a 90 °C.
- Misture o triol com 6,4 mL de diclorometano (DCM) e 4,246 g de carbonato de potássio (K2CO3) sob argônio.
- Misture 2,72 mL de cloreto de acriloyl em 27,2 mL de DCM e adicione dropwise à mistura de reação no frasco acima de 5 min.
- Cubra a mistura de reação com papel alumínio e deixe-a intacta à temperatura ambiente por 24 h sob argônio.
- Após 24 horas, filtre a mistura d....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
Os polibolhas foram amplamente caracterizados por MEIO DE SEM e NAA. A carga foi centrada com sucesso para resultar em uma liberação de explosão atrasada. Os polibolhas também foram ativados com sucesso a laser devido à presença de AuNRs dentro dos polibolhas.
Caracterização de poliboles
Os polibolhas injetados em uma solução aquosa sem CMC resultaram em um polibole achatado devido ao seu contato com a parte .......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Tecnologias e desafios atuais
Micro e nanopartículas baseadas em emulsão têm sido comumente usadas como portadores de medicamentos. Embora a cinética de liberação da carga desses dispositivos tenha sido extensivamente estudada, controlar a cinética de liberação de rajadas tem sido um grande desafio11. A versatilidade e funcionalidade da carga também é limitada em sistemas baseados em emulsão devido à exposição da carga a solventes aquosos e orgânicos em excesso. A carga à base .......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Gostaríamos de agradecer ao Dr. Bryan E. Tomlin afiliado ao laboratório de análise elementar dentro do departamento de química da TAMU que ajudou na análise de ativação de nêutrons (NAA).
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Solução de substrato de ensaio imunoenzimático de ultra tetrametilbezidina (TMB) (ELISA) de 1 etapa | Thermo scientific | 34028 | |
| 2-Hidroxi-2-metilpropiofenona | TCI AMERICA | H0991 | |
| Solução de parada de 450 nm para substrato TMB | Abcam | ab17152 | |
| Cloreto de acriloil | Sigma Aldrich | A24109-100G | |
| Acriflavina | Chem-Impex International | 22916 | |
| Éter etílico anidro | Fisher Chemical | E138-500 | |
| Anti-HIV1 gp120 anticorpo conjugado à peroxidase de rábano (HRP) | |||
| Albumina de soro bovino (BSA) | Fisher BioReagents | BP9700100 | |
| BSA-CF488 conjugados de corante | Invitrogen | A13100 | |
| Ácido bromossalicílico | Acros Organics | AC162142500 | |
| Carboximetilcelulose (CMC) | Millipore Sigma | 80502-040 | |
| Brometo de Centrmônio (CTAB) | MP Biomedicals | ICN19400480 | |
| Clorofórmio | Fisher Chemical | C2984 | |
| Tampão de revestimento | Abcam | ab210899 | |
| Diclorometano (DCM) | Sigma Aldrich | 270997-1L | |
| Éter dietílico | Fisher Chemical | E1384 | |
| Dodeacil Amina | Acros Organics | AC117665000 | |
| Cloridrato de doxorrubicina | Fisher BioReagents | BP251610 | |
| ácido L-ascórbico | Acros Organics | A61 100 | |
| Legato 100 Bomba de seringa | KD Scientific | 14 831 212 | |
| mPEG tiol | Laysan Bio | NC0702454 | |
| Leite em pó desnatado | Andwin Scientific | NC9022655 | |
| Carbonato de potássio | Acros Organics | AC424081000 | |
| Tampão salino fosfato | Fisher BioReagents | BP3991 | |
| (Poli(caprolactona) | Sigma Aldrich | 440744-250G | |
| (Poli(caprolactona) triol | Acros Organics | AC190730250 | |
| Poli (ácido lático-co-glicólico) diacrilato | CMTec | 280050 | |
| Carbonato | de potássio Acros Organics | AC424081000 | |
| HIV1 recombinante gp120 + gp41 proteína | Abcam | ab49054 | |
| Nitrato de prata | Acros Organics | S181 25 | |
| Sódio Borohidreto | Fisher Chemical | S678-10 | |
| Ácido tetracloroáurico | Fisher Chemical | G54-1 | |
| Trealose | Acros Organics | NC9022655 | |
| Trietilamina | Acros | Organics AC157910010 |
Referências
- World Health Organization. Global Immunization: Worldwide Disease Incidence. , Children's Hospital of Philadelphia. https://www.chop.edu/centers-programs/vaccine-education-center/global-immunization/diseases-and-vaccines-world-view (2018).
- Paul, A., Bera, M., Gupta, P., Singh, N. D. P. o-Hydroxycinnamate for sequential photouncaging of two different functional groups and its application in releasing c....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
