Este artigo apresenta procedimentos experimentais para avaliação de prejuízos de memória em camundongos epilépticos induzidos por pilocarpina. Este protocolo pode ser usado para estudar os mecanismos fisiosiológicos do declínio cognitivo associado à epilepsia, que é uma das comorbidades mais comuns na epilepsia.
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Artigo de método
Avaliação da função de memória em camundongos epilépticos induzidos por pilocarpina
Neste artigo
Resumo
Resumo
O comprometimento cognitivo é uma das comorbidades mais comuns na epilepsia do lobo temporal. Para recapitular o declínio cognitivo associado à epilepsia em um modelo animal de epilepsia, geramos camundongos epilépticos crônicos tratados com pilocarpina. Apresentamos um protocolo para três diferentes testes comportamentais usando esses camundongos epilépticos: localização de objetos novos (NL), reconhecimento de objetos novos (NO) e testes de separação de padrões (PS) para avaliar o aprendizado e a memória de lugares, objetos e contextos, respectivamente. Explicamos como definir o aparelho comportamental e fornecer procedimentos experimentais para os testes de NL, NO e PS após um teste de campo aberto que mede as atividades basais locomotor dos animais. Descrevemos também as vantagens técnicas dos testes de NL, NO e PS em relação a outros testes comportamentais para avaliação da função de memória em camundongos epilépticos. Finalmente, discutimos possíveis causas e soluções para ratos epilépticos que não conseguem fazer 30 s de bom contato com os objetos durante as sessões de familiarização, o que é um passo fundamental para testes de memória bem sucedidos. Assim, este protocolo fornece informações detalhadas sobre como avaliar os prejuízos de memória associados à epilepsia usando camundongos. Os testes DE NL, NO e PS são ensaios simples e eficientes que são apropriados para a avaliação de diferentes tipos de memória em camundongos epilépticos.
Introdução
Epilepsia é uma doença crônica caracterizada por convulsões espontâneas recorrentes1,,2,3. Como convulsões repetitivas podem causar anormalidades estruturais e funcionais no cérebro1,,2,3, a atividade convulsiva anormal pode contribuir para a disfunção cognitiva, que é uma das comorbidades associadas à epilepsia mais comuns4,,5,6. Ao contrário dos eventos de convulsão crônica, que são transi....
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Protocolo
Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética da Universidade Católica da Coreia e foram realizados de acordo com o Guia Nacional de Saúde para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório (NNI Publicações nº 80-23).
1. Novo teste de localização de objeto (NL)
- Prepare o epiléptico C57BL/6 ou camundongos transgênicos 4-6 semanas após a injeção de pilocarpina.
NOTA: As convulsões agudas foram induzidas pela injeção de pilocarpina intraperitoneal (IP), seguindo o protocolo detalhado em nosso relatório anterior14. - Transfira os camundongos epilépticos da sala de reprodução p....
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Resultados
Um cronograma experimental geral e uma configuração para avaliação da função cognitiva são mostrados na Figura 1. Seis semanas após a introdução de convulsões agudas induzidas por pilocarpina, os camundongos foram submetidos aos testes de NL, NO e PS nessa ordem separados por períodos de descanso de 3 dias entre os testes(Figura 1A). Para o teste NL, dois objetos idênticos foram colocados no campo aberto durante a sessão de familiarização (F1), e no dia seguinte.......
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Discussão
Este trabalho descreve procedimentos experimentais para avaliação da função cognitiva em camundongos com epilepsia crônica. Muitos paradigmas de teste comportamental diferentes são usados para avaliar funções de aprendizagem e memória em camundongos18. O labirinto de água morris, labirinto de braço radial, labirinto Y, condicionamento de medo contextual e testes baseados em objetos são os testes comportamentais mais usados e fornecem resultados confiáveis. Entre eles, os testes de NL, NO e PS são .......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Agradecemos ao Dr. Jae-Min Lee pelo apoio técnico. Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Pesquisa da Coreia (NRF) financiado pelo governo coreano (NRF-2019R1A2C1003958, NRF-2019K2A9A2A08000167).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Seringa de 1 ml | Calço Sung-shim | Use com a agulha de calibre 26 ou 30 | |
| 70% Etanol | Duksan | UN1170 | Spray para limpar a caixa e objetos |
| cortina | Para evitar pistas visuais desnecessárias | ||
| Violeta Cresyl | Sigma | C5042 | de coloração violeta Cresil |
| Leica | E21040041 | Para tecido seccionamento | |
| adesiva dupla face | Para a colocação firme dos objetos | ||
| Meio de montagem DPX | Sigma | 06522 | |
| série de etanol | Duksan | UN1170 | Fazer 100%, 95%, 90%, 80%, 70% de soluções de etanol |
| placa de piso com padrões de grade estreita | Leehyo-bio | Equipamento de experimento comportamental, tamanho da placa: 42,5 x 42,5 x 0,5 cm, tamanho da grade: 2,75 x Placa de piso de 2,75 cm | |
| com padrões de grade larga | Leehyo-bio | Equipamento de experimento comportamental, tamanho da placa: 42,5 x 42,5 x 0,5 cm, tamanho da grade: 5,5 x 5,5 cm | |
| iluminômetro | TES Electrical Electronic Corp. | 1334A | Para a medição da iluminação da sala (60 Lux) |
| Unidade de terapia intensiva | Thermocare | #W-1 | |
| cloridrato de cetamina | Yuhan | 7003 | Use para anestesiar o mouse para perfusão transcárdica |
| Lâmpada LED | Lungo | P13A-0422-WW-04 | Iluminação para os objetos |
| da sala de teste comportamentalBoneca de borracha, tubo de plástico de 50 ml, frasco de vidro Coplin, frasco em T de plástico, caixa de campo aberto de garrafa de vidro | |||
| Leehyo-bio | Equipamento de experimento comportamental, tamanho: 44 x 44 x 31 cm | ||
| toalha de papel | Yuhan-Kimberly | 47201 | Use para secar caixa de campo aberto e objetos |
| paraformaldeído | Merck Millipore | 104005 | Faça solução de 4% |
| cloridrato de pilocarpina | Sigma | P6503 | |
| Use para localizar os objetos na caixa de campo aberto | |||
| escopolamina nitrato de metila | Sigma | S2250 | Faça 10X estoque |
| Sistema inteligente 3.0 | Panlab | Sistema de rastreamento de vídeo | |
| cronômetro | Junso | JS-307 | Para a medição de atividades exploratórias de sacarose de camundongos |
| Sigma | S9378 | Para crioproteção de seções de tecido | |
| sal de hemissulfato de terbutalina | Sigma | T2528 | Faça 10X câmera de vídeo de estoque |
| (câmera CCD) | Vision | VCE56HQ-12 | Coloque a câmera diretamente acima da caixa de campo aberto |
| xilazina (Rompun) | Bayer coréia | KR10381 | Use para anestesiar o mouse para perfusão transcárdica |
| xileno | Duksan | UN1307 | Para Coloração violeta Cresyl |
Referências
- Chang, B. S., Lowenstein, D. H. Mechanisms of disease - Epilepsy. New England Journal of Medicine. 349 (13), 1257-1266 (2003).
- Scharfman, H. E. The neurobiology of epilepsy. Current Neurology and Neuroscience Report. 7 (4), 348-354 (2007).
- Rakhade, S. N., Jensen, F. E. ....
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Reimpressões e permissões
